UV1500比色法测定酱油中羟脯氨酸含量的探讨

比色法测定酱油中羟脯氨酸含量的探讨美析仪器 摘要：文章采用比色法对酱油中羟脯氨酸含量测定进行了研究。结果表明，该方法能够有效地测定酱油中羟脯氨酸含量，加标回收率为81.4%~91.2%(n=3)，相对标准偏差为2.3%~3.6%(n=3)· 关键词：酱油；羟脯氨酸；比色法；美析仪去 www.macylab.com；UV-1500 酱油按生产工艺分为酿造酱油配制酱油两大类；按食用方法分为烹饪酱油和餐桌酱油。酿造酱油是以大豆(或脱脂大豆)小麦和(或)麸皮为原料，经过微生物发酵制成的具有特殊色香味的液体调味品。配制酱油是以酿造酱油为主体(以全氮计不得少于50%)，与酸水解植物蛋白调味液食品添加剂等配制而成的液体调味品。但是一些不法商人将动物皮水解液添加到酱油中，以增加酱油的鲜味。动物水解蛋白的特有成分为I-羟脯氨酸和羟赖氨酸，且羟脯氨酸的含量较高，而大豆蛋白不含有此成分。利用这一特性就可进行动物水解蛋白质的鉴定· 材料试剂与仪器 111 材料 市售酱油5种。 112 试剂 盐酸，氢氧化钠，柠檬酸，乙酸钠，正丙醇，氯胺T，对二甲氨基苯甲醛，高氯酸，异丙醇，L(-)-羟脯氨酸等试剂，均为分析纯。 113主要仪器 电子天平 JA21002；紫外可见分光光度计UV-1500；电热恒温水浴锅。 2 实验方法[1-4] 试剂配制 缓冲溶液：将50g柠檬酸、2613 g氢氧化钠和14611g结晶乙酸钠(GB694)溶于水，至1L，此溶液与200 mL 水和 300mL正丙醇混合。 氯胺T试剂：将1.41g氯胺T溶容10mL水中，依次加入10mL正丙醇和80mL缓冲溶液。 显色剂：称取10g对二甲氨基苯甲醛，用35 mL高氯酸(GB623)溶解，缓慢加入65mL异丙醇。羟脯 氨酸标准储备液500 Lg/mL：准确尔取羟脯氨酸标准品50.0mg，用少量水溶解于100mL容量瓶中，加入一滴6 mol/L盐酸，定容至刻度。 羟脯氨酸标准工作液：吸取5mL羟脯氨酸标准储备液于500 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释定容 212羟脯氨酸标准曲线的绘制参照乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定等有资 料，绘制羟脯氨酸标准曲线。准确吸取羟脯氨酸标准工作液10.0，20.0，30.0，40.0mL，分别用蒸水水定容 至100mL·吸取不同浓度上述稀释好的溶液5 mL于具塞试管中，加入 2. 00 mL氯胺T，摇匀后在室温下放置20 m in， 加入2.00 mL 齐色剂，摇匀后迅速将试管移至60 e的水浴锅中，保温20 min，再用流动的自来水冷却试管至少 3 m in， 室温下放置30 m in， 最后用紫外可见分光光度计在(558±2nm)波长处测定吸光度，绘制标准曲线。 213 酱油处理与羟脯氨酸的测定 吸取酱油5 mL于顶空瓶中，加12mol/L 盐酸5mL，然后充入高纯氮气；在充氮气状态下拧紧螺丝盖，将已封口的水解管放在105e的恒温干燥箱内，水解12h后，取出冷却。趁热将水解溶液转入 100 mL容量瓶中，并用蒸馏水定容至刻度混匀过滤·吸取5mL 水解液于100 mL三角瓶中，氢氧化钠溶液调节pH 为(8?0.2)，定容至100 mL容量瓶中，摇匀备用。再按2.2中方法处理，最后在波长(558?2)nm处比色。酱油中羟脯氨酸含量按下式计算： 式中：X为酱油中L(-)-羟脯氨酸的含量，g/dL· C为从标准曲线上查得相应的L(-)-羟脯氨酸量，Lg/mL· 214 回收率测定 分别吸取酱油5mL，各加入0.01，0.05，0.10 g/dL标准羟脯氨酸；分别吸取蒸馏水5 mL，各加入0.01，0.02，0.03，0.04 g/dL 标准羟脯氨酸；按上述 表1 羟脯氨酸标准样品浓度与吸光度的测定结果 羟脯氨酸标准工作液体积(mL) 羟脯氨酸浓度(Lg/mL) )吸光度(A) 0.0 0.0 0.000 10. 0.5 0.11C 20.0 1.0 0.210 30.0 1.5 0.310 40.0 2.0 0.401 312 万方法的加标回收和精密度试验 取6个样品，按2.4的方法分别测定，计算回收率，结果如表2所示。 表2 样品中羟脯氨酸含量测定的加标回收率及精密度(n= 3) 标准加入量 本底值 测定值 回收率 RSD (g/dL) (g/dL) (g/dL) (%) (%) 0.01 未检出 0.00889 88.9 2.8 0.02 未检出 0.01667 83.4 2.3 0，03 未检出 0.00266 88.7 3.6 0.04 未检出 0.0344 86.0 3.0 0.01 0.00878 0.01794 91.2 3.1 0.05 0.00878 0.05063 83.6 3.5 0.10 0.00878 0.09421 81.4 3.4 由表3数据可看出，样品同收率在81.4%~91.2%之间，平均回收率为86.17%，可基本满足羟脯氨酸含量测定的需要。 313 酱油中羟脯氨酸含量的测定 将吸取5mL酱油，按2.3的方法处理后，测定吸光度并计算羟氨酸的含量，结果如表3所示· 表3 酱油中羟脯氨酸的含量 样品号 样品量 吸光度 浓度C 羟脯氨酸 (mL) A (Lg/mL) (g/dL) 样品前处理步骤进行实验，测定羟定氨酸含量，按式(2)计算回收率。每一样品做3次平行试验，并对结果进行误差分析· 式中：X为加入羟脯氨酸后样品中羟脯氨酸的测定总量，g/dL； Y为样品中羟脯氨酸测定量， g/dL；Z为加入标准羟脯氨酸量， g/dL·