高效液相色谱法测定蜂蜜中羟甲基糠醛的含量

本文采用Essentia LC-16高效液相色谱仪建立了蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法。方法前处理简单，目标峰与杂质峰分离良好，干扰小。重复性测试和回收率试验结果表明，该方法回收率高，重现性好，可用于蜂蜜中的羟甲基糠醛含量的测定，为相关生产企业和检测机构提供参考。SSL-CA23-167Excellence in Science Excellence in ScienceLC-380 高效液相色谱法测定蜂蜜中羟甲基糠醛的 含量 LC-380 摘要：本文利用岛津Essentia LC-16高效液相色谱仪，建立了蜂蜜中羟甲基糠醛含量的检测方法。在0.10~10.0mg/L浓度范围内，线性关系良好，相关系数R为0.9999。对0.10 mg/L的标准溶液进行6次重复性测试，峰 面积和保留时间 的 相对标准偏差分别为 1.31%和0.31%。在0.20 mg/L、2.0 mg/L、6.0 mg/L三个浓度的 加标回收试验中，回收率在98.0%~100.2%之 间 。该方法适用于蜂蜜中羟 甲 基糠醛含量的测定。 关键词：高效液相色谱 蜂蜜 羟甲基糠醛 技术特点： ※采用样品结晶时低温加热溶解的前处理方式，减少高温下易生成羟甲基糠醛的干扰。 心 ShimNexCS C18 色谱柱分离良好，可减少样品杂峰对目 标 物干扰。 蜂蜜的主要成分是葡萄糖和果糖，在高温条件下 两者均易脱水生成5-羟甲基 -2-糠醛(即羟甲基糠醛)。羟甲基糠醛的存在虽然不影 响 食品安全，但它是 一 种 具有难闻气味的黑色物质，会导致蜂蜜味道的改变和 颜色的加深，从而影响蜂蜜的感官质量和内在品质。中华 全 国供销合作行业标准 GH/T 18796-2012《蜂蜜》将羟甲基糠醛作为考量蜂蜜新鲜度一项重要指标，规 定其含量要求小于40 mg/kg。 蜂蜜在投放市场以前，必须经过浓缩、杀菌、过 滤等加工处理，!以防止产品结晶和发酵，同时去除蜂 蜜中的有害杂质和微生物。蜂蜜的加工处理不当，不 仅会破坏其中的维 生 素 和生物活性成分，同时会造成 淀粉酶活性的降低和羟甲基糠醛含量的增加。因此，蜂蜜在加工过程中应严格控制加热温度和加热时 间 。通过监控加工过程中的羟甲基糠醛含量变化，，可以指 导 加工工艺优化，提升产品的质量。 本文参照 GB/T 18932.18-2003《蜂蜜 中 羟甲基 糠醛含量的测定方法液相色谱-紫外检测法》，利用 岛津高效液相色谱仪 Essentia LC-16， 建立了蜂蜜中 羟甲基糠醛的测定方法。 1.1仪器 本文使用岛津 Essentia LC -16 高效液相色谱仪，配置信息如下： 系统控制器： CBM-20Alite 脱气机：：DGU-20A3R 输 液 泵 LC-16×2 柱温箱：CTO-16L 自动进样器 SIL-16 检 测器：：SPD-16 色谱工作站： Labsolutions Ver. 5.98 1.2分析条件 液相色谱条件如下： 色谱柱：：ShimNexCS C18 (250 mmx4.6mml.D.， 5 um， 岛津(上海)实验器材有限公司， P/N：380-01230-01) 流动相 目 ：：A-水；B-甲醇 进样体积：10uL 柱 温 ： 30°℃ 流 速 束：：1.0mL/min 洗脱方式： 等度洗脱， A：B=90：10(v/v) 检 测 波长：285nm 1.3样品前处理 按照 GB/T 18932.18-2003《蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测 定 方法液相色谱 -紫外检测法》处理方式，流程见图1。 图1样品前处理流程 注：样品结晶时，可将 样 品盖好置于20-25℃水浴中低温加热溶解 ，搅 拌 均匀后再取样称量。 1.4标准溶液 配 置 羟甲基糠醛标准储备液：称取20mg (精确至0.01mg))的羟甲基糠醛标准物质(纯度99.9%)于100 mL 容 量 瓶 中 ，用10mL甲醇溶解，用水稀释定容至刻度，混匀，得到0.20 mg/mL的标准储备液。4℃冰箱低温保存。 羟甲基糠醛标准工作溶液：取8个 干 净的100 mL容量瓶，用移液器依次加入0.05 mL、0.10 mL、0.50mL、1.0mL、2.0mL 、3.0mL 、5.0mL羟甲基糠醛标准储备液，用10%甲醇水溶液稀释定容至刻度，摇匀，得浓度为 0.10 mg/L、0.20 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、4.0 mg/L、6.0 mg/L、10.0mg/L的标准工作溶液。 2.1标准品色谱图 图2羟甲基糠醛 标 准 溶液色谱图 (0.20mg/L) 表1羟甲基糠醛 信 息表 化合物名称 英文名称 CAS 号 保留时间 (min) 羟甲基糠醛 5-Hydroxymethyl-2-furfural 67-47-0 12.618 2.2线性 取1.4配制得到的羟甲基糠醛标准工作溶液分别进样，以浓度为横坐标，峰 面积为纵坐标绘制标准曲线，在 0.10~10.0 mg/L 范围内，线性相关系数为0.9999。如图3所示。测 试0.10 mg/L标准工作溶液，得检出限 (S，N=3) 为 0.0027 mg/L，定量限(S/N=10) 为 0.0090 mg/L。 图3 羟 甲基糠 醛 标准曲线 2.3重复性实验 对 0.10 mg/L 的标准工作溶液，进行连续6次平行测定，考察 重 复性，其峰面积的 RSD 为 1.31%、保留时 间的 RSD 为 0.31%。 2.4样品测定和加标回收率考察 随机抽取市售蜂蜜和农家自采蜂蜜各1瓶，按照1.3样品前处理制备得到样品溶液，测定其羟甲基糠醛的含量，同 时对市售蜂蜜样品分别进行 0.20 mg/L、2.0 mg/L和6.0mg/L浓度各3份平行加标，色谱图如图4所示，测 定结果见表2。结果显示：市售蜂蜜和农家自采蜂蜜 样 品羟甲基糠醛含量分别为6.09 mg/kg、28.42 mg/kg，市售蜂蜜加标平均回收率在98.0%~100.2%之间，相对标准偏差 RSD% 在 0.66%~1.24%之间。 图4.蜂蜜样品 、蜂蜜样品加标色谱图 (数据1：农家自采蜂蜜样品；数据2：市售蜂蜜样品；数据3：市售蜂蜜加标0.2 mg/L样品； 数据4：市 售蜂 蜜加标 2.0 mg/L样品 ；数据5：市售 蜂蜜加标6.0mg/L样品) 表2蜂蜜样品羟甲 基 糠醛含量测定及加标试验结果(n=3) 样品名称 样品重量 (g) 实测浓度 (mg/L) 试样含量 (mg/kg) 0.2 mg/L 加标量 2.0 mg/L 加标量 2.0 mg/L 加标量 回收率(%) RSD (%) 回收率(%) RSD (%) 回收率(%) RSD (%) 市售蜂蜜 10.31 0.628 6.09 99.6 1.24 100.2 0.53 98.0 0.66 农家自采蜂蜜 10.16 2.888 28.42 结论 本文采用 Essentia LC-16 高效液相色谱仪建立了蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法。方法前处理简单，目 标峰与杂质峰分离良好，干扰小。重 复 性 测 试和回收率试验结果表明，该方法回收率高，重 现性好，可用于蜂 蜜中的羟甲基糠醛含量的测定，为相关生产企 业 和检 测 机构提供参考。 岛津应用云