头孢地尼中有关物质检测方案(液相色谱柱)

Sep 21，2016LC Application Lab， Shiseido ChinaNo.31， BDA International Business Park，2 Jing Yuan Street， BeijingEconomic Technological Development Zone，Beijing， China 100176Phone 010-6785-6803， FAX 010-6785-6882 头孢地尼CP2015的分析 依《中国药典》15版二部方法对头孢地尼原料药进行分析，客户反映主峰前后杂质与主峰分离度较难达到药典标准，需求合适C18柱进行分析以达到药典分离要求；尝试使用资生堂MGII， SUPERIOREX ODS， AQ， BB等Cis色谱柱对客户所提供样品进行分析，发现高极性的CI8AQ柱分析结果为最佳，结果如图1。 Minutes 图1AQ药典方法对系统适用性溶液分析 HPLC Conditions ： 色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ ；4.6mm i.d. ×250mm 流动相： A： 0.25%四甲基氢氧化铵(磷酸调pH至5.5)，每1000ml加入0.1mol/L 乙二胺四醋酸二钠 0.4ml B：0.25%四甲基基氧化铵(磷酸调 pH至5.5)：乙腈：甲醇：=500：300：200，每1000ml 加入 0.1mol/L乙二胺四醋酸二钠0.4ml →B%5%(60min) 流速1mL/min温度检 40°C 测： PDA 254nm 进样量：：20pL HPLC Conditions ： Column ： CAPCELL PAK C18AQ；4.6mm i.d.×250mm Mobile phase： A： 0.25%TMAH(adjust pH to 5.5 with phosphoric acid)， add 0.4ml of 0.1mol/L EDTA-2Na in every1000 ml of solution B：0.25% TMAH(adjust pH to 5.5 with phosphoric acid)： CH3CN： CH3OH： =500：300：200， add0.4ml of 0.1mol/L EDTA-2Na in every 1000 ml of solution B 5%(0min)→5%(2min)-25%(25min)→50%(42min)→5%(43min)→5%(60min)Gra Flow rate 1mL/min Temp：：40°C Detection：：PDA 254nm Inj.vol.：：20pL 结果中看出头孢地尼主峰保留时间为20.73min，同药典头孢地尼系统适用性溶液的典型色谱图基本相符(如附图I)；药典要求头孢地尼峰与杂质J峰分离度不小于1.2，杂质I峰与杂质J峰，头孢地尼峰与杂质K峰及杂质K峰与杂质L峰之间分离度应符合要求，此时头孢地尼峰与杂质J峰分离度为1.21，杂质I峰与杂质J 峰分离度为2.19，头孢地尼峰与杂质K峰分离度为2.77，杂质K峰与杂质L峰分离度为1.70，均符合药典规定。为达到药典要求使保留时间约为22min，降低流速，再一次分析，分析结果如图2。 附图Ⅰ头头孢地尼系统适用性溶液典型色谱图 Minutes 图2 AQ药典方法对系统适用性溶液分析 HPLC Conditions： 色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ ；4.6mm i.d. ×250mm 流动相： A： 0.25%四甲基氢氧化铵(磷酸调pH至5.5)， 每1000ml 加入0.1mol/L 乙二胺四醋酸二钠 0.4ml B：0.25%四甲基氢氧化铵(磷酸调pH至5.5)：乙晴：甲醇：=500：300：200， 每 1000ml 加入 0.1mol/L乙二胺四醋酸二钠0.4ml →B%5%(60min) 流速0.85mL/min温度检测 40°C PDA254nm 进样量： 20pL HPLC Conditions ： Column：CAPCELL PAK C18 AQ；4.6mmi.d.×250mm Mobile phase： A： 0.25%TMAH(adjust pH to 5.5 with phosphoric acid)， add 0.4ml of 0.1mol/LEDTA-2Na in every1000 ml of solution B： 0.25%TMAH(adjust pH to 5.5 with phosphoric acid)： CH3CN： CH3OH： =500：300：200， add0.4ml of 0.1mol/L EDTA-2Na in every 1000 ml of solution B 5%(0min)→5%(2min)→25%(25min)→50%(42min)→5%(43min)→5%(60min)Gra Flow rate ：0.85mL/min Temp：：40°C Detection：PDA 254nm Inj.vol.： 20pL 此时头孢地尼主峰保留时间为22.18min，为药典所要求保留时间，头孢地尼峰与杂质J峰分离度为1.23，杂质Ⅰ峰与杂质J峰分离度为2.35，头孢地尼峰与杂质K峰分离度为2.68，杂质K峰与杂质L峰分离度为1.84，均符合药典规定。在同样的分析环境下对按药典方法所配制的供试品溶液进行分析，分析结果如图3. Minutes 图3 AQ 药典方法对供试品的分析 HPLC Conditions ： 色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ；4. 6mm i.d. ×250mm 流动相： A： 0.25%四甲基氢氧化铵(磷酸调pH至5.5)，每1000ml 加入 0.1mol/L 乙二胺四醋酸二钠 0.4ml B：0.25%四甲基氢氧化铵(磷酸调pH至5.5)：乙腈：甲醇：=500：300：200，每1000ml 加入 0.1mol/L乙二胺四醋酸二钠 0.4ml →B%5%(60min) 爆速1.0mL/min度检 测 PDA 254nm 40°℃ 进样量： 20pL HPLC Conditions ： Column： CAPCELL PAK C18 AQ；4.6mm i.d.×250mm Mobile phase： A： 0.25%TMAH(adjust pH to 5.5 with phosphoric acid)， add 0.4ml of 0.1mol/L EDTA-2Na in every1000 ml of solution B：0.25% TMAH(adjust pH to 5.5 with phosphoric acid)： CH3CN： CH3OH：=500：300：200， add0.4ml of 0.1mol/L EDTA-2Na in every 1000 ml of solution B 5%(0min)→5%(2min)→25%(25min)→50%(42min)→5%(43min)-5%(60min)Gra Flow rate：1.0mL/min Temp： 40°C Detection：：PDA 254nm Inj.vol. ： 220pL 对供试品分析的结果中，我们发现 AQ 柱能够使供试品中各杂质均能够得到良好的基线分离。当然，为了有更多的色谱柱选择，在同样的分析条件也下尝试中等极性的 MGII柱，高碳载量的 SUPERIOREX ODS， 强耐碱性的BB柱对系统适用性溶液进行分析，分析结果如图4， 5，6. 图4MGII对系统适用性溶液分析 图5ODS 对系统适用性溶液分析 图6 BB对系统适用性溶液分析 分析结果发现使用 MGII， SUPERIOREX ODS， BB对系统适用性溶液进行分析，主峰与其前杂质J峰的分离度分别为0.95，1.02，0.66，未能符合药典分离要求。 综上实验所述，使用资生堂强极性的 C18AQ 柱能够使头孢地尼系统适用性溶液中各杂质峰与主峰间良好的分离，且符合药典要求的各杂质峰之间的分离度要求。 ( 张虎 郭彦丽 )