槐米中芦丁检测方案(紫外分光光度)

紫外分光光度计测定不同浸取方法对槐米中芦丁产出的影响 马云峰1，薛瑰玲2， 尚富德1 * (1.河南大学 生命科学学院，河南 开封 475001；2.开封市第二人民医院，河南 开封 475001) 摘要：本文用硼酸－乙酸钠测定了三种方法浸取槐米中芦丁的含量，用水在100℃时浸取30min测得芦丁含量为12％，而50％的醇溶液在90℃浸取30min测得芦丁含量为19％. 而用50％的乙醇溶液，在pH值为8.0，65℃的条件下浸取12h，测得芦丁含量为26％。由此可见，水煎的效率仅为50％左右。 关键词：槐米；芦丁；测定 The Effect of Different Infiltration Methods on Rutin Production in Dry Bud of Sophora japonica L. by Determination of Ultraviolet Spectrophotometer MA Yun-feng1 ，XUE Gui-ling2 ，SHANG Fu-de1 * (1.College of Life Science of Henan University, Henan Kaifeng 475001; 2.Second People’s hospital of Kaifeng, Henan Kaifeng 475001) Abstract: Rutin in Sophora japonica has been determinated through three ways by boracic acid and sodium acetate. The first one is 12％ by infiltration for 30mins in water at 100℃, the second is 19％ by infiltration for 30mins in 50％ alcohol at 90℃, the third is 26％ by infiltration in 50％ alcohol at 65℃ for 12 hours under the condition of pH 8.0. We conclude that the efficiency of infiltration in water at 100℃ is about 50％. Key words: Sophora japonica; Rutin；Determination 槐米为豆科植物国槐(Sophora japonica L.)的干燥花蕾，性微寒，味苦；能凉血，止血，泻火；用于便血，尿血，痔疮出血等以及高血压症[1]。槐米可用为提取芦丁的原料。芦丁(Rutin)又称芸香苷，有抗炎、抗病毒、维生素P样等作用。临床上用于防治脑溢血、高血压、视网膜出血等症状[2]。对于测定芦丁的含量有单扫示波极谱法[3]及高效液相色谱法[4]。二者仪器昂贵，操作麻烦。花色苷在465～550nm之间有吸收峰，所以如采用硝酸铝比色法在510nm测定，会受到花色苷的影响。而硼酸－乙酸钠的混合物除了花色素和花色苷外，用于鉴别所有黄酮类化合物中的O-二羟基基团[5]，此方法简便易行。 1材料与仪器 槐米，当地同仁堂药店购买，挑出杂质，保留干燥花蕾用于实验。 TU—1800紫外可见分光光度计 北京普析通用仪器有限责任公司 马云峰 (1977.1－)，男，硕士，主要从事植物资源中黄酮类化合物的研究。 *为通讯作者：fudeshang@henu.edu.cn 芦丁（Fluka进口分装）； 硼酸，乙酸钠，乙醇均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 显影液的制备 称取0.80g硼酸和1.0g乙酸钠,加入乙醇溶解，倒入100ml容量瓶中用乙醇定容，4℃以下保存备用。 2.2标准曲线的制备 准确称取芦丁10.0mg,用50％的乙醇溶解，100mL容量瓶定容。分别取1mL、2mL、3mL、4mL、5mL加入到10.0mL容量瓶中，加入5.0mL显影液后，以50％的乙醇至刻度。用紫外分光度计在320nm－420nm间进行扫描，最大吸收峰在387nm处。根据标准曲线求出回归方程y=2.705x+0.0019, r=0.9997 2.3样品的测定 分别称取1.00g槐米磨碎后放三角烧瓶中，加入亚硫酸钠和硼酸钠溶液。编号1用水在100℃时煮沸浸取30min；编号2在50％的醇溶液中煮沸，温度为90℃浸取30min；编号3用50％的乙醇溶液，在pH值为8.0，65℃的条件下浸取12h。然后过滤，100mL容量瓶定容。浓度再稀释10倍后，分别取1mL样品，放入10.0mL容量瓶中，加入5mL显影液后，以50％的乙醇至刻度。用紫外分光度计在387nm处测吸收值（表1）。 表1 吸收值及含量 编号1 编号2 编号3 吸收值 0.319 0.523 0.711 芦丁含量/ mg/g 117 193 262 百分比/％ 11.7 19.3 26.2 3 讨论 槐米作为常用中药，一般采用煎煮的方式。本文的数据证明用水煎煮并不是最好的方法，因为芦丁的水溶性很差，1g芦丁可溶于8000mL水、200mL沸水[2]。用醇溶液煎煮虽然温度稍低，但浸出量比用水提高65％，所以，研究提高在常规情况下芦丁浸出率的方法是下一步工作的重点。芦丁(C27H32O16)取代基为5，8，3′，4′-OH 3-鼠李苷，所以芦丁为黄酮苷类化合物，一般采用碱性稀醇对黄酮苷类化合物浸取[6]。如果碱性过强又会破坏其母核结构，编号3实验pH值为8.0；基于同样的原因采用65℃的条件，以延长浸取时间来提高浸取效率。加入亚硫酸钠可以保护邻酚二羟基，而硼酸钠溶液又可以保护母核。黄酮类化合物的A环(苯酰)是由三个乙酸盐单位首尾缩合而成，B环（肉桂酰）与2、3和4位碳原子由苯基丙酸前体发生。A环的吸收峰在240－280nm之间， B环的吸收峰在300－400nm之间[5]。由于蛋白质与核酸在240－280nm之间有吸收峰，为排除其影响故选300－400nm之间进行扫描。芦丁以甲醇为介质,紫外区361nm处有最大吸收峰。黄酮类母核上的羟基被碱离子化以后，吸收峰会向波长长的方向移动，硼酸又可以加强这种作用。以硼酸－乙酸钠的混合物作为显色液所测得的吸收波长与文献[5]是一致的。邓富良等用高效液相色谱法测定槐米中的芦丁含量，在23％左右[4]。参考文献[1]提供的数据为28％左右。考虑到相应的误差，本实验的结果应该是可信的。 参考文献： [1] 徐国钧主编。生药学[M]. 人民卫生出版社，1987。 [2] 国家医药管理局中草药情报中心站编。植物药有效成分手册[M].人民卫生出版社，1986。 [3] 马志茹等。单扫示波极谱法测定槐米和芦丁制剂中芦丁的含量[J]。中草药，1998，29(2):86~88. [4] 邓富良，陈本美，陈国华等。高效液相色谱法测定槐米中的芦丁含量[J].湖南医科大学学报，2000，25(6):597~598. [5] J.B.哈本等编，戴伦凯、谢如玉等译。黄酮类化合物[M].科学出版社，1983. [6] 张德权，台建祥，付勤。生物类黄酮的研究及应用概况[J]。食品与发酵工业 1999,25(6):52-56.