三七中人参皂苷和三七皂苷检测方案(液相色谱柱)

中国药典2010年版对应高效液色谱方法图普库(第一册)65163引领分析沂技.在北尿谱oaQQ40061 中国药典2010版对应高效液相色谱图集 三七分析 三七的高效液相色谱 《中国药典》收载情况 【来源】本品本品为五加科植物三七Panax notoginseng (Burk.) F. H. Chen的干燥根及根茎。秋季花开前采挖，洗净，分开主根、支根及茎基，干燥，支根习称“筋条”，根茎习称“剪口”。 【功能与主治】散瘀止血，消肿定痛。用于咯血，吐血，衄血，便血，崩漏，外伤出血，胸腹剌痛，跌扑肿痛。 【含量测定】色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A， 以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为203nm。理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于4000。 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~22 20→40 80→60 22~60 40→20 60→80 对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品和三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1mL含人参皂苷Rg1>0.4mg，人参皂苷Rb1>0.4mg、三七皂苷R1>0.1mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)0.6g， 精密称定，精密加入甲醇50mL，称定重量，放置过夜，置80℃水浴上保持微沸2小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10pL，注入液相色谱仪，测定，即得。 三七药材高效液相色谱方法的建立 【色谱行为描述】《中国药典》中三七的含量测定以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1为质量评价依据，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1在Inertsil ODS-3中的色谱特点为：检测波长在203nm时人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1吸收均较强，色谱图较好；在流动相组成为乙腈-水溶液系统梯度洗脱时，流动相的比例对人参皂苷Rgt和人参皂苷Rb1的分离，以及三七皂苷R1与相邻色谱峰的分离具有显著的影响，结合文献报道，优化流动相乙腈的梯度洗脱条件为：20%~40%(0~22min)， 40%~20%(22~60min)， 在此条件下，三七的分析时间较短，分离度较好，优于药典方法；考虑到分析时间，采用上述色谱柱，用优化的条件进行分析；柱温对人参皂苷Rg1峰和人参皂苷Rb1峰的峰形影响较大，经比较分析样品在25度时有较好的分析效果，考虑到样品的稳定性及分析时间，本次采用25度条件对三七样品进行分析测定。 三七 样品来源：为五加科植物三七Panax notoginseng (Burk.) F. H. Chen的干燥根及根茎。产地：云南。 对照品：人参皂苷Rg1(中国药品生物制品制定所，批号：110703200424)、人参皂苷Rb1(中国药品生物制品检定所，批号：110704200318)和三七皂苷R1(中国药品生物制品检定所，批号：110745200312) 供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)0.6g，精密称定，精密加入甲醇50mL， 称定重量，放置过夜，置80℃水浴上保持微沸2小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 .中国药典2010年版对应高效液色谱方法图谱库(第一册)引领分析沂技.在北尿谱oaQQ4006165163 三七 色谱柱： Inertsil ODS-3 (4.6x150 mm，5 um) 流动相：乙腈-水系统，乙腈梯度洗脱条件：20%~40%(0~22min)，40%~20%(22~60min) 柱温：25℃ 检测波长：203nm流速：1.0mL/min进样量：5pL ※此条件同样适用于Inertsil ODS-4 (4.6x150 mm，5pm) 推荐使用条件范围： 仪器配置： 色谱柱： Intersil ODS-3 (4.6×150mm，5 um)LC-20ADXR高压泵流动相：乙腈-水：20%~40%(0~22min)， 40%~20%(22~60min)SPD-M20A二极管阵列紫外可见光检测器柱温：225~45CCTO-20AC柱温箱检测波长：203nmCBM-20A 系统控制器流速：1.0 mL/minSIL-20AC自动进样器 标准样品 实际样品 名称 保留时间 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 一七皂苷R1 11.348 492245 40574 21195 1.10 人参皂苷Rg1 12.645 2649926 214622 24497 1.14 人参皂苷Rb1 21.605 2400858 172900 67085 1.02 三七皂苷R1标准曲线 人参皂苷Rg1标准曲线 人参皂苷Rb1标准曲线 三七皂苷R1的重现性 峰面积 No. 标准样品保留时间峰面积 实际样品 保留时间峰面积 12 3 11.318 94772411.308 947238 11.294 946479 11.341 429526 11.334 429635 11.348 430462 AverageRSD% 11.306 9471470.11 0.07 11.341 4298740.07 0.12 浓度mg/L 人参皂苷Rg1的重现性 人参皂苷Rb1的重现性 No. 标准样品保留时间峰面积 实际样品 保留时间峰面积 No. 标准样品保留时间 峰面积 实际样品 保留时间 峰面积 1 21.636 1404224 234078623480622351499 123 12.869 2151392 12.6402543736 12.8742155158 12.633 254646112.645 2548643 2 21.406 1403507 21.613 2348062 12.8272152809 3 21.395 1402432 21.605 2351499 21.479 1403388 21.605 2346782 AverageRSD% 12.8562153120 12.639 2546280 0.04 0.24 0.21 0.09 0.64 0.07 *本数据山北京大学医学部陈世忠教授课题组提供 中国药典word版exe版pdf版及培训资料精华帖http：//www.yaojia.org/forum. php?mod=viewthread&tid=fromuid= 色谱柱Inertsil ODS-3 (4.6x 150 mm,5um)流动相:乙腈-水系统，乙腈梯度洗脱条件20%-40% (0-22min)，40%-20% (22-60min)柱温: 25℃检测波长203nm 流速1.0 mL/min 进样量5μL※此条件同样适用于Inertsil ODS-4 (4.6 x 150 mm,5μm)