酱油中3-氯-1，2-丙二醇检测方案

HVP液和焦糖色中3-氯-1，2-丙二醇的 GC-MS检测报告 北京东西分析仪器有限公司北京100049 摘要：本文采用同位素稀释技术，以d5-3-氯-1，2一丙二醇(d5-3-MCPD)为内标定量.试样中加人内标溶液，以硅藻土(Extrelut"2)为吸附剂，采用柱层析分离得 3-MCPD，用七氟丁酰基咪唑(HFBI)溶液为衍生化试剂。采用选择离子监测(SIM)的质谱扫描模式进行定量分析，内标法定量。 关键词：3-氯-1，2-丙二醇，衍生，GC-MS，内标法定量 酱油是日常生活常用的调味料之一，通常以植物蛋白为原料。 HVP液即植物蛋白水解液，植物蛋白在水解过程中会产生3-氯-1，2-丙二醇(3-MCPD)。欧洲环保局已将它列为潜在的致癌物质，长期大量食用3-MCPD可能引起肾脏及生育等方面的疾病。3-MCPD 检测的早期研究多采用气相色谱法，本文参照 GB/T 5009.191-2006《食品中氯丙醇含量的测定》标准，采用国产的气质联用仪 GC-MS 3100 对HVP液和焦糖色中的 3-MCPD 进行分析测定。 1实验部分 1.1 仪器及材料 GC-MS 3100 (北京东西分析仪器有限公司)；玻璃层柱：柱长40 cm ， 柱内径2cm；旋转蒸发仪；氮气蒸发器；恒温箱或其他恒温加热器；涡漩混合器。 分析纯试剂和蒸馏水。2，2，4-三甲基戊烷；乙醚；正己烷；氯化钠；无水硫酸钠；ExtrelutTM20，或相当的硅藻土；七氟丁酰基基咪唑；3-氯-1，2一丙二一标准品(3-MCPD， 纯度>98%)；d5-3-氯-1，2一丙二醇标准品(d5-3-MCPD，纯度>98%)。 1.2 分析条牛 五栋大楼A2座6层， 100044 ( East & W est Analytical Instruments， Inc.Building A2， 6th F loor， No. 5 Plaza，#9 Che Gong Z huang S t，Western District， Beijing， China， 100044 ) 色谱条件：色谱柱： DB-5MS(30mx0.25mm×1.0pm)(或等效毛细管色谱柱)；载气：氦气；柱流量：1ml/min ；进样方式：不分流；进样量：1pL；进样口温度：250℃；柱箱升温程序：50℃保持2min， 然后以2℃/min 的速率升至90℃，再以40℃/min 的速度升至250℃，保持 5min， 质谱条件：EI源；电子能量：70ev；离子源温度：200℃；接口温度：250℃；扫描方式：SIM ；3-MCPD 的特征离子为 m/z 253、275、289、291、453 ，m/z 253 为定量离子 ；d5-3-MCPD的特征离子为 m/z 257、294、296、456， m/z 257为定量离子；溶剂延迟时间：12 min。 1.3样品处理 1.3.1相关溶液的配置 饱和氯化钠溶液(5 mol/L)：称取氯化钠290 g，加水溶解并稀释至1000 mL。 正己烷一乙醚(9十1)：量取乙醚100 mL， 加正己烷900 mL，混匀。 3-MCPD标准储备液(1000mg/L)：称取3-MCPD 25mg(精确至0.0 1mg)， 置25mL容量瓶中，加正己烷溶解，并稀释至刻度。 3-MCPD中间溶液(100 mg/L)：准确移取3-MCPD储备液10mL， 置100mL量瓶，加正己烷稀释至刻度。 3-MCPD系列溶液：准确移取3-MCPD中间溶液适量，置25mL量瓶中，加正己烷稀释至刻度(浓度为0.00mg/L ， 0.05 mg/L， 0.10 mg/L ， 0.50 mg/L ， 1.00 mg/L ， 2.00 mg/L ， 6.00mg/L)。 d5-3-MCPD储备液(1000 mg/L)：称取d5-3-MCPD 25 mg(精确至0.01mg)， 置25ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解，并稀释至刻度。 d5-3-MCPD内标溶液(10 mg/L)：准确移取d5-3-MCPD储备液1mL，置100mL容量瓶中，加乙酸乙酯稀释至刻度。 1.3.2试样制备 称取试样4.00g，置100mL烧杯中，加d5-3-MCPD内标溶液(10mg/L)50pL，加饱和氯化 ( T el ： 010-88393500 ) 五栋大楼A2座6层， 100044 钠溶液6g，超声15 min。 1.3.3试样提取 将一袋Extrelut-20柱填料分为两份，取其中一份加到试样溶液中，混匀；将另一份柱填料装入层析柱中(层析柱下端填以玻璃棉)。将试样与吸附剂的混合物装入层析柱中，上层加1 cm高度的无水硫酸钠。放置15 min后，用正己烷一乙醚(9+1)80mL洗脱非极性成分，并弃取。用乙醚250mL洗脱3-MCPD (流速约为8 mL/ min )。在收集的乙醚中加无水硫酸钠15g，放置10 min后过滤。滤液于35℃温度下旋转蒸发至约2 mL ，定量转移至5mL具塞试管中，用乙醚稀释至4mL，在乙醚中加少量无水硫酸钠，振摇，放置15 min以上。 1.3.4衍生化 移取试样溶液1mL ，置5mL具塞试管中，并在室温下用氮气蒸发器吹至近干，立即加入2，2，4-三甲基戊烷1mL。用气密针加入七氟丁酰基咪唑0.05 mL，立即密封。涡漩混合后，于70℃保温20min。取出后，放至室温，加饱和氯化钠溶液3mL；涡漩混合30s，使两相分离。取有机相加无水硫酸钠约为0.3g干燥。将溶液转移至自动进样的样品瓶中，供GC-MS测定。 1.3.5标准系列溶液的制备 吸取标准系列溶液各0.1mL， 加d5-3-MCPD内标溶液(10 mg/L)10 pL，加2，2，4-三甲基戊烷0.9 mL， 用气密针加入七氟丁酰基咪唑0.05mL，立即密封。以下步骤与试样的衍生化方法相同。 2结果与讨论 2.1绘制标准曲线 将 3-MCPD、d5-3-MCPD 标准系列溶液经衍生后进样，全扫描质谱图分别如图1和图2所示。 ( T el ： 010-88393500Fax： 010-88393506 Web： www.ewai-group.com M icroblog： e.weibo . com/dongxifenxi ) 图1 3-MCPD 衍生物质谱图 图22dd5-3-MCPD 衍生物质谱图 计算3-MCPD(m/z 253)和 d5-3-MCPD(m/z 257)的峰面积比，以各系列标准溶液的进样浓度之比为横坐标，3-MCPD(m/z 253)和d5-3-MCPD(m/z257)的峰面积比为纵坐标绘制标准曲线。 2.2样品测试结果 HVP液和焦糖色两个样品进行前处理，质谱采取SIM 离子扫描的方式进行检测。焦糖色样品的 SIM 离子扫描方式下的 TIC色谱图如图3所示。 ( East & W est Analytical Instruments， Inc.Building A2， 6th F loor， No. 5 Plaza，#9 Che Gong Z huang S t，Western District， Beijing， China， 100044 ) 图3焦糖色 SIM 选择离子 TIC图 由标准曲线计算得两个实际样品 HVP 液和焦糖色的 3-MCPD 含量分别为 0.07mg/L 和0.28mg/L。 3结论 经此方法检测，两个实际样品 HVP 液和焦糖色的 3-MCPD 含量分别为 0.07mg/l 和0.28mg/l。尚未对方法的检出限和精密度做详细研究。 ( 参考文献： ) ( [1]罗香，刘波平，张小林，等.GC-MS 法测定焦糖色中的3-氯-1，2-丙二醇的含量[J].现代测 量与实验室管理，2007(3)：25-26. ) ( [2]赵雅松，赵赵俊平，路勇，等.气相色谱质谱联用法测定酱油中的3-氯-1，2-丙二醇[]].食 品科技，2010(10)：283-286. ) ( 北京东西分析仪器有限公司北京市西城区车公庄大街9号五栋大楼A2座6层， ) ( East & West Analytical I nstruments， I n c.Building A2， 6 th Floor， No. 5 P laza，#9 Che Gong Zhuang St，Western District， Beijing， China， 100044 ) 北京东西分析仪器有限公司Tel： ax： eb： www.ewai-group.comMicroblog： e.weibo.com/dongxifenxi北京市西城区车公庄大街号 East & West Analytical Instruments， Inc.Building A， th Floor， No. Plaza，# Che Gong Zhuang St，Western District， Beijing， China，京东西分析仪器有限公司Fax： eb： www.ewai-group.comMicroblog： e.weibo.com/dongxifenxi北京市西城区车公庄大街号