小鼠血糖中药根碱、小檗碱、黄连煎剂等的降血糖功能检测方案(紫外分光光度)

药根碱、小檗碱、黄连煎剂及模拟方对小鼠血糖的影响 付燕1, 2，胡本容1，汤强1，付琴1，张庆业1，向继洲1 （1. 华中科技大学同济医学院 药理学系，湖北 武汉 430030；2. 广州市脑科医院，广东 广州 510000） 摘要：目的 研究药根碱（Jat）的降血糖作用，并比较Jat、小檗碱（Ber）、黄连煎剂（HLD）及模拟方（Ber+Jat）对小鼠血糖水平的影响。方法 采用薄层扫描法测定HLD中Ber和Jat的质量分数，并根据其比值配置模拟方。小鼠ip四氧嘧啶制备糖尿病模型，模型小鼠和正常小鼠均ig给予不同剂量Jat、Ber、HLD和模拟方，葡萄糖氧化酶法测定血糖。结果 Jat、Ber、HLD和模拟方均有不同程度的降低糖尿病和正常小鼠血糖的作用，HLD作用最强，Jat较同剂量Ber作用弱，模拟方与单用Ber作用相当。结论 黄连中可能还有除Ber和Jat之外的降血糖成分，以天然成分比例配伍Ber和Jat，未见明显协同或拮抗作用。 关键词：药根碱；小檗碱；黄连煎剂；血糖 中图分类号：R286.72 文献标识码：A 文章编号：0253-2670(2005)04-0548-04 Effect of jatrorrhizine, berberine, Huanglian Decoction and compound-mimic prescription on blood glucose in mice FU Yan1,2, HU Ben-rong1, TANG Qiang1, FU Qin1, ZHANG Qing-ye1, XIANG Ji-zhou1 (1. Department of Pharmacology, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, China; 2. Guangzhou Brain Hospital, Guangzhou 510000, China) 黄连性苦寒，主清胃火，自魏晋时代始，已有用黄连治疗消渴（基本属于现代医学的糖尿病）的记载。小檗碱（berberine, Ber）是黄连中的主要成分只有，能降低正常小鼠和四氧嘧啶致糖尿病小鼠的血糖[1]，并对Ⅱ型糖尿病有较好的疗效[2]。药根碱（jatrorrhizine, Jat）也是黄连所含的一种生物碱，与Ber化学结构非常相似。为探讨Jat是否也有降糖作用、黄连的降糖作用是否为Ber和Jat的综合作用、Ber和Jat之间是否又存在着相互作用等问题，本实验研究了Jat对小鼠的降糖作用，并对Jat、Ber、黄连煎剂（Huanglian Decocotion, HLD）及按Ber和Jat天然成分比值人工配制的模拟方（Ber+Jat）对小鼠血糖的影响进行了比较研究。 1 材料 1.1 药品与试剂：HLD的制备：四川产黄连40g（购自武汉同济医院药剂科）制成粗粉，加水适量煮沸30min，滤过，共煮3次，合并3次滤液，浓缩至40mL，即相当于含生药1g/mL，用时稀释至0.2g/mL。盐酸小檗碱，中国药品生物制品检定所，纯度>95%，批号200001；盐酸药根碱，中国药品生物制品检定所，纯度为98%，批号200004。根据薄层扫描法测定HLD、Ber和Jat的质量分数及比值，人工配制模拟方。四氧嘧啶：Sigam公司，批号A7413。苯、甲醇、异丙醇、醋酸乙酯等所用试剂均为分析纯。葡萄糖测定试剂盒：上海荣盛生物公司。 1.2 动物：昆明种小鼠，体重（20±2）g，雄性，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供。 1.3 仪器：日本岛津CD-9301薄层扫描仪，TU-1221紫外分光光度计（北京市通用仪器设备公司）。 2 方法 2.1 HLD中Ber和Jat质量3分数的测定：精密称取盐酸小檗碱5.00mg和盐酸药根碱1.00mg，分别置于10mL量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，得0.5mg/mL盐酸小檗碱对照品溶液和0.1mg/mL盐酸药根碱对照品溶液。将1g/mL HLD稀释至0.02g/mL，即得供试品溶液。展开剂：苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-水（6：3：3：1.5：0.5）。参照《中华人民共和国药典》2000年版一部方法，用微量点样器分别吸取1、2、3、4、5μL对照品溶液和5μL供试品溶液点在同一硅胶G薄板上，依法展开，取出晾干，扫描测定。 2.2 HLD给药剂量折算方法：经薄层扫描法测定HLD中含有Ber和Jat分别为0.455、0.095mg/mL，相当于生药中含Ber、Jat分别为2.27%、0.475%。按文献方法[1]中Ber的给药剂量50mg/kg折算成含有同量小檗碱的HLD给药剂量应为2 202mg/kg。 2.3 模拟方的配制方法：根据生药中约含有Ber 2.27%和Jat 0.475%，即Ber和Jat质量分数比例约为5：1，按此比例称取盐酸小檗碱和盐酸药根碱混合后配置成模拟方。 2.4 糖尿病动物模型制备及分组[3]：健康成年小鼠100只，禁食18h，除正常对照组10只小鼠ip生理盐水0.1mL/10g外，其余90只小鼠均ip四氧嘧啶250mg/kg。72h后小鼠眼眶取血，测定小鼠空腹血糖值。选择血糖值大于15.1mmol/L者即为糖尿病模型小鼠，随机分为6组：Jat 50、100mg/kg组；Ber 50mg/kg组；HLD生药2 202mg/kg（相当于Ber 50mg/kg和Jat 10mg/kg）组；模拟方（Ber 50mg/kg+Jat 10mg/kg）组；模型组（生理盐水0.1mL/10g），每组10只小鼠。各组ig给予相应剂量药物，连续5d，在末次给药后3h，眼眶采血测空腹血糖。 2.5 对正常小鼠血糖的影响：健康成年小鼠70只，禁食2h，随机分成7组：Jat25、50、100mg/kg组；Ber 50mg/kg组；HLD生药2 202mg/kg组；模拟方（Ber 50mg/kg+Jat 10mg/kg）组；正常对照（生理盐水0.1mL/10g）组，每组10只小鼠，各组ig给予相应剂量药物1次，给药后3h，眼眶采血测空腹血糖。 3 结果 3.1 HLD中Ber和Jat的质量分数测定结果：以峰面积（Y）为纵坐标，对照品质量（X）为横坐标，得Ber和Jat回归方程分别为Y=2 651X+89.171，r=1.000；Y=1 937.5X+32.239，r=0.997。Ber和Jat线性范围分别为0.5－2.5mg和0.1－0.5mg。供试品中Ber和Jat质量分数分别为0.455和0.095mg/mL，相当于生药中含Ber和Jat分别为2.27%、0.475%。 3.2 对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠血糖得影响：结果见表1。Jat、Ber、HLD及模拟方均有不同程度降低糖尿病小鼠血糖得作用，HLD效果最明显，模拟方组与Ber组影响差异无显著性，Jat较同剂量Ber降糖作用弱。 3.3 对正常小鼠血糖的影响：结果见表2。HLD、Ber、Jat及模拟方均有不同程度降低血糖作用，HLD效果最明显，模拟方组与Ber组影响差异无显著性，Jat较同剂量Ber降糖作用弱。 4 讨论 单味中药成分繁多，在明确各主要成分药理效应的基础上，寻找合理的中药成分配伍，发挥各成分间的协同作用，消除或减少某些成分的毒性或副作用，是加速中医药现代化，化繁为简的思路之一。黄连治疗糖尿病已有悠久的历史，疗效确切。Ber是黄连中的主要单体之一，临床和动物实验都证实Ber能降低血糖[4,5]，改善胰岛素抵抗[6]，并对Ⅱ型糖尿病有较好的疗效。Jat也是黄连中的一种异喹啉生物碱，为Ber的同系物。本实验证实Jat在50、100mg/kg能剂量依赖性降低四氧嘧啶致糖尿病小鼠和正常小鼠的血糖，提示Jat也是黄连治疗糖尿病的有效成分之一。但其降糖作用不及同量的Ber，推测可能是Ber对α肾上腺素受体的阻断作用强于Jat[7]，而更强地降低交感神经张力，抑制肾上腺皮质功能，从而抑制糖异生。为进一步研究Jat与Ber以天然比例配伍是否存在相互作用，本实验又观察了按Ber和Jat天然比例配制的模拟方对小鼠血糖的影响。结果表明，模拟方的降糖作用与单用同剂量的Ber相当，提示Ber和Jat以天然比例配伍未见明显协同或拮抗作用，但不能排除黄连中可能还存在其他的重要成分与Ber、Jat之间有着复杂的相互作用，或Ber和Jat之间存在更佳的比例组合，仍须进一步研究验证。而HLD的降血糖作用比单用Ber、Jat和模拟方都强，恰好提示了黄连中除了Ber和Jat之外，可能还有其他成分起着重要作用。 表1 Jat、Ber、HLD及模拟方对四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖的影响（x±s, n=10） 组 别 剂量/(mg·kg-1) 血糖/(mmol·L-1) 正常对照 － 5.8±1.3 模型 － 21.6±1.4 # # Ber 50 15.9±1.9 * * *▲△△ Jat 50 17.4±2.8 * * 100 16.4±1.1 * * HLD 2 202 12.8±1.1 * * *▼▼ Ber + Jat 50+10 15.8±1.6 * * 与正常对照组比较：＃＃P<0.01；与模型对照组比较：* * P<0.01 * * * P<0.001；与Jat 50mg/kg组比较：▲P<0.05；与HLD组比较：△△P<0.01；与Ber+Jat组比较：▼▼P<0.01 表2 Jat、Ber、HLD及模拟方对正常小鼠血糖的影响（x±s, n=10） 组 别 剂量/(mg·kg-1) 血糖/(mmol·L-1) 正常 － 5.9±1.2 Ber 50 3.4±0.8 * *▲△ Jat 25 5.7±1.6 50 4.8±0.9 * 100 4.6±0.7 * * HLD 2 202 2.2±0.7 * *▼ Ber + Jat 50+10 4.1±1.5 * 与正常对照组比较：* P<0.05 * * P<0.01；与Jat 50mg/kg组比较：▲P<0.05；与HLD组比较：△P<0.05；与Ber+Jat组比较：▼P<0.05