高效液相色谱法测定食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖

食物中糖类是人体所需重要能量物质，其含量测定尤为重要。本方案采用LC5090高效液相色谱法对食品中5种糖类进行测定。试样中的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖经提取后，利用高效液相色谱柱分离，用蒸发光散射检测器检测，外标法进行定量。部分数据结果如下，下载可查看详细报告：糖混标溶液典型谱图1.果糖 2.葡萄糖 3.蔗糖 4.乳糖 5.麦芽糖方法验证表文件号： FLYQ-AD-FA-01浙江福立分析仪器股份有限公司应用中心 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定 一、检测方法： 依据国家标准：食品安全国家标准食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定 (GB 5009.8--2016)。 二、方法提要 试样中的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖经提取后，利用高效液相色谱柱分离，用蒸发光 散射检测器检测，外标法进行定量。 三、试剂和材料 3.1乙腈 (CH，CN)：液相色谱纯。 3.2水：纯净水。 四、仪器和装置 4.1高效液相色谱仪：福立 LC5090 高效液相色谱仪，配备 LC5090 在线脱气机、LC5090二元 高压输液泵、LC5090 自动进样器、LC5090柱温箱、LC5090蒸发光散射检测器。 4.2一次性注射器。 4.3针头过滤器：0.45 um 有机滤膜。 4.4一般实验室常用仪器。 五、实验 5.1标准系列配置 5.1.1糖标准贮备液(20mg/mL)：分别称取上述经过96℃±2℃干燥 2h 的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖各0.2g ， 加水定容于10mL， 置于4℃密封可贮藏1个月 。 5.1.2糖标准使用液：分别吸取糖标准贮备液 0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.5mL于1mL容量瓶，加 水定容，分别相当于 2.0mg/mL、4.0mg/mL、6.0mg/mL、10.0mg/mL 浓度标准溶液。 邮编： 317500 分析 员 ：黄燕、陈青青审核：电 话 ：15657600108日期：2021.7.23 5.2分析结果 5.2.1糖混合标准溶液典型谱图及结果 (6.0mg/mL) 三 O 三 oNomN寸回 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 面积% Iminl LuV」 luV*minl 1 果糖 7.057 1143994 209865 36.8679 2 葡萄糖 9.151 429441 95596 16.7938 3 蔗糖 12.820 597080 184685 32.4445 4 乳糖 14.622 66275 23747 4.1718 5 麦芽糖 15.630 150304 55342 9.7221 总计： 2387094 569236 100.0000 系统评价表 村长：250mm 死时间： 峰序 组分名 保留时间 半高峰宽 容量 理论 分离度 拖尾 min Imin 因子 塔板 因子 1 果糖 7.057 0.17097 0.0000 9437 0.000 1.143 2 葡萄糖 9.151 0.20973 0.2967 10546 6.490 1.024 3 蔗糖 12.820 0.29384 0.8167 10545 8.598 1.004 4 乳糖 14.622 0.33535 1.0721 10532 3.380 0.908 5 麦芽糖 15.630 0.34542 1.2149 11343 1.747 1.021 邮编： 317500 地址：浙江温岭城东街道百丈南路95号 分析 员 ：黄燕、陈青青审核：电 话 ：15657600108日期：2021.7.23 5.2.2糖醇混合标准溶液六针重复性谱图及结果(6.0mg/mL) [min] 峰序 组分名 保留时间 平均值 |min| 保留时间 RSD % 面积 平均值 luV*min 面积 RSD [%」 峰高 平均值 LuV」 峰高 RSD % 1 果糖 7.056 0.011 208451 1.192 1160718 2.708 2 葡萄糖 9.139 0.125 94941 1.335 419182 3.049 3 蔗糖 12.796 0.169 185890 1.141 595302 0.794 4 乳糖 14.585 0.229 23223 2.017 66645 2.863 5 麦芽糖 15.606 0.243 54717 1.331 145425 3.047 5.2.3标准曲线 标准曲线的绘制：分别进样浓度 2.0mg/mL、4.0mg/mL、6.0mg/mL、10.0mg/mL 混合系列标准 工作液各 10uL， 进行 HPLC分析。然后以峰面积的对数为纵坐标，以目标物含量的对数为横 坐标，绘制标准曲线。 (1)浓度为 2.0mg/mL 糖混合标准溶液的典型谱图及结果 地址：浙江温岭城东街道百丈南路95号邮编： 317500分析 员 ：黄燕、陈青青审核：电 话 ：15657600108日期：2021.7.23 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 Iminl 峰高 LuV」 峰面积 luV*minl 面积% 1 果糖 6.966 186100 33085 36.1349 2 葡萄糖 9.035 69490 15691 17.1371 3 蔗糖 12.650 100295 30396 33.1980 4 乳糖 14.321 11434 3874 4.2305 5 麦芽糖 15.363 23384 8515 9.2995 总计： 390703 91561 100.0000 (2) 浓度为 4.0mg/mL 糖混合标准溶液的典型谱图及结果 i 9寸三 / 0 2345678 9101112 13 14 15 16 1718 19 20 21 22 2324 25 26 27：2829 30 min 分析结果表 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 minl 峰高 [uV] 峰面积 luV*minl 面积% 1 果糖 6.979 561595 102173 36.0254 2 葡萄糖 9.033 219087 50605 17.8428 3 蔗糖 12.634 287355 89867 31.6865 4 乳糖 14.316 37932 12866 4.5365 5 麦芽糖 15.398 73480 28103 9.9089 总计： 1179449 283614 100.0000 (3) 浓度为 6.0mg/mL 糖混合标准溶液的典型谱图及结果 6 i寸寸 八 八 0 1234 5678910111213141516 171819 20 21 22 23 24 2526 27 28 29 30 [min1 地址：浙江温岭城东街道百丈南路95号邮编： 317500分析 员 ：黄燕、陈青青审核：电 话 ：15657600108日期：2021.7.23 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 面积% minl luV luV*minl 1 果糖 6.979 955701 184449 34.8295 2 葡萄糖 9.033 412277 96635 18.2477 3 蔗糖 12.628 528805 167958 31.7156 4 乳糖 14.315 73894 25627 4.8392 5 麦芽糖 15.371 151225 54906 10.3680 总计： 2121902 529576 100.0000 (4)浓度为 10.0mg/mL糖混合标准溶液的典型谱图及结果 [min] 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 面积% Iminl uV luV*minl 1 果糖 6.975 1995846 410442 33.5383 2 葡萄糖 9.039 897692 222701 18.1975 3 蔗糖 12.591 1160421 390235 31.8871 4 乳糖 14.363 175744 63222 5.1660 5 麦芽糖 15.364 350210 137200 11.2110 总计： 4579913 1223801 100.0000 邮编： 317500 地址：浙江温岭城东街道百丈南路95号 分析 员 ：黄燕、陈青青审核：电 话 ：15657600108日期：2021.7.23 (5)糖标准曲线方程及相关系数 组分[果糖]： 曲线方程 ： 1g(W i) = -4.59984 + 0.640951*1g(Ai)校正因子： f0=-4.59984， f 1=0.640951 相关系数：r ^2 =0.99959 组分[葡萄糖]：曲线方程： 1g(Wi) =-4.24988 + 0.60734*lg(Ai ) 校正因 子 ： f 0=-4.24988， f f1=0.60734 相关系数：r ^2=0.99986 lg(Wi) [lg(mg)] 邮编： 317500 地址：浙江温岭城东街道百丈南路95号 分析 员 ：黄燕、陈青青审核：电 话 ：15657600108日期：2021.7.23 组分[蔗糖]： 曲线方程： 1g(Wi ) =-4.52392 + 0.630932*1g(Ai ) 校正因子： f0=-4.52392， f1=0.630932 相关系数：r^2=0.99982 lg(Wi) [lg(mg)] 组 分 [乳糖]：曲线方程： 1g(Wi) = -3.75923 +0.574963*1g(Ai) 校正因子： f 0=-3.75923， f1=0.574963 相关系数：r^2=0.99996 邮编： 317500 地址：浙江温岭城东街道百丈南路95号 分析 员 ：黄燕、陈青青审核：电 话 ：15657600108日期：2021.7.23 组分[麦芽糖]： 曲线方程： 1g(Wi ) = -3.98532 + 0.581802*1g(Ai) 校正因子： f0=-3.98532， f1=0.581802 相关系数：r^2=0.99980 lg(Wi) [lg(mg )] 5.2.4检出限 邮编： 317500 审核： 日期：2021.7.23 平行测定 1/ mg/mL 2/ mg/mL 3/ mg/mL 4/ mg/mL 5/ mg/mL 6/ mg/mL 7/ mg/mL 检出限/g/100g 标准要求 检出限 /g/100g 果糖 0.4512 0.4561 0.4704 0.4653 0.4754 0.4781 0.4883 0.0405 0.2 葡萄糖 0.4612 0.4763 0.4783 0.4836 0.4869 0.4869 0.4907 0.0312 0.2 蔗糖 0.4784 0.4805 0.5015 0.5091 0.5059 0.5113 0.5025 0.0422 0.2 乳糖 0.5400 0.5566 0.5691 0.5534 0.5527 0.5593 0.5511 0.0277 0.2 麦芽糖 0.5248 0.5454 0.5592 0.5567 0.5519 0.5575 0.5540 0.0377 0.2 注：称样量为 10g， 定容体积为 100mL。 注：称样量为 10g， 定容体积为 100mL。 六、实验结果 方法验证结论：5种糖类的精密度、线性相关系数、检出限汇总如下： 方法验证汇总表 化合物 保留时间 RSD(%) 峰面积RSD(%) 标准曲线线性相关系数 检出限 (g/100g) 果糖 0.011 1.192 0.99959 0.0405 葡萄糖 0.125 1.335 0.99986 0.0312 蔗糖 0.169 1.141 0.99982 0.0422 乳糖 0.229 2.017 0.99996 0.0277 麦芽糖 0.243 1.331 0.99980 0.0377 由以上实验结果可知，采用福立LC5090测定食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖，方法稳定可靠，目标物线性范围良好，灵敏度较高，有很好的重现性。 邮编： 317500