血浆中醛固酮检测方案(液质联用仪)

应用纪要WatersTHE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 应用纪要 使用LC-MS/MS检测血浆中醛固酮 背景 醛固酮，一种由肾上腺产生的类固醇激素，有助于调节体内钠和钾的浓度水平，从而通过激素调控血压并达到体液和血液电解质的平衡，为肾素-血管紧张素系统的一部分。由于肾上腺皮质的增生、腺瘤或癌变都可引起醛固酮分泌过多，称为原发性醛固酮增多症，充血性心力衰竭、肝硬化腹水、肾病综合征、特发型水肿、肾动脉狭窄或缺血以及失盐性肾病或肠病等多可引起血浆醛固酮增多，称为继发性醛固酮增多症。妊娠、大量出汗以及使用女性避孕药和雌激素时也可使醛固酮增高。垂体前叶功能减退症、肾上腺皮质功能减退症醛固酮水平均明显降低。选择性低醛固酮症由于肾脏分泌肾素缺乏，而出现低肾素、低醛固酮症。水摄入较多或钾摄入不足，以及应用利血平、心得安等药物都可引起醛固酮降低。 准确测定血浆中低浓度水平的类固醇激素(如醛固酮)是一件非常困难的事情。类固醇激素会与其他结构类似的相关类固醇发生抗体交叉反应，在较低浓度下可变性更高，因此许多现有检测方法都缺乏针对性。常规检测方法通常需要执行大量耗时的萃取和提纯步骤，然后进行衍生化分析。鉴于以上种种问题，许多实验室都转向转用LC-MS，这种方法可为类固醇激素的测定提供必要的灵敏度和特异性。然而，即便采用LC-MS，醛固酮的测定仍然极具挑战，因为其在血浆中的含量极低并且在质谱仪中很难被离子化，让分析变得尤其困难。沃特世开发了一种用于分析血浆中醛固酮的临床研究学方法。该方法采用SPE的前处理方式与LC-MS系统相结合，用于醛固酮的测定。 解决方案 LC系统： 沃特世ACQUITY UPLC系统 质谱仪： XevoTQ-S 色谱柱： ACQUITY CORTECS UPLC BEHC， 2.1x100 mm， 1.6 pm(PN：186007095) 样品制备： Oasis MAX pElution固相萃取板 结果 如图1所示，醛固酮及其代谢前体18-羟基皮质酮实现基线分离，证明此色谱柱具有良好的色谱选择性。当样品中的18-羟基皮质酮含量为60 nmol/L时，可在醛固酮-4H，内标的MRM谱图中检测到其同位素离子，因此因须分离18-羟基皮质酮。此外，当强的松浓度为1 umol/L时会对醛固酮产生离子抑制作用，因此还需分离强的松。由于实现了基线分离，我们可以单独定量醛固酮。 图1.使用CORTECS UPLC C，， 色谱柱分离醛固酮，醛固酮4H，和18-羟皮质甾酮。 对三种浓度(99，500和2000pM)的醛固酮QC样品进行进样，三个浓度水平五天内每天两次重复进样三次(n=30)评价重复性和精密度。结果如下。 Total QC precision(RSD) QC repeatability(RSD) Compound Low Mid High LOW Mid High Aldosterone 9.8% 7.1% 4.8% 8.2% 7.0% 3.9% 总结 沃特世开发了一种用于测定血浆中醛固酮的高效方法，该方法应用了LC/MS/MS和SPE前处理。此方法仅使用200uL的样品即可在低生理浓度的(42pmol/L)醛固酮分析中达到足够的分析灵敏度。由于高选择性的色谱分离，以及通过阴离子交换SPE方法去除干扰物，此法可提供干净的色谱图，有助于在整个浓度范围内准确定量醛固酮。 沃特斯中国有限公司沃特世科技(上海)有限公司 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE 北京：010-52093866 上海：021-61562666 广州：020-28295999 Waters， ACQUITY UPLC， Xevo和The Science of What’s Possible是沃特世公司的注册商标。其它所有商标均归各自的拥有者所有。 香港：852-29641800 O2017 沃特世公司中国印刷 免费售后服务热线：800(400)820 2676Www.waters.com 准确测定血浆中低浓度水平的类固醇激素(如醛固酮)是一件非常困难的事情。沃特世开发了一种用于分析血浆中醛固酮的临床研究学方法。该方法采用SPE的前处理方式与LC-MS系统相结合，用于醛固酮的测定。