本文参考2020版《中国药典》厄贝沙坦中叠氮化物含量测定要求,使用岛津IC-16搭建了二维离子色谱系统并建立对应离子色谱分析方法。该方法在0.04 – 1.00 mg/L浓度范围内叠氮化物线性关系良好,相关系数r大于0.999。将低、中、高浓度对照品重复进样6次,保留时间RSD值在0.016% - 0.031%之间,峰面积RSD值在0.425% - 1.062%之间,仪器精密度良好。准确度在90.7% - 95.0%之间。实验结果表明,该方法能稳定、准确地测定厄贝沙坦中叠氮化物含量。
采用岛津公司IC-16离子色谱仪,参考2020版《中国药典》建立了二维离子色谱法测定厄贝沙坦中叠氮根含量的方法。该方法线性关系良好,相关系数r大于0.999,精密度、准确度均符合标准,可以为厄贝沙坦中叠氮根杂质含量测定提供参考。SSL-CA23-014Excellence in Science Excellence in ScienceLC-369 LC-369 摘要:本文参考2020版《中国药典》厄贝沙坦中叠氮化物含量测定要求,使用岛津 IC-16搭建了二维离子色 谱系统并建立对应离子色谱分析方法。该方法在0.04-1.00 mg/L 浓度范围内叠氮化物线性关系良好,相关系 数 r大 于 0.999。将低、中、高浓度对照品重复进样6次,保留时间RSD 值在 0.016%-0.031%之间,峰 面积 RSD 值在0.425%-1.062%之间,仪器精密度良好。准确 度 在90.7%-95.0%之 间 。实验结果表明,该方法能稳定、准确地测定厄贝沙坦中叠氮化物含量。 关键词::二维离 子 色谱 阀切换在线基体消除法 厄贝沙坦 旦 叠氮化物 技术特点: 心使用阀切换基体消除法,去除样品基质同 时 富集痕量 待 测杂质离子。 *采用岛津 SAG-1000 淋洗液发生器,轻松进行梯度洗脱。 厄贝沙坦 (irbesartan) ,用于治疗原发 性 高血压,合并高血压的2型糖尿病肾病的治疗。沙坦类降压药具 有降压效果明确、心肾作用好、不良反应少等特点,是 一种被广泛应用的 降 压药。2021年4月29日,欧洲药 品质量管理局 (European Medicine, EQA) 宣 布含四 唑环沙坦类原料药中可能含有叠氮化杂质,该毒性杂质 有引起细胞 DNA 突变的危险,厄贝沙坦也在其中。 叠氮化物是药品合成中常用的物质之一,与亚硝基 杂质相比,叠氮杂质具有更高的毒性。体外研究显示叠 实验部分 1.1仪器 岛津IC-16二维离子色谱系统。具体配置为: 系统控制器 CBM-20Alite 淋洗液发生器 SAG-1000输液泵 LC-16i×2自动进样器 SIL-16i 柱温 品 箱 CTO-20AC 检 测 器 CDD-10A v P 抑制器 AS-1000色谱工作站:LabSolutions Ver. 5.109 1.2分析条件 氮化物有抑制相关生物酶、阻断体内氧气及血红蛋白 的 形成,1以及黏膜刺激性、中枢神经损伤等 毒性 。因此,在药物生产和质量控制过程中应严格对 叠 氮化物杂质含 量进行检测 。2020版《中国药典》中,厄贝沙坦原料 药中叠氮化物含量采用离子色谱法进行检测,通过阀切 换基体消除法对供试品溶液进样后进行在线处理。 本实验使用岛津 IC-16搭建二维离子色谱分析系统,参照2020版《中国药典》,建立了二维离子色谱法测 定厄贝沙坦中叠氮化物的含量。 第一维预处 理 柱 : Shim-pack Scepter C18-120 (50 mm x2.1 mml.D., 3 um, 岛津 (上海))实验器材有限公司 , P/N:227-31073-01) 第一维富集柱: Shodex IC SI -90G (10 mmx4.6mm l.D., 9 um,岛津(上海)实验器材有限公司 , P/N: F6709620) 第一维流动相 :A-ACN A相流速::0.5 mL/min :B-H2O B相流 速:0.5 mL/min 第二维分离柱: 阴离子交换色谱柱,固定相为烷基季铵基 ((250 mm x4.0 mm l.D., 5.5 um) 第二维流动相 : KOH 溶液 流 速: 0.7 mL/min 脱方 式 梯度洗脱,,初始淋洗液浓度为9mM,时 间程 序 见表1。样体 积 : 100 uL 柱 温 : 15℃ 抑制器电流: 56mA 阀切换程序: 阀切换时间程序见表2。 表1 淋洗液梯度程序设置 Time (min) Concentration (mM) 0 9 26 9 26.1 40 32 40 32.1 9 45 9 表2阀切换时间程 序 设置 Time (min) Module Command Value 3 柱温箱 CTO.RVR 1 3 泵 SV(Pump B) A 40 泵 SV(Pump B) B 43 柱温箱 CTO.RVR 0 45 控制器 Stop 备注:一维泵 的 初始 状 态为 100%B;流路切换阀的初始状态为“0”号 位。 样品前处理 供试品溶液:取厄贝沙坦样品,精密称定,加90%甲醇溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含20 mg的溶液。 对照品溶液:取 叠 氮 化钠对照品,精密称定,加90%甲醇溶液溶解并定量稀释制 成 0.04、0.10、0.20、0.50、0.80、1.00 mg/L 的叠氮化钠对照品溶液,其中0.20 mg/L 叠氮化钠对照品溶液为药典中规定的对照品浓度。 系统适用性溶液:取溴化钾、叠氮化钠和硝酸钾各适量,加90%甲醇溶液溶解并稀释制成每1ml中各约含 0.2 ug 的混合溶液。 结果与讨论 3.1岛津IC-16二维离子色谱系统原理介绍 岛津IC -16二维离子色谱阀切换系统工作流程如图1所 示 。样品分析从样品取样开始,样品由自动进样器取样。带有低压梯度比例阀的输液泵 (LC-16))设置为输送水相,当厄贝沙坦样品随超纯水进入预处理柱 时 ,厄贝沙坦 被保留,在预处理柱上无保留的叠氮根及其他杂质离子随超纯水进入富集柱。六通阀位置切换,进行分离测定。采用岛津 SAG -1000 淋洗液发 生 器,对保留在富集柱 上 的叠氮根及其他杂质离子进行梯度洗脱分离,同时另一 侧将超纯水切换为乙腈对预处理柱进行清洗。通 过六通阀的切换,在去除样品基质的同时富集痕量待测离子,提高了样品的分析准确性。 上样过程 图 1 阀 切换系统流路图 3.2系统适用性及专属性 系统适用性溶液色谱图中,连续进样五 针 ,叠氮根与溴离子及硝酸根的分离度均大于1.5,符合系统适用性 溶液要求。叠 氮根出 峰 时间为 24.9 min, 与其他杂质互不干扰。 图2 系统适用性溶液色谱图(1,溴离子;2,硝 酸根;3,叠 氮根) 表3叠 氮根对照品系统适用性试验结果(n =5) 峰号 保留时间(min) 峰面积 分离度 (USP) 理论塔板数 化合物 平均 RSD% 平均 RSD% 3 叠氮根 24.942 0.015 5794 1.278 1.540 15617 3.3线性 将配制的0.04、0.10、0.20、0.50、0.80、1.00 mg/L校准曲线点溶液,按1.2中的分析条件进行测定,以 浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,外标法制作校准曲线,叠氮根校准曲线方程、相关系数见图3。所得校准曲 线线性关系良好,相关系数大于0.999,准确度在94.0%-104.7%之间 。 图3 叠氮根校准曲线 3.4精密度 将浓度分别为 0.04、0.20、1.00 mg/L 的低、中、高三种水平叠氮根对照品溶液进行精密度测试,分别连续 进样6次。结果显示,叠氮根保留时间 RSD 值在0.016%-0.031%之 间,峰面积 RSD 值在 0.425%-1.062%之间 ,精密度良好。 表4 重复性测 试 保留时间及峰面积RSD 值 化合物 浓度 mg/L 保留时间 RSD% 峰面积 RSD% 叠氮根 0.04 0.037 0.610 0.20 0.020 1.062 1.00 0.016 0.425 3.5加标回收率 对 20.0 mg/mL 厄贝沙坦供试品溶液进行分析,未检出叠氮根离子。按叠氮根离子限度的50%、100%、150%浓度分别进行回收率试验,回收率在90.7%到95.0%之间 。 图450%加标溶液色谱 图 表5 厄贝 沙 坦供试品 加 标回收率结果 化合物 加标比例 加标浓度(mg/L) 实测浓度(mg/L) 回收率% 叠氮根 50% 0.100 0.950 95.0 100% 0.200 0.189 94.5 150% 0.300 0.272 90.7 结论 采用岛津公 司 IC -16离子色谱仪,参考2020版《中国药典》建立了二维离子色谱法测定厄贝沙坦中叠氮根 含量的方法。该方法线性关系良好,相关系数 r大于0.999,精密度、准确度均符合标准,可以为厄贝沙坦中叠 氮根杂质含量测定提供参考。 岛津应用云 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心
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