化学药中主要物质含量检测方案

LMetrohmAB-CN(CC)-00048-04-930-032014- MetrohmAB-CN(CC)-00048-04-930-032014-离子色谱法测定厄贝沙坦中的叠氮根离子(氢氧根体系-930+Dosino) 离子色谱法法定厄贝沙坦中的叠氮根离子(离氧根体系-930+Dosino) 离子色谱应用报告 AB-CN(CC)-00048-04-930-032014 离子色谱法测定厄贝沙坦中的叠氮根离子(氢氧根体系-930+Dosino ) 应用领域 制药行业 关键词 930，氢氧根体系，在线基体消除，电导检测器，厄贝沙坦，叠氮根离子 摘要 本实验以 Dosino 替代 872的一个蠕动泵及六通阀进样，采用在线基体消除法，先以8mM氢氧化钠将目标分析物叠氮根从预浓缩柱上带到色谱柱上后，再以80mM氢氧化钠为淋洗液，等度洗脱，电导检测器检测，测定厄贝沙坦中的叠氮根离子。 样品厄贝沙坦原药，客户提供。 仪器 858 professional sample 1.858.0010 930 Compact IC Flex 1.930.2560 800 Dosino 2.800.0010 配液单元20 mL 6.3032.220 配液单元 10 mL 6.3032.210 Metrosep A Supp 10-75/4.0 6.1020.070 Metrosep A Supp 10 Guard 6.1020.520 HC/4.0 Metrosep A PCC 1 VHC/4.0 6.1006.320 试剂 超纯水 电阻>18.2MQ 氢氧化钠 50%， Merck 甲醇 分析纯 叠氮化钠 Sigma 浓硫酸 分析纯 溶液 淋洗液 80mM氢氧化钠 再生液 100mM硫酸 基体消 90%甲醇水溶液 除溶剂 样品分析 1.标准曲线绘制 将200 ug/mL 的叠氮根离子标准溶液用90%甲醇稀释得到标准曲线系列：0.02，0.05，0.1，0.2，0.5，1，2 ug/mL。将标准系列溶液分别进样，电导检测器检测，以峰面积对溶液的浓度绘制校准曲线，计算线性回归方程。 2.系统适用性 取叠氮根离子、溴离子及硝酸根离子，用90%甲醇稀释成每1mL中各约含0.2ug的溶液，作为系统适用性溶液。上机测定，看三种离子的分离度。 3.样品分析 参照厄贝沙坦公示稿中方法，精密称定厄贝沙坦样品，加90%甲醇溶液溶解并定量稀释制成每1mL中含有20mg样品的溶液，上机测定。以保留时间定性，以峰面积定量。 4.加标回收率测定 参照厄贝沙坦公示稿中方法，精密称定厄贝沙坦样品，加入适量叠氮根离子标准溶液，加90%甲醇溶液溶解并定量稀释制成每1mL 中含有 20mg样品 的溶液，上机测定。以保留时间定性，以峰面积定量。 仪器参数 Polarity Temp. coefficient 2.3%/°C Column temp. 35.0°C Injection volume 250 pL Flow 1.0mL/min Recording time 25.0 min 90%甲醇预冲洗预浓缩柱 4.5mL 结果 1.样品 参照厄贝沙坦公示稿中方法，制成的20mg/mL的厄贝沙坦样品溶液中，连续三次测定叠氮根离子 〈0.02ug/mL。即样品中叠氮根离子含量(1ug/g.2.系统适用性 适用性溶液上机测定，叠氮根离子、溴离子及硝酸根离子三种离子的分离度均在2以上，满足厄贝沙坦公示稿中大于1.5的要求。 3.样品加标测定重复性 所用样品中叠氮根离子含量低于检出限，故方法验证采用加标样品连续5针上机测定验证。结果如下表： 保留时间 测定浓度 1 12.35 0.174 2 12.38 0.174 3 12.40 0.171 4 12.41 0.169 5 12.42 0.169 RSD(%) 0.22 1.428 加标回收试验 (测定值-样品含量)回收率=×100%(200×加标体积)/100 200一加标所用标准溶液浓度为200ug/mL； 100一样品加标后定容体积为100mL。 样品含量ug/mL 加标体积mL 测定值ug/mL 回收率(%) 0 0.05 0.082 82.0 0.1 0.177 88.5 注意事项 1.厄贝沙坦在水中不溶解，故分析系统中有厄贝沙坦存在的管路中必须保证被基体消除试剂90%甲醇充满，不能有水系流动相的存在。2.20mg/mL厄贝沙坦的90%甲醇溶液超声溶解后，常温下易析出少量结晶，故溶解制样后应尽量及时上机检测。 3.在线基体消除所用的预浓缩柱的 PH耐受范围2~12，比A10 色谱柱(PH耐受范围1~14)要窄，故要先以8mM氢氧化钠将目标分析物叠氮根从预浓缩柱上带到色谱柱上后，再以80mM氢氧化钠为淋洗液，等度洗脱。以保护预浓缩柱。 ( 报告人 ) ( 毕志丽 ) L Metrohm 离子色谱法法定厄贝沙坦中的叠氮根离子(氢氧根体系-930+Dosino) 附录 1.标准品普图 2.标准曲线 N3 (Anions) Function：.. A= -9.47183E-3+2.33701E-3x Q Relativestandard deviation. 5.351796 96 Correlation coefficient.. 0.999349 LMetrohm 离子色谱法测定厄贝沙坦中的叠氮根离子(氢氧根体系-930+Dosino) 3.适用性谱图 Anions Component name Retention time Height Area Resolution [min] [uS/cm] [(p5/cm)x min] N3 13.75 0.316 0.123 2.268 Br 15.19 0.316 0.127 2.384 NO3- 17.02 5.187 3.262 invalid 4.样品谱图 5.样品加标谱图 LMetrohm 6.保留时间及测定浓度重复性 Q