LC-MS/MS测定食品中灭螨醌和羟基灭螨醌含量

本文采用岛津三重四极杆液质联用仪建立了食品中灭螨醌和羟基灭螨醌的定量分析方法。通过优化有机相种类和接口参数，0.5 ng/mL标准溶液中两种化合物信噪比分别为20和14。在0.5~500 ng/mL浓度范围内线性良好，线性相关系数均大于0.999，准确度分别为94.6%~107.1%和93.7%~107.6%。精密度实验中，1 ng/mL标准溶液重复分析6次，保留时间RSD小于0.08%，峰面积RSD小于3.00%。实际样品加标实验中，5、50、500 ng/g加标回收率为87.0%~101.7%。实验结果表明，该方法灵敏度高、重复性佳、回收率高。SSL-CA23-089Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-754 LC-MS/MS测定食品中灭螨醌和羟基灭螨醌 含量 LCMSMS-754 摘要：本文采用岛津三重四极杆液质联用仪建立了食品中灭螨醌和羟基灭螨醌的定量分析方法。通过优化有 机相种类和接口参数， 0.5 ng/mL 标准溶液中两种化合物信噪比分别为20和14，灵敏度高。在0.5~500 ng/mL浓度范围内线性良好，线性相关系数均大于0.999，准确度分别为94.6%~107.1%和93.7%~107.6%。精 密度实验中，1 ng/mL标准溶液重复分析6次，保留时间 RSD 小于0.08%，峰 面积 RSD 小 于3.00%。实际样 品加标实验中，5、50、500 ng/g 加标回收率为87.0%~101.7%。实验结果表明，该方法灵敏度高、重 复 性佳、回收率高。 关键词：灭螨醌羟基灭螨醌 食品 LC-MS/MS 技术特点： 心此方法参考检测 标 准 SN/T 4066-2014，校准曲线最低 点 浓度完全满足标准测定低限要求。 心 通 过优化流动相有机相种类和接口参数，灵敏度显著提高，且线性范围广。 式如图1所示。在常规 C18色谱柱中保留非常强，影 响两化合物的峰形和分离。此外，极性弱导致其在ESI 源上不易电离，灵敏度低。本文参考标准 SN/T4066-2014， 采用 Velox核壳柱快速分离灭螨醌和羟基灭螨醌，并采用 APCI 源电离，通过优化流动相和离 子 源参数，显著提高了分析的灵敏度。 图1 灭螨醌(左)和羟基灭螨醌(右)结构式 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津超高效液相色谱仪 LC-30AD 与三重四极杆质谱仪 LCMS-8050联用系统。 液相具体配置为： 系统控制器 号：：(CBM-20A 自动进样器：：SIL-30AC 脱气 机：DGU-20A5R 柱 温 箱：CTO-20A 输液 泵 ：LC -30AD×2色谱工作站：：LabSolutions Ver. 5.99 1.2分析条件 液相色谱条件 色 谱 柱：：Shim-pack Velox SP-C18 (50 mm x 2.1 mm l.D.，1.8um， P/N： 227-32001-02，岛津(上海)实验器材有限公司) 流 动 相： A相 -0.1%甲酸甲醇/水溶液(甲醇：水=1：1)，B相-0.1%甲酸甲 醇 流 速 ： 0.5 mL/min 柱 温品： 35℃ 进样体积 ： 10 uL 洗脱方式： 梯度洗脱，B相初始浓度为60%，时间程序见表1。 表 1 流动相梯度洗脱程序 Time(min) Module Command Value 1.00 Pumps Pump B Conc. 60 5.00 Pumps Pump B Conc. 90 5.10 Pumps Pump B Conc. 60 8.00 Controller Stop 质谱条件 离 二 子 源：A APCI(+) DL温 度：280°℃ 接 口电压：44.5kV 加热块温度： 280°℃ 雾 化气：舞 氮气4L/min 扫描模式：MRM 干 燥 气：舞 氮气5 L/min MRM 参 数：见表2 接口温 度 ：4450°℃ 表2 MRM 参数 No. 中文名 英文名 CAS.NO. 离子对 Q1 Pre (V) CE Q3 Pre (V) 1 灭螨醌 57960-19-7 343.3>189.15* -27 -24 -19 Acequinocyl 343.3>115.15 -23 -49 -19 2 羟基灭螨醌 Acequino-cyl-hydroxy 57960-31-3 343.3>189.15* -26 -20 -20 343.3>115.15 -28 -48 -19 注：*表 示 定 量 离 子 1.3标准品配制 标准储备液：准确称取标准品10 mg，用乙 腈 溶解并定容至100mL， 配制浓度为 100 ug/mL标准储备液。 标准溶液：取适量标准储备液，用0.5%甲酸乙腈逐级稀释，配 制浓度为：0.5、1、2.5、5、10、25、50、100、250、500 ng/mL 的标准溶液。灭螨醌和羟基灭螨醌见光易分解，稳定性较差，标准溶液建议现配 现用。 1.4样品前处理 结果与讨论 2.1方法优化 为了提高方法灵敏度，得到最佳的分析条件，以灭螨醌为例 ，采用不同流动相及接口参数，分析100 ng/mL标准溶液。实验结果表明，流动相为0.5%甲酸甲醇时， 100 ng/mL灭螨醌峰面积比流动相为 0.5%甲酸乙 腈 时提高了约22倍 。但当降低甲醇中甲酸浓度 至 0.1%时 ，灭螨醌 峰 面积变化非常小。表明 APCI 正模式下，流动相的种类对灵敏度影响很大，但酸浓度的影响较小。 接口参数中，随着接口温度、DL温度及加热块温度的升高，峰面积明显增大，其中加热块温度的影响最大；随着 雾 化气流量的增加和 干 燥气流量的降低，峰 面积增加；而接口电压对 峰面 积的影响较小。不同参数对应的 灭螨醌色谱图及峰面积如图2所示，变化趋势图如图3所示。为 了 兼顾仪器耐用性和分析的灵敏度，最终确定 分析条件如1.2所示。 流动相中有 机相优 化 (左 ：0.5%甲酸乙 腈 ；中 ：0.5%甲酸甲 醇 ；右：0.1%甲 酸 甲醇 ) DL 管温度 优 化 (左 ：150℃；中：250℃；右 ：300℃) 接口 温 度优化(左：300℃；中 ：400℃；右 ：500℃) 11 3 4 5 9.89e4 A=528347 5.0e4 0.0e0- 加热块温度优化(左：150℃；中：250℃；右：300℃) 雾化气流 量 优化(左： 2L /m in；中 ： 3L/m in；右 ： 4L /m in)4.05e 4 Q 343.30>189.15(+) 干燥气流量 优 化(左： 3L /m i n；中： 5L/m in；右 ： 10L /m i n) Q 343.30>189.15(+) 2.92e4 Q 343.30>189.15(+) 3.32e 4 Q 343.30>189.15(+) 接 口 电压 优 化 (左 ：3kV；中：4.5kV；右 ：5kV) 图2不同有机相种类及接口参数下灭螨醌 MRM 图 和 峰面积(浓度： 100 ng /mL)不 同 流动相和接口条 件 下峰面积 图 3 不同流动相和接口条件下峰面积变化图 2.2标准溶液色谱图 采用1.2中分析方法，分析0.5 ng/mL标准溶液，得到色谱图如图4所示，此时灭螨醌和羟基灭螨醌 S/N 分别为20和14。标准 SN/T 4066-2014中规定灭螨醌和羟基灭螨醌的测定 低 限为 0.005 mg/kg，按照1.4前处 理方法换算后上机浓度为 2.5ng/mL。所以本方法校准曲线最低浓 度 0.5 ng/mL 远低 于 标准中低限值。 图4灭螨醌和羟基灭螨 醌 MRM 图(浓度为 0.5 ng/mL) 2.3标准溶液色谱图 按1.2中的分析条件测定两个化合物混合标准溶液，浓度为0.5~500 ng/mL。以浓度为横坐标 ，峰面积为纵 坐标，采用外标法建立校准曲线，如图5所示。在0.5~500 ng/mL线性浓度范围内，线性相关性良好，线性相 关系数大于 0.999，灭螨醌标准溶液回读准确度为 94.6%~107.1%，羟基灭螨醌准确度为 93.7%~107.6%。 图5材校准曲线 2.4精密度实验 按照1.2分析条件，将浓度为1ng/mL 的 基质标准溶液重复分析6次。两化合物保留时间 RSD 分别为0.047%和0.074%，峰 面积 RSD分别为2.01%、2.86%，重复性结果良好。 2.5样品测定及加标实验结果 按照1.4中样品处理方法对黄瓜样品进行处理，上机分析。样品中检出羟基灭螨醌，浓度为3.0 ng/g。 对此 样品进行加标实验，加标量为5、50和500 ng/g， 重复实验3次，定量及加标结果如表3所示。此方法回收率 及重复性佳。 表3 黄瓜样品 中 喹啉铜定量及加标结果 NO. 化合物名 样品浓度 加标量(5ng/g) 加标量((50ng/g) 加标量 (500ng/g) (ng/g) 回收率(%) RSD (%) 回收率(%) RSD (%) 回收率(%) RSD (%) 1 灭螨醌 N.D. 87.0 3.61 87.2 1.88 99.1 1.51 羟基灭螨醌 3.0 95.1 2.72 89.4 2.57 101.7 2.16 备注： N.D.表示 未 检出 结论 本文采用岛津三重四极杆液质联用仪建立了食品中灭螨醌和羟基灭螨醌的定量分析方法。通过优化有机相种 类和接口参数， 0.5 ng/mL标准溶液中两种化合物信噪比分别为20和 14。在0.5~500 ng/mL 浓度范围内线性 良好，线性相关系数均大于0.999，准确度分别为 94.6%~107.1%和93.7%~107.6%。精密度实验中，1ng/mL 标准溶液重复分析6次，保留时间 RSD 小 于 0.08%，峰面积RSD 小于 3.00%。实际 样 品加标实验中，5、50、500 ng/g 加标回收率为 87.0%~101.7%。实验结果表明，该方法灵敏度高、重复 性佳、回收率高。 岛津应用云