血液中毒（药）物检测方案(毛细管柱)

超高惰性气相色谱柱及配件应用文集——法医与滥用药物 ● 超高惰性色谱柱在气质联用法分析血液中常见毒(药)物的应用 关键词 超高惰性色谱柱气质联用 毒(药)物 作者 摘要 达情 杨娅王晓姝苏州大学司法鉴定所 苏州大学法医学系 目的在传统的气质联用法分析血液中常见毒(药)物的的程中，采用超高惰性色谱柱，并与常规的色谱柱进行比较。方法血液分别在中性和碱性条件下用乙醚提取两次，取有机相合并，60℃水浴挥干，甲醇定容。取1pL进样分析。结论 采用 HP-5ms 超高惰性色谱柱能够明显改善色谱行为，优化峰形，提高灵敏度，可以为法医学鉴定、临床诊治以及及物监测提供更好的技术支持。 生物检材中毒(药)物的检测一直以来都是法医毒物分析学中的一个重要课题，随着现代分析技术的发展，这一课题逐渐成为法医毒物分析学的主体内容之一[1]。血液由于血药质量浓度反映了药物作用强度和中毒程度而成为了法医毒物分析中最常见也是最重要的检材之一[2]。目前国内外对于药物分析的发展主要是不断改进样品的处理方法和使用高灵敏度的气相、液相气质联用法对样品进行分析[3]。气相色谱质谱联用法 (GC-MS)结合了气相色谱和质谱的优点，弥补了各自的缺陷，因而具有灵敏度高、分析速度快、鉴别能力强的特点[4]。因此，在法医毒物分析中，对于血液中各种毒(药)物的检测更是集中的体现了其优势所在[5]。 本研究采用了液液提取[6]的方式，对案件中常见的几种药物进行了提取分析，对比了常规的 HP-5ms 毛细管色谱柱和超高惰性 HP-5ms UI 毛细管色谱柱在实际应用中的效果。实验结果表明，超高惰性色谱柱具有更好的适用性。 试验材料与方法 1.1仪器与试剂 1.1.1仪器 Aglent7890A-5975C气相色谱质谱联用仪 (Aglent仪器公司)，0412-1离心机(上海手术仪器厂)， TGL-16G高速离心机(上海安亭科学仪器厂)， DK-S22电热恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司)，XW-80A涡旋混合器(海门市其林贝尔仪器制造有限公司)。 1.1.2试剂 甲醇(HPLC级)，乙醚(分析纯)，均为国药集团化学试剂有限公司产品， NaOH (40%)，为上海化学试剂有限公司产品，阿托品、巴比妥、甲胺磷、扑热息痛对照品均为司法部司法鉴定科学技术研究所提供，规格均为1mg/mL. 1.1.4空白检材 空白血液由健康志愿者提供，存放于4℃冰箱中。 1.2样品前处理 准确取血液 2mL 于10mL离心管中，用乙醚3mL涡旋混合提取1min， 离心使之分层，转移出乙醚提取液于10mL离心管中，残留液中再加10% NaOH2~3滴，使血液呈碱性(pH11~12)，用乙醚3mL提取残留液，涡旋混合1min， 离心使之分层，转移乙醚层，合并乙醚提取液，于60℃水浴中挥发至近干，残留物加30uL甲醇溶液，供进样分析。 1.3仪器条件 色谱柱： Aglent 公司HP-5ms UI 超高情性色谱柱 (30×0.25mm×0.25pm)， Aglent 公司 HP-5ms 毛细管柱(30×0.25 mm×0.25 pm)。 柱温： 初始温度60℃保持1min， 以20℃ /min 程序升温至160℃，以10℃ /min 程序升温至290℃保持16 min； 进样口温度： 260℃： 载气：氦气1.0 mL/min； 离子阱：150℃； 质量范围： 50~500：进样量：1pL 结果 目标药物保留时间(参考值)与主要碎片离子见表1 表1各种药物参考保留时间和主要碎片离子 名称 保留时间 m/z 阿托品 15.000 94、124、289 巴比妥 8.286 141、156 甲胺磷 6.044 94、141 扑热息痛 10.003 109、151 2.1使用HP-5ms色谱柱进样结果如图1~4： 图1提取阿托品色谱图 图3提取甲胺磷色谱图 图4提取扑热息痛色谱图 2.2使用 HP-5ms 超高惰性色谱柱进样结果如图：5~8 图5提取阿托品色谱图 图6提取巴比妥色谱图 图7提取甲胺磷色谱图 讨论 3.1通过图1和图5对比可以看出，在使用了超高惰性色谱柱之后，同样浓度的阿托品的响应峰高值提到了近一倍。无论是低流失还是低活性，对痕量分析都十分重要。低流失有助于降低噪音，但是如果分析物被吸附在色谱柱的活性位位上，分析结果仍将受损。只有当色谱柱既低流失又高惰性时，结果才是可靠的。本实验所选择的超高惰性色谱柱，具有一致的色谱柱惰性和超低的色谱柱流失，明显的提高了灵敏度，改善色谱性能，同时确保了数据的完整性。 3.2通过2.1与2.2各组药物的色谱行为图对比可以看出，在使用了超高惰性色谱柱之后，各活性药物的色谱行为得到了极大的改善，峰形有了明显的优化，峰宽变窄，并且不再出现拖尾现象，信噪比显著提高。 结论 本研究采用了超高惰性色谱柱对法医毒物分析中常见的药物进行了与常规色谱柱的分析对比。实验结果表明，超高惰性色谱柱能够较好的改善药物的色谱峰形，提高灵敏度，为法医毒物分析以及临床诊治、药物监测等环节均提供了更优质的技术支持。 ( 参考文献 ) ( 1. 沈敏，姜姜，向平.体内滥用药物分析.法律出版社.2003.7；1-3. ) ( 2. 沈敏，向平，沈保华.LC-MS/MS多反应监测筛先分析血液中 132种毒药物[J].中国司法鉴定 [J]，2006，22：14-20. ) ( 3. 沈敏，向平，沈保呆.体液中常见滥用药物的系统筛选分析[J]. 中国司法鉴定[J]，2001， 1(1)：1-6. ) ( 4. 李霞，唐玉海，郑晓晖.气相色谱-质谱联用法在体内药物分 析方面的应用.综述报告，2004，13(4)：79-80. ) ( 5. Alain G.Vertraete.Detection times of drugs of abuse inblood，urine，and o ral fluid.Ther drug monit， 2004，4(26)200-205. ) ( 6. 姜兆林，潘俊昌，姚丽娟，赵彦军.血中氯胺酮的液液提取及GC/ECD检测.江西公安专科学校学报，2003，3，2：74-75. ) 目的 在传统的气质联用法分析血液中常见毒（药）物的过程中，采用超高惰性色谱柱，并与常规的色谱柱进行比较。方法 血液分别在中性和碱性条件下用乙醚提取两次，取有机相合并，60℃水浴挥干，甲醇定容。取1μL 进样分析。结论 采用HP-5ms 超高惰性色谱柱能够明显改善色谱行为，优化峰形，提高灵敏度，可以为法医学鉴定、临床诊治以及药物监测提供更好的技术支持。生物检材中毒（药）物的检测一直以来都是法医毒物分析学中的一个重要课题，随着现代分析技术的发展，这一课题逐渐成为法医毒物分析学的主体内容之一[1]。血液由于血药质量浓度反映了药物作用强度和中毒程度而成为了法医毒物分析中最常见也是最重要的检材之一[2]。目前国内外对于药物分析的发展主要是不断改进样品的处理方法和使用高灵敏度的气相、液相气质联用法对样品进行分析[3]。气相色谱质谱联用法（GC-MS）结合了气相色谱和质谱的优点，弥补了各自的缺陷，因而具有灵敏度高、分析速度快、鉴别能力强的特点[4]。因此，在法医毒物分析中，对于血液中各种毒（药）物的检测更是集中的体现了其优势所在[5]。本研究采用了液液提取[6] 的方式，对案件中常见的几种药物进行了提取分析，对比了常规的HP-5ms 毛细管色谱柱和超高惰性HP-5ms UI 毛细管色谱柱在实际应用中的效果。实验结果表明，超高惰性色谱柱具有更好的适用性。