植物油中苯并芘检测方案

维泰克科技 油脂中苯并[a]芘的快速检测方法——i-高效液相色谱法 固相萃取柱： HiCapt Benzo 苯并芘专用柱 500mg/6mL 液相色谱柱： HiSep C18-T1150 mmx4.6 mm i.d.，5pm 本文应用维泰克科技(武汉)有限公司的 HiCapt Benzo 苯并[a]芘专用固相萃取取，开发了食用油中苯并[a]芘的快速检测方法，该方法具有以下特点： ● 专利创新的苯并[a]芘专用萃取填料，有效去除食用油中的中性脂肪和维生素等基质干扰 回收率稳定、重现，克服了传统方法中氧化铝活性不稳定的缺陷 方法简单、快速、节省溶剂 1.样品处理： i1.1样品提取：(参考国标GB/TGB/T 22509-2008) 称取 0.4g食用油，取 2mL正己烷溶解，涡混 1min，， 待净化。 1.2固相萃取柱净化：HiCapt Benzo 苯并并专用柱(500mg/6mL) (1) 活化：在HiCapt Benzo 柱中加次加入5mL丙酮，2mL正己烷活化。 (2) 萃取：将待净化液加入 HiCapt Benzo 柱中(在柱中正己烷液面为2mm时上样，此过程不要使柱干涸)，流出液弃去。 (3) 清洗：待上样液完全流出后，用6mL的异丙醇/正己烷(v/v=1：4，体积比)溶液淋洗，淋洗液弃去，将小柱抽干。 (4) 解吸：6mL丙酮解吸，收集解吸液。 (5) 吹干及定容：解解液40℃氮气吹干，加入异丙醇 200uL涡混1分钟， (定容体积可根据仪器的检出限调整为100-500uL)，待上机分析。 注意： 对于香油，或在第(5)步吹干后残留有较多油脂的样品，需要减少取样量(如取0.2g油样)，重新进行样本处理。 2.色谱条件： 色谱柱： HiSep C18-T(150 mmx4.6 mm i.d.， 5 um)； 流动相：乙腈/水溶液(88：12， v/v)；流速：1mL/min： 荧光检测器：激发波长：384nm 发射波长：406nm； 柱温：40℃；进样量：10uL。 3.苯并[a]芘标准溶液的配制 储备溶液的配制： 标准储备液1：称取苯并[a]芘5mg，用乙腈定容至10mL，配制成 500mg/L 的标准储备液供 HPLC分析； 标准储备液2：称取苯并[a]芘 5mg，用正己烷定容至10mL， 配制成 500mg/L 的标准储备液供 SPE 试验； 将上述储备液密封后放置于4℃冰箱中避光保存，至少6个月内稳定。 工作溶液的配制： 取苯并[a]芘标准储备液1用乙乙腈释，供 HPLC分析； 取苯并[a]芘标准储备液2用正己烷稀释供 SPE 做添加回收试验，如果没有储备液2，也可以取储备液1，吹干后再用正己烷定容， 供 SPE 做添加回收试验。 标准曲线： 将 500mg/L 的苯并[a]芘标准储备液1用乙腈稀释，配制0.5、1.0、20、40ug/L的溶液，绘制标准曲线。 4 结果 4.11标准曲线与检出限 取0.5，1.0，20.0，40.0ug/L4个浓度的系列标准溶液进样分析，以样品浓度为Y轴、峰面积为X轴进行线性回归，所得标准曲线如图1。线性范围为0.5~40ug/L，相关系数为0.99999。 图1苯并[a]芘的标准曲线 检出限：以3倍信噪比计算本方法苯并[a]芘的检出限为0.06ug/kg。 4.2回收率和精密度 分别加入低、中、高3种质量浓度的苯并[a]芘标准溶液于食用油样品中，然后按照本实验方法进行测定，回收率为89.5~98.3%(见表1)。图2为添加苯并[a]芘的食用油样品的色谱图。从该图可以看出，没有杂质干扰，且该方法具有较好的日内及日间精密度(见表1)，其标准偏差分别小于5.55%和4.71%。 表1：大豆油的回收率和日内、日间精密度 分析物 样品空白 添加水平 回收率(%) RSD% (ug/kg) (ug/kg) 日内(n=5) 日间(n=3) 苯并[a]芘 2.5 92.8 5.55 4.04 2.47 5.0 98.3 3.48 3.24 10.0 89.5 2.79 4.71 表2：香油的回收率和日内、日间精密度 表2：香油的回收率和日内、日间精密度 样品空白 分析物 添加水平(ug/kg) 回收率(%) (ug/kg) 2.0 101.0 苯并[a]芘 未检出 5.0 94.7 10.0 94.9 表3：菜籽油的空白及回收率 分析物 空白(ug/kg) 添加水平(ug/kg) 回收率(%) 苯并[a]芘 3.49 2.0 107.6 5.0 109.3 10.0 108.1 表4：茶邮的空白及回收率 分析物 空白(ug/kg) 添加水平(ug/kg) 回收率(%) 苯并[a]芘 3.28 2.0 96.7 5.0 98.6 10.0 100.3 表5：橄榄油的空白及回收率 分析物 空白(ug/kg) 添加水平(ug/kg) 回收率(%) 苯并[a]芘 0.11 2.0 91.6 5.0 94.7 10.0 90.5 图2 5ug/kg植物油加标样品色普图 5. 测试结果的表示 苯并吡含量按下式计算： 式中： w：样品中苯并吡含量，单位为微克每千克(ug/kg)； C： 从标准工作曲线得到的待测液中苯并吡的浓度，单位为ng/mL； V： 待测液定容体积，单位为毫升(mL)； m. 样品质量，单位为克(g). 注意事项： 1.为了避免油脂中基质对色谱柱的污染，延长色谱柱寿命，建议在每天苯并吡实验结束后，用异丙醇1ml/min冲洗色谱柱1小时。 2. 过SPE的样品必须是正己烷体系，因此做添加回收实验时，苯并吡标准品必须用正己烷稀释，参考“3苯并[a]芘标准溶液的配制”。 维泰克科技·香港(北京(武汉(郑州(