茶叶中农药残留检测方案(GPC)

分析仪器 Analytical InsrumentationNo.4 Jul. 20171562017年第4期 国产凝胶渗透色谱测定茶叶中7种农药残留 云：环 高 峰 吕东阳 刘来福 走靖敏 陈向斌2 齐 娜 金晓静 皮 娜 (1.北京出人境检验检疫局检验检疫技术中心，北京100026；2.上海屹尧仪器科技发展有限公司，上海201108) 摘 要：建立了加速溶剂萃取-凝胶渗透色谱-气相色谱质谱法测定茶叶中7种农药残留的分析方法，样品用乙腈-二二甲烷(V/V，1/1)作为溶剂，加速溶剂提取，提取液经过凝胶渗透色谱(Gel Permeation Chromatography，GPC)除去大分子杂质后，供 GC/MS分析；添加浓度为 0.5 ug时，回收率为79.2%~100.8%，相对标准偏差为3.15%~13.34%，方法具有自动化程度高、萃效效率高、净化效果好、精密度好，分析快速等优点，适用于茶叶中农药残留的日常检测工作。 关键词：加速溶剂萃取 凝胶渗透色谱普(GC/MS 农药 茶叶 doi：10.3969/j. issn. 1001-232x.2017.04.029 Determination of seven pesticide residues in tea by domestic gel permeation chromatograph.Yun Huan'号Gao Feng ，Li Dongyang'， Liu Laifu'， Zhao Jingmin， Chen Xiangbin’，Qi Na， Jin Xiaojing’， PiNa (1. Beijing Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau， Beijing 100026，China；2. PreeKem Sci-enti fic Instruments Co.，Ltd.， Shanghai 201108，China) Abstract： A method for determination of 7 kinds of pesticide residues in tea using accelerated solventextraction-gel permeation chromatography-GC/MS was established in this paper. Acetonitrile-dichlo.romethane (V/V，1/1) was employed as solvent in accelerated solvent extraction. Extract was purified bygel permeation chromatograph(GPC) to remove macromolecular impurities and then followed by GC/Msanalysis. The results showed that recoveries were between 79.2%-100.8% with 0.5 ug standard addi-tion，and RSD values were between 3. 15%-13.34%. This fast， accurate and highly automated methodwith good extraction rate and purification result is very applicable in daily tea analysis. Key words： accelerated solvent extraction； gel permeation chromatograph， GC/MS；pesticideresidues； tea 概述 茶叶以其抗癌、抗氧化、消除人体自由基等独特的保健功效，深受世人喜爱，已成为仅次于碳酸饮料和饮用水的世界第三大饮料。另一方面，随着人民生活水平的目益提高，人们对茶叶中农药残留等质量安全问题给予了高度关注。 加速溶剂萃取(ASE)是近几年出现的新的萃取技术。具有溶剂用量少，萃取时间短，萃取效率高的突出优点，是美国EPA的标准方法之一。然而，又由于茶叶含有大量的色素、生物碱及酚类化合物等脂溶性物质，在萃取后，会带来各种干扰，降低后 续分析仪器的灵敏度，使用寿命，从而影响最终分析结果，因此，必须样品萃取后，必须进一步进行净化处理。 凝胶渗透色谱(GPC)是利用多孔的凝胶聚合物将化合物按分子空间结构差异(分子量大小)进行选择性分离，不能进入凝胶孔隙的分子会很快随流动相洗脱，而能够进人凝胶孔隙的分子，则需要更长时间的冲洗时间才能够流出固定相，从而实现对不同组分的分离。利用加速溶剂萃取提取茶叶样品，提取液经过凝胶渗透色谱净化，利用 GC/MS 进行定性定量分析，建立了茶叶中11种农药残留的分析方法。 ( 基金项目：国 产 分析 仪器验 证与综 合 评价市 场化 推广 研究与实 践 (Z 161 10 0 0 03016006) ) 2材料与方法 2.1样品 实验用茶叶样品经粉碎机粉碎后，混匀，密封，常温下保存，备用。 2.2仪器与试剂 仪器型号：上海屹尧仪器科技发展有限公司FLEXI 全自动凝胶渗透色谱仪(配有400mm×25mm(内径)，内装 BIO-Beads S-X3填料的净化柱)，用于样品中大分子杂质的净化；气相色谱-质谱仪，配有电子轰击离子子(E)；分析天平，感量为0.0001g；离心机，最大转速为10000 r/min。 水为 GB/T 6682规定的一级水；环己烷：色谱纯；乙酸乙酯：色谱纯；乙：色谱纯；二氯甲烷：色谱纯；正己烷：色谱纯；乙酸乙酯+环环烷(1+1，体积比)；乙腈十二氯甲烷(1十1，体积比)；毒死蜱、杀 螟硫磷、三氯杀螨醇、水胺硫磷、三唑磷、氯氰菊酯、溴氰菊酯单个标准储备液100mg/L；微孔过滤膜(尼龙)。 2.3方法建立 称取5g磨碎均匀的茶叶样品，移人加速溶剂萃取的34mL萃取池中，用乙腈十二氯甲烷(1+1)作提取溶剂，在10.34 MPa压力、100℃条件下，加热5 min，静态萃取 5 min，循环1次。然后用池体积60%的乙腈十二氯甲烷(1+1)冲洗萃取池，氮气吹扫100s。萃取完毕，将萃取液转移到100 mL梨形瓶，40℃水浴中减压浓缩至近干，然后用适量乙酸乙酯旨环己烷(1+1)溶解残渣后转移至10 mL容量瓶，用乙酸乙酯+环己不(1+1)定容至10mL，溶液高速离心心后0.45pm滤膜，待凝胶色谱净化。 凝胶渗透色谱净化条件，见表1、表2。 表1全自动凝胶净化方法进样程序表(流速：5mL/min) 动作 样品位置 试剂 体积 抽液速度 打液速度 清洗探针 外壁清洗 乙酸乙酯 /环己烷 3mL 20 mL/min 50 mL/min 满环上样 样品瓶 5.5mL 10 mL/min 10 mL/min 清洗进样口 进样口 乙酸乙酯 /环己烷 3mL 10 mL/min 10 mL/min 清洗探针 外壁清洗 乙酸乙酯 3mL 20 mL/min 50 mL/min /环已烷 表23全自动凝胶净化方法收集程序表 收集 动作 起始时间 结束时间 收集位置 体积 馏分数量 单馏分体积 收集 00：20：00 00：34：00 收集瓶 70 mL 1 70mL 收集液于40℃水浴旋转蒸发至约5mL，将浓缩液转移至 15mL 离心管中，吹吹浓缩至近干，加入1mL的正己烷溶解残渣，混匀，供气相色谱-质谱测定。 气相色谱-质谱条件，如下： 色谱柱： DB-5MS 30m ×0.25mm ×0. 25pm。温(程序升温)：70℃保持 3min，15℃/min 升到 180℃，保持 2min， 10℃/min 升到280℃，保持10min。进样口温度：250℃。进样口压力：77kPa。流速：1.0 mL/min。分流比：不分流。进样量：1.0 pL。 2.4 线性关系 5 mg/L混合标准溶液配制，如下： 分别从从度为100 mg/L的毒死蜱、杀螟硫磷、 三氯杀螨醇、水胺硫磷、三唑磷、氯氰菊酯、溴氰菊酯标准储备液中，各移取0.5 mL 于10mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，配制成浓度为 5mg/L 的10种农药混合标准溶液，避光，0~4℃保存。 基质混合标准工作溶液配制，如下： 用空白样品基质溶液配制成浓度分别为0.03、0.05、0.1、0.2、0.3mg/L的混合标准工作溶液，用于标准工作曲线的绘制。具体结果见表3. 表3 7种农药线性方程 名称 线性方程 相关系数 杀螟硫磷 y=86595x-413.87 0.9983 毒死蜱 y=58050x+325.14 0.9924 水胺硫磷 y=25173x+55.632 0.9944 三氯杀螨醇 y=166411x+159.48 0.9967 三唑磷 y=194159x-344.2 0.9964 氯氰菊酯 y=156070x+1326.1 0.9971 溴氰菊酯 y=27315x+329.02 0.9938 2.5 加标回收率 在茶叶样品中加加0.5pg的混合标准溶液，重复进样7次，采用基质标准曲线定量，检测数据及RSD 见表4。 表4 7种农药测定结果 名称 添加量 测得值平均 RSD 平均回收率 (pg) (ug/mL) (%) (%) 杀螟硫磷 0.233 9.99 93.2 毒死蜱 0.252 5.70 100.8 水胺硫磷 0.217 8.78 86.8 三氯杀螨醇 0.5 0.206 3.15 82.4 三唑磷 0.217 7.84 86.8 氯氰菊酯 0.198 13.34 79.2 溴氰菊酯 0.220 10.41 88.0 3 结论 本实验使用国产凝胶净化系统对茶叶中7中农药残留进行了提取，使用建立了使用凝胶色谱-气相色谱-质谱法检测茶叶中农药残留的方法。该方法具有自动化程度高，萃取效率高、净化效果好、精密度好，分析快速等优点，适用于茶叶中农药残留的日常检测工作。 ( 参考文献 ) ( [1]王 耀 ， 张 汉 霞 ， 邹潍力 ， 刘少 彬， 谢翠美. A SE萃 取 /G P C- SP E 净 化 / G C- M S 测 定茶叶中 的 有机 磷 残留.食品 研 究 与开发 ，2011 ， 32( 3 ) ：1 2 8-13 2. ) ( [ 2 ] GB T 233 7 6- 2 009. 茶叶中农药多 残留 测定气相色谱/质谱 法 . ) ( 收 稿日 期 ：20 1 7 - 0 6-19 ) ( 作者简介： 云环，1983 年 出生 ， 高级工 程 师 ， 毕业 于 清华大学，就职于北京出入境检 验检疫局 技 术中心 ， 从事食品安 全检测工作， )