营养辅助食品中维生素E、生育酚检测方案(超临界色谱)

LAAN-A-LC-C047 ApplicationnNo.L501News用户服务热线电话： 800-810-0439第一版发行行：2016年1月 ApplicationNews 超临界流体色谱法 Supercritical Fluid Chromatography No.L501 使用离离 SFE-SFC-PDA分析市售营养辅助食品中的维生素E Analysis of Vitamin E in a Commercial Supplement by Offline SFE/SFC/PDA 维生素E也被称为生育酚，是一种脂溶性维生素，也是一种可以在人体内产生抗氧化作用的重要化学物质。生育酚根据甲基的数量和位置分为 a、β、y、6等4种。a-生育酚的抗氧化作用的活性最强，所以市售的维生素制剂等众多营养辅助食品中都会添加a-生育酚。由于是高脂溶性成分，所以使用超临界流体对生育酚进行迅速简便地萃取备受瞩目。本文向您介绍使用超临界流体对a-生育酚进行萃取(SFE) 的过程。 ■离线SFE 系统 Offline SFE System 在已发布的应用报告中介绍了在线 SFE-SFC 系统有很多希望与 SFC 以外的现有分析方法进行组合使用的需求。因为样品的处理简单， SFE领域也受到了瞩目。SFE 具有以下特点： 1.通过超临界流体的高透过性和高扩散进行迅速高效萃取 2. 在温和的温度条件、遮光处理下萃取不稳定化合物 3.与溶剂萃取相比成本低 4.萃取过程完全自动化 5.萃取样品容易处理 6.支持各种分析方法 图1所示为离线 SFE 系统的流路结构。 由图可知，背压控制单元BPR的上游在超临界状态下，控制SFE 单元内的阀，通过将超临界流体封入容器的静态萃取和使其通过容器的动态萃取，可以迅速高效地萃取目标成分。 输液系统采用了配置低压 GE梯度比例阀的 HPLC用泵，可以自动调整每个样品的改性剂类型(包含来自捕获柱的洗脱液，最多4种)和二氧化碳的浓度，从而在最佳条件下进行萃取。萃取物被保留在捕获柱中，将输液泵的低压阀切换为对应捕获柱中洗脱溶剂的模式并进行洗脱，使用馏分收集器收集目标组分到试管中。 ■ α-生育酚的SFE 分析 SFE Treatment for a-Tocopherol 实测样品即市售营养辅助食品，其胶囊内容物为膏状，具有吸湿性，可使用岛津公司销售的 SFE 用脱水剂“MIYAZAKIHydro-Protect”1g 与275 mg 膏状物混合，再将其填 充到 SFE 萃取容器中(图2)。 图2对营养辅助食品进行 SFE 的前处理准备步骤 Preliminary Pretreatment for Supplement Sample Before SFE Modifier Elution solvent 图1离线线临界流体萃取(SFE)系统的流路结构 Flow Diagram of Supercritical Fluid Extraction (SFE) System 表1为SFE条件。选择 Shim-pack UCX-SIL作为分析柱，对在线 SFE-SFC分析中的各种条件进行优化，按照下表2中所示的条件进行了分析。 表1a-生育酚的 SFE 条件 离线SFE： 萃取容器 ：5mL 萃取溶剂 ：超临界CO2流体 流速 ： 5 mL/min 温度 ：40℃ 背压调节器压力 ：15MPa 萃取时间 ： 15min (静态 2 min→动态 3 min)×3次 分析柱和降压条件 分析柱 ： Shim-pack VP-ODS (50 mm Lx4.6 mml.D.) 柱温 ：60℃ 降压时间 ：10 min (15-25 min) 回收条件 洗脱溶剂 ：己烷 流速 ： 2 mL/min 柱温 ：60℃ 馏分时间 ： 3.5 min (25-28.5 min) 营养辅助食品中a-生育酚的 SFE 评估 SFE Evaluation of a-Tocopherol in a Commercial Supplement 对通过 SFE获得的a-生育酚萃取物进行SFC分析和萃取评估。表2为分析条件。另外，使用己烷将萃取物定容为 10mL 后， 用于 SFC 分析。图3为代表性的 SFC 色谱图。 表2a-生育酚的 SFC分析条件 SFC条件： 色谱柱 ： Nacalai COSMOSIL Cholester (250 mm L.x4.6 mm I.D.， 5 mm) 流速 ：3mL/min 改性剂 ：异丙醇 时间程序 ：2%(0min)-20%(10 min)-50%(10-12 min) 柱温 ：40℃ 背压调节器压力 ： 15MPa 进样体积 ：2mL 图3对SFE分析得到的营养辅助食品中的a-生育酚进行 SFC分析SFC Analysis of a-Tocopherol Obtainedby SFE from a Commercial Supplement 对通过 SFE 获得的a-生育酚，我们按照表2所示的条件进行SFC分析以评估萃取工艺。结果显示，在样品浓度为 0.5 ug/L到2.0 ug/L的范围内线性良好，表3表明1.0 ug/L 浓度的样品保留时间、峰面积和峰高均得到了高度重复性。 图4 SFC分析得到的标准a-生育酚的线性 Linearity for Standard a-Tocopherol Obtained by SFC 表3 a-生育酚标样的SFC分析重复性(n=6) No Retention Time (min) Area Height Average 7.242 127，338 19，682 RSD(%) 0.057 0.573 0.274 表4为通过 SFE处理得到的α-生育酚的重复性和相对理论值(7.4 mg)的回收率；图5是多个色谱图的重叠谱图。由此可知，只需进行一次萃取即可得到良好的回收率和重复性，说明离线 SFE分析对于维生素E类的萃取是极其有效的方法。 表4 SFE得到的营养辅助食品中a-生育酚的重复性和回收率Repeatability and Recovery of a-Tocopherolin a Commercial Supplement Using SFE No Conc.(mg/mL) Recovery (%) 1 0.776 104.46 2 0.780 105.00 0.772 103.92 4 0.790 106.35 5 0.761 102.44 6 0.758 102.04 Average 0.773 RSD(%) 1.549 图5 SFE 提取的a-生育酚的重叠色谱图 Overlaid Chromatograms for a-Tocopherol After SFE ( 免责声明： ) ( *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； ) ( *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。 ) ( 如有变动，恕不另行通知。 ) 维生素E也被称为生育酚，是一种脂溶性维生素，也是一种可以在人体内产生抗氧化作用的重要化学物质。生育酚根据甲基的数量和位置分为α、β、γ、δ等4种。α-生育酚的抗氧化作用的活性最强，所以市售的维生素制剂等众多营养辅助食品中都会添加α-生育酚。由于是高脂溶性成分，所以使用超临界流体对生育酚进行迅速简便地萃取备受瞩目。在线SFE-SFC 系统有很多希望与SFC以外的现有分析方法进行组合使用。因为样品的处理简单，SFE领域也受到了瞩目。SFE具有以下特点：1. 通过超临界流体的高透过性和高扩散进行迅速高效萃取2. 在温和的温度条件、遮光处理下萃取不稳定化合物3. 与溶剂萃取相比成本低4. 萃取过程完全自动化5. 萃取样品容易处理6. 支持各种分析方法本文向您介绍使用超临界流体对α-生育酚进行萃取（SFE）的过程。