高效液相色谱法分析牛奶中三氮脒残留

本文使用岛津高效液相色谱仪建立了一种牛奶中三氮脒的测定方法。校准曲线线性良好，R>0.999，使用改进的前处理方法，低、中、高三个浓度的加标样品，回收率在89%-100%之间，RSD在0.3%~1.2%之间。该方法稳定，可靠，可供相关行业参考。SSL-CA23-020Excellence in Science Excellence in ScienceLC-372 高效液相色谱法分析牛奶中三氮脒残留 LC-372 摘要：本文建 立 了一种分析牛奶 中 三氮脒残留量的高效液相色谱方法。牛奶经水稀 释 ，醋酸铅沉淀蛋白，二 氯 甲烷除脂，弱阳离子交换 (WCX) 固相萃取净化，反相色谱分离，LabSolutions 再解析软件积分，外标曲线法定 量。结果显示，在0.05-5 mg/L 浓度范围内，线性良好，相关系数R>0.999； 0.02、0.05、0.3 mg/kg 加标回收 率在89%~100%之间，相对标准偏差 RSD 在 0.3%~1.2%之间；方法检出限、定量限分别为 0.004 mg/kg、0.012mg/kg；方法稳定、易操作，可 供相关行业参考。 关键词：：三氮脒 牛奶 抗原虫药 技术特点： 心优化了前处理，回收率更高，三 三氮脒回收率在89%~100%之间。 心 ShimNex CS C18分离效果好，无杂峰干扰。 三氮脒 (Diminazene)，是一种抗血液原虫药，常 用于家畜抗虫治疗 。其 毒 性大，安全范围小，超量使用 容易造成动物源性食品残留，威胁人类健康。因此，《GB 31650-2019 食品安全国家标准食品中兽药最大残留限 量》规定，牛肌肉、肝、肾、奶中三氮脒最大残留限量 为0.5、12、6、0.15 mg/kg。 2022年9月，农业农村部发布了第594号公告， 其中《GB 31658.18-2022 食品安全国家标准 动 物性食品 中三氮脒残留量的测定高效液相色谱法》规定了牛、羊 的肌肉、肝脏、肾脏组织和牛奶、羊奶中 三 氮脒残留量 的检测液相色谱-紫外检测方法。 本文使用岛津高效液相色谱仪，参考 GB 31658.18-2022标准，建立了一种测定牛奶中三氮脒的方法。 本实验采用岛津 LC-2050C 高效液相色谱仪。 1.2分析条件 色谱柱 ShimNex CS C18 (4.6×250 mm， 5 um) P/N： 380-01230-01 流动相 A-0.02 mol/L 甲酸铵溶液 流 速： 1.0 mL/min (pH 4.0)；B-甲醇 进样体积 只 ： 20uL 柱 温 ： 30°℃ 洗脱方式：：梯度洗脱，见下表1l，，初始比例为 10%B 表1梯度洗脱时 间 程序 Time(min) Module Command Value 1.00 泵 B.Conc 10 5.00 泵 B.Conc 20 10.00 泵 B.Conc 90 12.00 泵 B.Conc 90 12.50 泵 B.Conc 10 17.00 控制器 Stop 1.3溶液配制 5%氨水溶液：取氨水5 mL， 加水95mL，混匀； 乙酸铵甲醇溶液：取乙酸6mL，加甲醇94mL，混匀，用氨水调节 pH 值 至 7.0±0.05； 0.02 mol /L 甲酸铵溶液 (pH4.0)：取甲酸铵1.26g， 加水900mL溶解，用甲酸调节 pH 值至4.0±0.05，加水稀释至1000 mL； 校准曲线：精密量取标准工作液适量，用乙酸铵甲醇(pH=7.0)溶液稀释，配 制 成浓度为 0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、5 mg/L 的系列 标 准溶液。 1.4样品前处理 参考 GB 31658.18-2022，对前处理进行改进，流程见图1。 图1样品 前 处理流程 图 ■结果与讨论 2.1色谱图 空白、标品(0.1mg/L)、加标样品(0.02 mg/kg)色谱图如下图2所示。空白样品无干扰，标品和加标样品在9.8min 检出三氮脒色谱峰，且无干扰。 图2 空 白、标 品 (0.1mg/L)、加标样 品 (0.02 mg/kg) 色谱图 2.2线性范围及灵敏度 将浓度为 0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、5 mg/L的系列标准溶液，按1.2中 的分析条件进行测定，以保留时间为横坐标，峰面积为纵坐标，建立校准曲线，结果如图2所示，相关系数 R>(0.999。根据信噪比，计算其检出限 (S/N=3)和定量限 (S/N=10)分别为 0.004 mg/kg 和 0.012 mg/kg。 图2三氮脒校准曲线 2.3加标 回 收率及重 复 性 按1.4条件，制 备0.02、0.05、0.3 mg/kg 加标样品，连续进样分析3次，根据外标曲线计算回收率及相对 标准偏差。如下表2。低、中、高三个浓度的加标样品，回收率在 89%-100% 之间， RSD 在 0.3%~1.2%之间。 表22不同浓度三氮脒添加回收率结果 化合物名称 0.02 mg/kg 0.05 mg/kg 0.3 mg/kg 回收率(%) RSD(%) 回收率(%) RSD(%) 回收率(%) RSD(%) 三氮脒 100 1.2 98 0.4 89 0.3 结论 本文使用岛津高效液相色谱仪建立 了 一种牛奶中三氮脒的测定方法。校准曲线线性良好，R>0.999，使用改 进的前处理方法，低、中 、高三个浓度的加标样品，回收率在 89%-100%之间， RSD 在0.3%~1.2%之间。该 方法 稳 定，可靠，可供相关行业参考。 岛津应用云