环脂肽类似物中液相分析检测方案(液相色谱柱)

May. 06，2016LC Application Lab， Shiseido ChinaNo.31， BDA International Business Park，2 Jing Yuan Street， BeijingEconomic Technological Development Zone，Beijing， China 100176Phone 010-6785-6801，FAX 010-6785-6882 mAU 环脂肽类似物的液相分析 尝试使用多款不同键合相色谱柱，对环脂肽样品进行分离。结果如图1所示，分别使用C8 DD、ADME(金刚烷基)、C18SPOLAR、C18 MGII、CORE PFP(核壳型五氟苯基)五款色谱柱，其中 C18 SPOLAR、C18MGII、CORE PFP 色谱柱得到较好分离趋势，分离度分别为1.31、1.22、1.21。 Minutes 图1不同键合相色谱柱分析谱图 HPLC Conditions： 色谱柱：CAPCELL PAK C8 DD S5；4.6mm i.d.x250mm CAPCELL PAK ADME S5；4.6mm i.d.×250mmC18 SPOLAR S5；4.6mm i.d.×250mm CAPCELL PAK C18 MGII S5；4.6mm i.d.×250mm CAPCELL CORE PFP S2.7；4.6mm i.d.×150mm 流动相： DD/ADME/SPOLAR/MGII乙腈/水=70/30PFP 乙腈/水=45/55 流DD/ADME/SPOLAR 1.0 mL/minPFP 0.8mL/min温 检浓 35°C PDA 220nm 未知，客户配置样品直接进样 进样量： 10pL (PFP/MGII 5pL) 由于目前核壳型 CORE PFP 色谱柱无法制备(CP PFP；S5 色谱柱生产中)，因此使用分离较好的 C18 SPOLAR色谱柱进行进一步条件筛选，尝试使用0.1%甲酸以及 20mmol/L 甲酸铵条件，均未见分离度明显改善。同时尝试能够耐强碱的 C18 BB色谱柱上以氨水调pH=10/乙腈条件分析，依然未得到分离度明显提升。 最终，我们通过调整乙腈/水比例，延长保留时间后， C18 SPOLAR 色谱柱达到分离度1.8分离结果，如图2所示。 图2 C18 SPOLAR 优化条件分离结果 图上所示数字从上到下分别为分离度和保留时间 HPLC Conditions： 色谱柱： C18 SPOLAR S5；4.6mm i.d.×250mm 流动相： 乙腈/水=59/41 流1.0 mL / min温 检浓 35°C PDA 220nm 未知，客户配置样品直接进样 进样量： 10pL 综上所述，使用 C18 SPOLAR S5；4.6mm i.d.x250mm 能够获得环脂肽类似物与其杂质间的良好拆分，最终得到分离度1.832。