罗汉果中罗汉果皂苷检测方案(液相色谱柱)

引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 中国药典2010版对应高效液相 色谱图集 罗汉果分析 罗汉果的高效液相色谱 1.药典收载情况 【来源】本品为葫芦科植物罗汉果Siraitia grosvenorii (Swingle) C. Jeffrey ex A. M. Lu et Z. Y. Zhang 的干燥果实。秋季果实由嫩绿色变深绿色时采收，晾数天后，低温干燥。 【功能与主治】清热润肺，利咽开音，滑肠通便。用于肺火燥咳，咽痛失音，肠燥便秘 【含量测定】照高效液相色谱法(附录VID)测定。 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(23：77)为流动相；流速：0.5mL/min；检测波长为203 nm。理论板数按罗汉果皂苷Ⅴ峰计算应不低于3000。 对照品溶液的制备：精密称取罗汉果皂苷Ⅴ对照品适量，加流动相流成每1mL含0.2mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约0.5g， 精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL， 密塞， 称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液20mL，回收至干，加水10mL溶解，上至大孔吸附树脂柱AB-8(1.0 cm x10 cm)， 分别用水100mL， 20%乙醇100 mL洗脱，弃去洗脱液；再用50%乙醇100 mL洗脱，合并50%乙醇洗脱液，回收至干，残渣加流动相溶解并转移至10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10pL， 注入高效液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含罗汉果皂苷V(C60H102029)不得少于0.50% 2.罗汉果药材高效液相色谱方法的建立 色谱行为描述】 《中国药典》中罗汉果的含量测定以罗汉果皂苷V为质量评价依据，其在Inertsil ODS-3中的色谱特点为：在流动相组成为乙腈-水系统时，流动相的比例对罗汉果皂苷Ⅴ及相邻色谱峰的分离具有显著的影响，流动相乙腈的比例在22%左右时，其分离度最好，罗汉果色谱图中杂质峰较少且与罗汉果皂苷V相比含量很低，因此选择乙腈比例在20~23%(v/v)之间均可以获得较好的分离度及分析效果；柱温对罗汉果皂苷Ⅴ的保留时间及与相邻色谱峰的分离度影响很小。经过考察，在流动相比例为乙腈-水(22：78)，柱温35℃的色谱条件下，使用Inertsil ODS-3(4.6×150 mm， 5 um)柱能得到较满意的分析效果。使用Inertsil ODS-4(4.6×150 mm， 5 um)柱亦可得到良好分析效果。 罗汉果 样品来源：葫芦科植物罗汉果Siraitia grosvenorii (Swingle) C. Jeffrey ex A. M. Lu et Z. Y. Zhang 的干燥果实。 对照品：罗汉果皂苷V(成都曼斯特生物科技有限公司，批号：88901-36-4，含量：98%) 供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液20 mL， 回收至干，加水10mL溶解，上至大孔吸附树脂柱AB-8(1.0 cm ×10cm)， 分别用水100 mL， 20%乙醇100mL洗脱，弃去洗脱液；再用50%乙醇100 mL洗脱，合并50%乙醇洗脱液，回收至干，残渣加流动相溶解并转移至10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 对黑品溶液的制备：精密称取罗汉果皂苷V对照品适量，加流动相制成每1mL含0.2 mg的溶液，即得。 色柱： Inertsil ODS-3(4.6×150 mm， 5 um) 推荐使用条件范围： 流动相：乙腈-水(22：78) 色谱柱： Intersil ODS-3(4.6×150 mm， 5 um) 栏温：35℃裣测测长：203 nm柱注温： 35~45℃速：1.0mL/min检测波长：203 nm运样量： 10pL流 速：1.0 mL/min仪器配置：LC-20ADXR高压泵SPD-M20A二极管阵列紫外可见光检测器CTO-20AC柱温箱CBM-20A 系统控制器 流动相：乙腈-水(20~23：80~77) SIL-20AC 自动进样器 对照品 实际样品 (1)罗汉果皂苷V (1) 125 150 7.5 名称 保留时间 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 罗汉果皂苷V 9.237 538757 23887 3608 1.06 罗汉果皂苷V标准曲线 重复性数据如下： 罗汉果皂苷V No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 ] 9.210 542612 9.223 656289 2 9.237 561108 9.200 667999 3 9.203 551759 9.175 665199 Average 9.216 551826 9.199 663162 RSD% 0.19 1.60 0.26 0.92 *本数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供 色谱柱：Inertsil ODS-3 (4.6 x 150 mm, 5um)流动相：乙腈-水(22:78)柱温：35 ℃检测波长:203nm流速：1 mL/min进样量：10ul