黑种草子中常春藤皂苷元检测方案(液相色谱柱)

引领分析科技尽在北京谱火-企业QQ：40061 65163中国药典2010版对应高效液相色谱图集 黑种草子分析 黑种草子的高效液相色谱 1.药典收载情况 【来源】本品系维吾尔族习用药材。为毛莨科植物腺毛黑种草Nigella glandulifera Freyn et Sint.的干燥成熟种子。夏、秋季果实成熟时采割植株，晒干，打下种子，除去杂质，晒干。 【功能与主治】补肾健脑，通经，通乳，利尿。用于耳鸣健忘，经闭乳少，热淋，石淋。 【含量测定】 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(87：13：0.04：0.02)为流动相；检测波长为210 nm。理论板数按常春藤皂苷元峰计算应不低于3000。 对照品溶液的制备：取常春藤皂苷元对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.6mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约1g，精密称定，加石油醚(60℃~90℃)适量，置索氏提取器中加热回流提取2小时，弃去石油醚液，药渣挥干，加甲醇适量，继续加热回流提取4小时，回收溶剂容，残渣加正丁醇饱和的水15 mL使溶解，并转移至分液漏斗中，加水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20 mL， 合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇20 mL、盐酸2mL， 加热回流4小时，放冷，加水10mL，摇匀，用三氯甲烷振摇提取3次， 每次20 mL， 合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液溶10pL， 注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含常春藤皂苷元(C30H4gO4)不得少于0.50%。 2.黑种草子药材高效液相色谱方法的建立 【色谱行为描述】 《中国药典》中黑种草子的含量测定以常春藤皂苷元为质量评价依据之一，黑种草子在Inertsil ODS-3中的色谱特点为：在流动相组成为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺系统时，流动相的比例对常春藤皂苷元的保留时间和与相邻峰的分离度具有显著的影响，甲醇比例在75~80%(v/v)之间均可以获得满意的分离度，考虑到分析时间长短，优化流动相比例为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(80：20：0.06：0.03)；柱温对常春藤皂苷元的保留时间也有影响，柱温在15~25℃之间均可获得较好的分离度，考虑到分析时间的长短，优化柱温为20℃。经过考察，此条件同样适用于在Inertsil ODS-4(4.6×150 mm， 5 pum)中对黑种草子进行分析。 黑种草子 样品来源：本品为毛莨科植物腺毛黑种草Nigella glandulifera Freyn et Sint. 的干燥成熟种子。夏、秋季果实成熟时采割植株，晒干，打下种子，除去杂质，晒干。产地：新疆。 对照品：常春藤皂苷元(上海同田生物技术有限公司，批号：09072531，含量：98.0%) 供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约1g，精密称定，加石油醚(60℃~90℃)适量，置索氏提取器中加热回流提取2小时，弃去石油醚液，药渣挥干，加甲醇适量，继续加热回流提取4小时，回收溶剂干，残渣加正丁醇饱和的水15 mL使溶解，并转移至分液漏斗中，加水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20mL， 合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加渣醇20mL、 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 盐酸2 mL， 加热回流4小时，放冷，加水10 mL，摇匀，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，回云溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 对照品溶液的制备：取常春藤皂苷元对照品适量，精密称定，加称醇制成每1 mL含0.6mg的溶液，即得。 色谱柱： Inertsil ODS-3 (4.6 mm x 150 mm， 5 um) 推荐使用条件范围： 流动相：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(80：20：0.06：0.03) 色谱柱： Intersil ODS-3(4.6×150 mm， 5 um) 柱温：20℃ 流动相：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(75~80：25~20：0.08~0.06：0.04~0.03 检测波长：210nm 柱温：15~25℃ 流充速：1.0 mL/min 检测波长：327 nm 进样量：10pL 流 速：11.0 mL/min ※该条件同样适用于Inertsil ODS-4(4.6×150 mm， 5 um) 仪器配置： LC-20ADvp 高压泵 DGU-20A 脱气机 SPD-M20Avp二极管阵列紫外可见光半微量检测器 CTO-20ASvp 柱温箱 SIL-20ACHT 自动进样器 对照品 实际样品 常春藤皂苷元标准曲线 重复性数据如下： 常青藤皂苷元 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 17.182 984971 17.176 1033827 2 17.195 986960 17.180 1036653 3 17.200 987242 17.194 1033220 Average 17.190 986391 17.183 1034567 RSD% 0.06 0.13 0.06 0.18 *本数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供 色谱柱：Inertsil ODS-3 (4.6 mm x 150 mm, 5um)流动相：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(80:20:0.06:0.03)柱温：20°C检测波长：210 nm流速：1.0 mL/min进样量：10ul※该条件同样适用于Inertsil ODS-4(4.6 x 150 mm, 5um)