中药中限度检查检测方案

离子色谱法测定天麻中二氧化硫残留含量 李继12，徐长根1，孟新芳1，刘海静Ⅰ，郝武常3 (1.陕西省食品药品检验所，陕西西安710061； 2.陕西师范大学，陕西西安710062；3.陕西省新药审评中心，陕西西安710061) 摘要：目的建立离子色谱法测定天麻中二氧化硫残留量的检测方法。方法样品经30mLL盐酸水溶液蒸煮，氮气作载气，导出后用30mLL双氧水氧化吸收，再煮沸除去剩余的双氧水，用去离子水转移至25mL量瓶中，并稀释至刻度作为供试溶液，使用离子色谱仪分析。用 A-SUPP5-150 阴离子分析柱， 3.2mmolL碳酸钠-1.0mmolL’碳酸氢钠为淋洗液，流速为 0.7mL min ； 进样量为 20uL。结果线性范围(以SOz计)为1.667~133.38ugmL"，平均回收率为98.0%。结论测定方法简便，精密度、重现性良好，准确度较高。 关键词：天麻 二氧化硫 离子色谱法 Study on the method for detection ofresidualsulfur dioxide in Gstrodiae rhizoma LI Jil，2， XU Changgeng，MENG Xinfang， LIU Haijing， HAO Wuchang(1.Shaanxi Provincial Institute for Food and Drug Control， Shaanxi Xi'an 710061，China； 2. College of Life Science Shaanxi Normal University，Shaanxi Xi 'an710062， China； 3.The Centre ofFood and Drug Evaluation and Registration ofShaanxi Province，Shaanxi Xi'an 710061， China) Abstract： Objective To establish an ion chromatography method for thedetermination of residual sulfur dioxide in Gstrodiae rhizoma. Methods Steam fromsamples distilled by 30mL Lhydrochloric acid solution， transferred by N2， wasabsorbed by 30mLL hydrogen peroxide. The absorption liquid was analyzed by ionchromatography. A-SUPP5-150 anion analytical column was used with eluentconsisted of 3.2mmoL LNazCOs and 1.0mmoLLNaHCOs solution.The velocityof flow was 0.7mL min. Results Linear range was 1.667~133.38ug mL’(countedby SO2)， the average recovery was 98.0%. Conclusion The method is easy to operateand shows good reproducibility and accuracy for determination of residual sulfur 陕西省科学技术研究发展计划项目(编号：2008K16-03(1)). 第一作者 Tel： (029)85239845； E - mail： liji_80@126.com dioxide in Gstrodiae rhizoma. Key words： Gstrodiae rhizoma； sulfur dioxide： ion chromatography 据《本草纲目》记载，天麻温，辛，无毒。久服益气力，主治风湿，四肢拘挛，瘫痪不遂；小儿风痛，惊气，助阳气，补五壤七伤；风虚眩晕头痛，通血脉，开窍。传统的加工的工艺中，常采用硫磺熏制的方法对天麻作入药前的处理，以达到防虫防霉的效果，且使天麻外观美白。但采用传统的硫磺熏制工艺加工后，除了可以达到养护的作用外，也带来一些相应的副作用，如药材中的有效成分出降低的现象，入药煎熬后影响药味等；熏制后的药材多会残留二氧化硫，常以亚硫酸盐的形式存在，现代医学研究表明亚硫酸盐具有一定的毒性，可与蛋白质的巯基发生可逆反应，刺激消化道黏膜，出现恶心、呕吐、腹泻等症状，进而导致免疫力下降；过量摄入亚硫酸盐，会影响人体对钙的吸收，并破坏B族维生素；长期摄入则会对肝脏造成损害。随着人们对自身健康的重视，对食品药品中亚硫酸盐引起的安全性问题的关注也越来越多，因此，传统的一些中草药使用国家，如日本、韩国、印度等纷纷出台相关法规限定食品中二氧化硫和亚硫酸盐的残留量B3-4]。传统的硫磺熏制工艺由于其引入的安全问问题已被禁止使用，但由于其工艺简便，效果明显及经济适用依然被一些不法商贩所采用。目前我国食品卫生标准对食品中亚硫酸盐的允许量 (GB206-1996)及检测方法 (GB/T5009.34-1996)做出了规定图，虽尚未对中药材中二氧化硫残留还未规定统一的限量标准，但在《中国药典》2005年版一部已经删除了山药、葛根等加工方法中的硫熏，并在2005年版增补本中增加二氧化硫残留量的测定法。二氧化硫的含量测定方法常为酸蒸馏碘滴法，但在实验中发现该方法由于碘与淀粉的显色反应终点判断因人而异，误差较大。我们研究建立了离子色谱法测定天麻中二氧化硫残留的测定方法，以期达到监测天麻是否采用硫磺熏制的工艺进行处理，更好的控制中药材的质量及安全。该方法能较准确的测定天麻中二氧化硫残留量，并具有简便、快速、灵敏度高、干扰少的特点。 1仪器与试药 1.1仪器 Metrohm IC 761型离子色谱仪，包括电导检测器(瑞士万通公司)；分离柱：A-SUPP5-150阴离子分析柱(瑞士万通公司)；水蒸汽蒸馏仪；超纯水系统(TTL-10B)(北京同泰联科技公司)。 1.2试药 碳酸钠(Na2CO3)、碳酸氢钠(NaHCO3)为优级纯，亚硫酸钠(NazSO3)、硫酸钠(NazSO4)均为分析纯，实验用水均为电阻率为 18.2Mo.cm 的去离子水；样品天麻均采购于西安市药材批发市场。 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱， ASUPP5-150 阴离子柱(150mmx4.0mm)；淋洗液，3.2mmoLL碳酸钠-1.0mmoLL碳酸氢钠，等度淋洗；流速，0.7mL min；进样量，20uL。 2.2 标准曲线系列溶液的配制 精密称取无水硫酸钠 0.1421g 置100mL量瓶中，加去离子水溶解并定容至刻度，再用去离子水逐级稀释成含硫酸根浓度分别为2.5，5.0，10.0，20.0，25.0，50.0和200.0ug*mL'的溶液，作为标准曲线系列溶液。 2.3 样品溶液的制备 将天麻样品粉碎成粗粉，取5g样品，精密称定，置水蒸汽蒸馏装置的样品瓶中，加去离子水300mL，连接好水蒸汽蒸馏装置，快速加入盐酸10mL 加入样品瓶，密封，通入氮气，进行水蒸汽蒸馏，用30mLL'的双氧水20mL 作为接收液，从蒸馏瓶中液体沸腾开始再加热半小时，停止蒸馏，将吸收液置水浴上蒸干，再用去离子水转移至25mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液。 2.4专属性实验 用未熏硫的天麻作阴性对照，按样品溶液的制备方法同法制成阴性对照溶液，以考察是否有假阳性峰干扰测定，测定结果见图1，没有经过硫磺薰制的天麻中未检出二氧化硫。 0 4 12 16 t/min C 图1 天麻离子色谱图 A. SO对照品； B.天麻样品；C.天麻阴性对照样品； 1.SO2峰 Fig.1 IC chromatograms of Gstrodiae rhizome A. SO，reference substance； B. sample； C negative sample；1.SO， 2.5 标准曲线 将上述不同质量浓度的对照品溶液，分别进样20pL，以峰面积和质量浓度绘制标准曲线，得回归方程为 Y=11.009x一1.0186，硫酸根在2.5~200ugmL"(以SO2 记为1.667~133.38ugmL)之间线性良好，相关系数r=0.9997。 2.6精密度实验 取已制备好的同一份样品品液，平行进样6次，记录峰面积，计算RSD 为0.67%，结果表明精密度良好。 2.7检出限实验 在上述色谱条件下，依据 S/N=3 确定检出限， SO4的检出限为 0.25ug*mL. 2.8稳定性实验 取已制备好的同一份样品溶液，分别在0，，1，2，4，!，8，12和24h进样7次，记录峰面积，计算 RSD 为0.79%，结果表明样品溶液24h 内稳定性良好。 2.9重复性实验 取天麻粗粉，按供试品溶液制备方法平行制备6份，按上述测定方法测定，结果样品中 SOz平均含量为 241.3mg kg， RSD 为 1.3%。 2.10回收率实验 称取已知含量的天麻供试品 2.5g 置蒸馏瓶中，精密称定无水亚硫酸钠0.03965g 置100mL量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，再分别精密移取2.0，3.0和4.0mL加入样品，按供试品溶液的制备与测定方法操作，每个质量浓度水平平行3份，以9个测定结果计算回收率，结果平均回收率为 98.0%， RSD为1.3%，见表1 表1加样回收率实验结果 Tab.1 The determination result of recovery 序号 样品含量/mg 加入量/mg 实测值/mg 回收率/% 均值/% RSD/% 1 0.6048 0.4028 1.0055 99.48 2 0.6039 0.4028 1.0022 98.88 3 0.6028 0.4028 0.9924 96.72 4 0.6042 0.6042 1.2003 98.66 5 0.6037 0.6042 1.1846 96.14 98.0 1.3 6 0.6026 0.6042 1.1885 96.97 7 0.6033 0.8056 1.4001 98.91 8 0.6052 0.8056 1.3876 97.12 9 0.6032 0.8056 1.4033 99.31 3 讨论 采用盐酸溶液蒸煮时，蒸出量与盐酸溶液的浓度有关，实验中分别采用5，、10，30，50，和100mLL的盐酸溶液处理样品，结果在30mLL'时，二氧化硫的蒸出量达到平台值，继续增大盐酸浓度时，二二氧化硫蒸出量基本不变。 样品处理时，蒸出量与蒸煮时间有关，实验中分别选择10，20，30，45，60 和 120min 的蒸煮时间处理样品，结果为蒸煮时间在 30min 时，二氧化硫的蒸出量达到较大值，继续延长蒸煮时间，.二氧化硫蒸出量不再增大。 样品的储存需要密封，样品粉碎后随放置时间的延长，含量测定结果有下降的趋势。 ( 参考文献： ) ( [1 ] 刘静静， 刘晓， 李松林， 等. 1 硫磺熏蒸中药材及饮片的研究现状[].中草 药， 2010， 41(8)： 1 403-1406. ) ( [2]陈飞东 ， 戴志远.食品中亚硫酸盐测定方法的研究进展[J].食品研究与开发， 2006， 27(08)： 1 39-142. ) ( [3]冯斌超， 代茹， 卢家炯.离子色谱法检测银耳中亚硫酸盐含量的研究[J].食品与药品， 2008， 10(05)： 50-52. ) ( [4]金红宇， 戴博， 田金改.中药中外源性有害残留物的控制[J].中国药事， 2007， 21(12)：1013-1018. ) ( [5]钟志雄， 梁春穗， 杜达安， 等.离子色谱法测定食品中亚硫酸盐的应用研究[J ] .中国卫生检验杂志， 2003， 13(01)： 29-32. ) ( [6]国家药典委员会.中国药典2010年版[S]. 一 部.北京：化学工业出版社，2010： 27. ) ( [7]国家药典委员会.中国药典2005年版[S].增补本.北京：化学工业出版社 2009： 1 35. )