采用TSKgel G3000SW色谱柱测定人促红素中二聚体及高分子量物质

本应用中作者采用了TSKgel G3000SW尺寸排阻色谱柱参照《英国药典》和《欧洲药典》的方法，建立测定人促红素中二聚体和高分子量物质含量的方法。分析结果显示：单体峰的保留时间约为30~35 min。分离度溶液中二聚体与单体峰之间的分离度均大于1.5。以信噪比S/N ≥ 3为检测限，单体峰浓度检测限为：0.002 mg/mL。该方法专属性强，灵敏度高，可为人促红素原液及注射剂中二聚体和高分子量物质的质量控制提供参考。采用TSKgel G3000SW色谱柱测定人促红素中二聚体及高分子量物质 促红细胞生成素 (Erythropoietin; Epo) 【基本信息】 促红细胞生成素（EPO）又称红细胞刺激因子、促红素，是一种人体内源性糖蛋白激素，可刺激红细胞生成。缺氧可刺激促红细胞生成素产生，已有重组人促红细胞生成素用于临床，用于治疗肾功能不全合并的贫血、获得性免疫缺陷综合征/艾滋病本身或治疗引起的贫血、恶性 肿瘤伴发的贫血及风湿病贫血等多种贫血。这里采用TSKgel G3000SW色谱柱建立了测定人促 红素二聚体及高分子量物质含量的方法。 【分析条件】 色谱柱： TSKgel G3000SW（7.8 mm I.D.×60 cm） 流动相：磷酸盐缓冲液（磷酸二氢钾 0.2 g、无水磷酸氢二钠 1.2 g和氯化钠 23.5 g，加水溶解稀释 成 1 L，调 pH至 7.4） 流 速： 0.5 mL/min 进样体积：50 μL 柱 温： 30 ℃ 检测器： UV@214 nm 【溶液配制】 供试品溶液：取供试品，按照供试品的蛋白含量，用流动相稀释成含蛋白 0.4 mg/ml的溶液，混匀，作为供试品溶液。 分离度溶液：取EPO-SEC CRS欧洲标准品 1瓶（蛋白含量 100 μg），精密加入 250 μL流动相，用 流动相溶解并稀释制成 0.4 mg/mL溶液，作为分离度溶液。 对照品溶液：精密量取分离度溶液20 μL，加980 μL流动相稀释成0.008 mg/ml溶液，混匀，作为对 照品溶液。 【分析结果】 Time(min) 图 1 HPLC图 （A）空白溶液；（B）EPO分离度溶液 【结果与讨论】 采用TSKgel G3000SW色谱柱参照《英国药典》和《欧洲药典》的方法，建立测定人促红素中 二聚体和高分子量物质含量的方法，分析谱图见图1。结果显示：单体峰的保留时间约为30~35 min。分离度溶液中二聚体与单体峰之间的分离度均大于1.5。以信噪比S/N ≥ 3为检测限，单体峰浓度检 测限为：0.002 mg/mL。该方法专属性强，灵敏度高，可为人促红素原液及注射剂中二聚体和高分 子量物质的质量控制提供参考。 【参考资料】 1.唐娜，贾丽华，宋莉，陈统华，苏超男，王嫦鹤，人促红素中二聚体及高分子量物质的质量研究中国医药科 学. 2023,13(11)：75-812