调味品中氨基酸检测方案

天美Marketing天美(中国)科学仪器有限公司TECHCOMP (CHINA) LTD.FAX：010-64060202 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL：010-64010651 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn Chromaster柱后衍生法测定氨基酸 氨基酸是蛋白质的基本结构单位和生物代谢过程中的重要物质，氨基酸分析技术对蛋白质化学、生物化学和整个生命科学研究以及产品研发、质量控制和生产管理等具有重要意义，广泛地应用于化工、轻工、食品加工、医药行业的医药、食品、保健品的分析。由于大多数氨基酸无紫外吸收和荧光发射特性，为提高分析检测灵敏度和分离选择特性，通常将氨基酸进行衍生，衍生方式有柱前衍生法和柱后衍生法。 本文使用Chromaster 高效液相色谱仪配柱后衍生反应单元，采用茚三酮(NIN)柱后衍生法测定日本淡酱油中的氨基酸，得到较好的分离度，并且重现性较好。 ● 仪器配置 CM5110 泵×2 CM5210 自动进样器(带温控) CM5310 柱温箱 CM5420 UV-VIS检测器 CM5510 反应单元(带N2气控制单元) 氨基酸NIN分析附件包、分析柱 流动相 反应液1反应液2清洗液 ● 色谱条件 分析析：#2619PH (4mmI.D.×150 mm) 保护柱：#2619(4mm I.D.×5mm) 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 除氨柱： #2650L(4mm I.D.×120mm) 流动相：MCI缓冲液 L-8900 PH-Kit ( PH-1、PH-3、PH-4、PH-RG) 流速： 0.4mL/min 柱温：57℃ 反应液：茚三酮试剂、和光氨基酸自动分析仪用附件包(R1/R2=50/50) 反应液流速：0.3mL/min 反应温度：130℃ 检测波长：440 nm、570nm(2波长同时检测) 进样量：20pL(2 nmol/20pL) 样品前处理 淡酱油 1mL 一5%三氯乙酸 1mL 离心分离(10000rpm、10 min) 取上清液 一用0.02 mol/L盐酸稀释50倍 过滤(0.2um滤膜) 进样分析(注入20uL) ● 实验结果 1.标样测定 图1 17种氨基酸标样色谱图 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 2.日本淡酱油样品测定 图2?日本产清淡酱油中的氨基酸色谱图 ● 结论 使用 Chromaster高效液相色谱仪配柱后衍生反应单元检测氨基酸，由于不用进行手动衍生，方法的分离度、重现性好，样品前处理简单，不易受杂质干扰，可对氨基酸进行精密的定性定量分析，并且得到的数据可靠性高。