大黄中大黄素、大黄酸、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚检测方案(液相色谱柱)

中国药典2010年版对应高效液相色谱方法图谱库(第一册引领分析科技在北京谱朋企业QQ：40061 65163 中国药典2010年版对应高效业相谱方法图谱库：Ar 中国药典2010版对应高效液相色谱图集 大黄分析 大黄的高效液相色谱 《中国药典》收载情况 【来源】本品为蓼科植物掌叶大黄 Rheum palmalum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim. ex Balf.或药用大黄Rheumofficinale Baill.的干燥根及根茎。秋末茎叶枯萎或次春发芽前采挖，除去细根，刮去外皮，切瓣或段，绳穿成串干燥或直接干燥。 【功能与主治】泻热通肠，凉血解毒，逐瘀通经。用于实热便秘，积滞腹痛，泻痢不爽，湿热黄疸，血热吐衄，目赤，咽肿，肠痈腹痛，痈肿疔疮，瘀血经闭，跌打损伤，外治水火烫伤；上消化道出血。酒大黄善清上焦血分热毒。用于目赤咽肿，齿龈肿痛。熟大黄泻下力缓，泻火解毒。用于火毒疮疡。大黄炭凉血化瘀止血。用于血热有瘀出血症。 【含量测定】色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液(85：15)为流动相；检测波长为254mm。理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。 对照品溶液的制备： 精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每1mL含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各80pg， 大黄素甲醚40pg的溶液；分别精密量取上述对照品溶液各2mL，混匀，即得(每1mL中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各16pg，含大黄素甲醚8ug)。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约0.15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25mL，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5mL，置烧瓶中，挥去溶剂，加8%盐酸溶液10mL， 超声处理2分钟，再加三氯甲烷10mL，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10mL，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至至，残渣加甲醇使溶解， 转移至100mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法：分别精密吸取对照品溶液与夜与品溶液各10pL， 注入液相色谱仪，测定，即得。 大黄药材高效液相色谱方法的建立 【色谱行为描述】《中国药典》中大黄的含量测定以大黄素、大黄酸、大黄素甲醚、大黄酚、芦荟大黄素为质量评价依据，它们在Inertsil ODS-4中的色谱特点为：流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液系统时，流动相的比例对色谱峰的分离有显著影响，甲醇比例在70~80%(v/v)均可获得满意的分离效果，柱温对色谱峰的分离基本无影响。采用上述色谱柱，优化流动相比例为甲醇-0.1%磷酸溶液(75：25)， 柱温35℃。 此条件同样适用于lnertsil ODS-3色谱柱对大黄的分析。 大黄 ( 样品来源：本 品 为蓼科植物掌叶大黄Rheumpalmatum L.的干燥根及根茎。产地：甘肃。 ) 对照照：大黄素(上海同田生物技术有限公司，批号：09021821，含量：99.37%)； 大黄酸(上海同田生物技术有限公司，批号：08072322，含量：97.242%)；大黄酚(上海同田生物技术有限公司，批号：09032731，含量：99.2692%)；大黄素甲醚(上海同田生物技术有限公司，批号：08080522，含量：98.686%)； 芦荟大黄素(上海同田生物技术有限公司，批号：08081522，含量：97.276%)。 供试品溶液的制备：取本品本末(过四号筛)约0.15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25mL，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5mL， 置烧瓶中，挥去溶剂，加8%盐 引领分析科技人在北京谱明企业QQ：40061 65163 大黄 酸溶液10mL，超声处理2分钟，再加三氯甲烷10mL，加热回流1寸时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次， 每次10mL， 合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至100mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 对照品溶液的制备：精密密取大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每1mL含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各80 ug， 大黄素甲醚40pg的溶液；分别精密量取上述对照品溶液各2mL， 混匀，即得(每1mL中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各16pg，含大黄素甲醚8ug) 色谱柱： Inertsil ODS-4(4.6×250 mm，5pm) 流动相：甲醇-0.1磷酸溶液(75：25) 柱温：35℃ 检测波长：254nm 流速：1.0mL/min 进样量：5pL ※此条件同样适司于Inertsil ODS-3(4.6×250 mm， 5um)。 推荐使用条件范围： 色谱柱： Intersil ODS-4(4.6×250 mm，5um) 流动相：甲醇-0.1磷酸溶液(70~80：30~20)； 柱温：30~55℃ 检测波长：254nm 流速：：1.0mL/min 仪器配置： LC-20ADXR高压泵DGU-20A3 脱气机 SPD-M20A二极管阵列紫外可见光检测器 CTO-20AC柱温箱 CBM-20A 系统控制器 SIL-20AC 自动进样器 标准样品 标准样品 名称 保留时间(min) 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 芦荟大黄素 8.891 2543425 196780 10245 1.16 大黄酸 12.225 1808986 101606 10615 1.15 大黄素 20.924 1221709 43045 12201 1.12 大黄酚 29.006 2750638 75716 14465 1.11 大黄素甲醚 46.189 635693 11009 14304 1.12 实际样品 名称 保留时间(min) 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 芦荟大黄素 8.893 443126 34539 10340 1.17 大黄酸 12.238 639025 35523 10478 1.17 大黄素 20.902 544357 19202 12347 1.14 大黄酚 28.914 1207639 33466 14435 1.12 大黄素甲醚 46.188 370590 6450 14438 1.13 芦荟大黄素标准曲线 大黄酸标准曲线 2010版中国药典word版exe版pdf版及培训资料精华帖 http：//www.yaojia.org/forum. php?mod=viewthread&tid=18529&fromuid=1023 大黄素标准曲线 大黄酚标准曲线 大黄素甲醚标准曲线 重现性数据如下 No. 芦荟大黄索标准品保留时间 峰面积 样品中芦荟大黄素 保留时间 峰面积 1 2 3 8.885 16289578.883 16343438.883 1628237 8.891 441441 8.893 443126 8.887 440102 AverageRSD% 8.884 1630512 8.890 0.034 441556 0.34 0.013 0.20 重现性数据如下 No. 大黄酸标准品 保留时间 峰面积 样品中大黄酸 保留时间 峰面积 1 12.220 1120578 12.236 12.238 12.232 640637 12.225 111713612.220 1118340 639025 638272 23 AveragcRSD% 11186850.15 12.235 0.025 639311 0.18 0.023 0.15 No. 大黄素标准品保留时间 峰面积 样品中人黄紫保留时间 峰面积 1 2 3 20.924 122170920.916 122043220.919 1220015 20.901 546106 544357 20.902 20.895 545447 AveragcRSD% 20.919 1220719 0.019 0.072 20.899 545303 0.018 0.16 No. 大黄标准品保留时间 峰面积 样品中人黄酚保留时间 峰面积 1 23 28.944 1251097 1221286 1207639 1207509 28.939 124954228.935 1248151 28.914 1207639 28.906 1207509 AverageRSD% 28.9390.016 1249597 28.911 0.015 1212145 0.65 0.11 No. 大黄索甲醚标准品保留时间 峰面积 样品中大黄素甲醚 保留时间 峰面积 1 2 3 46.165 27284646.177 27379246.167 274142 46.193 371403 374012 46.198 46.188 370590 AveragcRSD% 46.169 2735930.014 0.24 46.193 372001 .0.011 0.48 ★本数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供 中国药典word版exe版pdf版及培训资料精华帖http：//www.yaojia. org/forum. php?mod=viewthread&tid=fromuid= 色谱柱Inertsil ODS-4 (4.6 x 250 mm, 5μm)流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(75:25)柱温: 35℃检测波长254 nm流速1.0 ml/min进样量5μL※此条件同样适用于Inertsil ODS-3( 4.6 x 250 mm, 5μm)