双进样液相色谱仪测定化妆品中24种禁用着色剂含量

本文使用岛津双进样液相色谱仪建立快速测定溶剂绿7等24种禁用着色剂含量的方法，并考察了线性、重复性、加标回收率，可以满足国家药监局发布的检测方法《化妆品中CI 59040等24种原料的检测方法》的检测需求。双进样液相色谱仪可以实现一次进样同时分析两组样品，不改变法规方法、分析耗时降低一倍，可供相关行业参考。岛津SHIMADZUSSL-CA22-582Excellence in Science 岛津SHIMADZUExcellence in ScienceLC-364 双进样液相色谱仪测定化妆品中24种禁用着色剂含量 LC-364 摘要：本文使用岛津双进样液相色谱仪建立了快速测定化妆品中24种禁用着色剂含量的方法。24种着色剂组分1.0-10.0 mg/L浓度范围内，其相关系数大于0.997，各浓度点的回读准确度在 93.5%~108.9%之间，线性相关性良好。稳定性考察中，24种组分的保留时间相和峰面积的相对标准偏差分别在 0.016~0.107%和0.335~1.215% 之间，仪器精密度良好。双进样液相色谱仪可以实现一次进样同时分析两组样品，既不改变法规方法又可实现分析快速，满足中检院公布的《化妆品中CI59040等24种原料的检测方法》征求意见稿中液相方法的检测需求。 关键词：双进样液相色谱仪化妆品 禁用着色剂 技术特点： 心双进样液相色谱仪可实现一次进样同时分析两组样品，满足24种着色剂分析需要。 小不改变现有法规方法条件，分析时间降低一倍。 着色剂(也称色素)作为化妆品原料之一，在化妆品中广泛使用。着色剂按照性能和着色方式可分为染料和颜料两大类，染料又分为天然染料和合成染料，颜料则分为无机颜料和有机颜料。按照来源方式，可分为天然着色剂和合成着色剂两大类。其中天然染料和无机颜料一般属于天然着色剂，合成着色剂则包括合成染料及有机颜料。大多数的合成着色剂多来自煤焦油产物，往往会对人体造成不同程度的危害，例如， 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津双进样液相色谱仪，具体配置为： 输液泵：LC-40B XR、LC-40DXR (LPGE)脱气机：：DGU-405×2 自动进样器：SIL-40C XR 检 测测器：SPD-M40×2 色谱工作站：LabSolutions Ver. 5.97 柱 温 箱：：(CTO-40C 图1 双进样液相色谱仪 1.2系统介绍 该系统有两套独立的色谱流路，共用一个自动进样器；自动进样器有两个进样口，可以将同一瓶号样品(或不同瓶号样品)分别注入两条色谱流路中，然后同时触发两条色谱流路同时进行数据采集。流路图如下： 图2仪器流路图以及自动进样器双进口的硬件示意图 注：1.该系统具有两个独立液相流路，既可以同时使用，也可以单独使用。 2.该系统也可配置两个四元系统、两个二元系统或者四元系统+二元系统。 3.两个流路检测器可以配置紫外+PDA；也可配置 PDA+PDA 1.3分析条件 液相条件 色谱柱： Shim-pack GIST C18 (250 mm x 4.6 mm l.D.，5 um)，(P/N：227-30017-08，岛津(上海)实验器材有限公司) 流动力相：A-0.02mol/L乙酸铵溶液 B-乙腈 流 速：0.8mL/min 柱 温：35℃ 波 长：250 nm、500nm、620nm 进样体积：5uL 洗脱方式：梯度洗脱，两组的梯度程序分别如下图。分组： 第一组(G1)，测定11种着色剂的梯度条件 表1第一组梯度洗脱时间程序 Time (min) A(%) B(%) 0 98 2 5 98 2 7 90 10 11 80 20 32 50 50 34 10 90 35 98 2 45 98 2 图3双进样液相色谱的梯度设置界面(流路1) 第二组(G2)，测定13种着色剂的梯度条件 表2第二组梯度洗脱时间程序 Time(min) A(%) B(%) 0 80 20 7 60 40 18 55 45 28 0 100 38 0 100 39 80 20 45 80 20 图4 双进样液相色谱的梯度设置界面(流路2) 1.4混合标准溶液配置 参照中检院公布的《化妆品中C159040等24种原料的检测方法》征求意见稿。 标准工作溶液：取浓度为 1.0 g/L 的各染料标准储备溶液适量于10 mL容量瓶中，用纯水稀释，配制成浓度为1.0、2.0、4.0、6.0、8.0和10.0 ug/mL 的标准工作溶液。 1.5样品前处理方法 参照中检院公布的《化妆品中C159040等24种原料的检测方法》征求意见稿。 称取样品0.2g(精确到0.0001g) 于10 mL具塞比色管中，加0.02 mol/L 乙酸铵溶液适量，涡旋分散，超声提取 10 min， 必要时可用甲酸或氨水调节 pH值，使pH值范围在5.5~7.0之间，用0.02 mol/L 乙酸铵溶液定容至刻度。如为浑浊溶液，，可取适量离心(5000 rpm) 5 min， 取上清液经0.45 um 亲水微孔聚四氟乙烯(PTFE) 滤膜过滤，滤液作为待测溶液，并于6小时内完成检测。 ■结果与讨论 2.1标准溶液色谱图 混合标准溶液 10 ug/mL 的色谱图如图5-6所示，着色剂编号同表3。 0.0 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 min 图5 10 ug/mL标准品溶液色谱图(流路1) (第一组，1.溶剂绿7、2.酸性绿1、3.食品红14、4.食品红1、5.酸性黄73、6.酸性橙6、7.酸性红87、8.食品红9、9.食品绿3、10.酸性蓝1、11.食品蓝5) 图6 10 ug/mL标准品溶液色谱图(流路2) (第二组：12.颜料红83、13.颜料红63、14.酸性紫9、15.颜料红64、16.食品橙3、17.溶剂红3、18.酸性橙11、19.颜料红4、20.碱性蓝26、21.碱性紫14、22.溶剂黄33、23.溶剂紫13、24.溶剂绿3) 2.2线性范围 将不同浓度的标准品溶液，按1.3中的分析条件进行测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，采用外标法建立校准曲线，部分化合物结果如图3所示。在1.0~10.0 mg/L浓度范围内，具有较好的线性关系，线性相关系数≥0.997，具体结果见表3。 图7 部分化合物的校准曲线 2.3精密度实验 不同浓度的标准品溶液连续进样6次，用于考察仪器的精密度，保留时间和峰面积的重复性结果如表3所示。结果显示，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在 0.016~0.107%和0.335~1.215%之间，仪器精密度良好。 2.4加标回收率测试 取化妆品样品(本底样品经测试未检出24种着色剂)加入一定浓度的着色剂标液(加标浓度如表3所示)，按照1.5中样品制备方法，每个浓度平行制备3份样品。，加标回收率测试结果显示：24种着色剂的样品加标回收率在 85.2%~109.2%之间，满足标准测试要求，结果如表3。 表3 校准曲线参数、保留时间和峰面积重复性及回收率测试结果 NO. 索引号 RSD% RSD% 加标浓度 加标浓度 化合物 相关 准确度 检出限 (2ug/mL) (6ug/mL) (50ug/g) (200ug/g) 名称 系数r (%) (ug/g) R.T. Area R.TArea 检测值 回收率区 检测值直 回收率 1 CI 59040 溶剂绿7 0.9995 98.6~105.2 2.1 0.0860.457 0.0790.542 43.2 86.4 176.2 88.1 2 CI 10020 酸性绿1 0.9998 97.5~104.8 1.4 0.034(0.447 0.06440.833 46.4 92.8 187 93.5 3 CI 45430 食品红14 0.9992 93.5~104.7 1.2 0.0360.412 0.0580.335 42.8 85.6 174.2 87.1 4 CI 14700 食品红1 0.9997 96.5~105.7 3.2 0.0280.466 0.0790.527 47.6 95.2 194.2 97.1 5 CI 45350 酸性黄73 0.9996 98.2~102.5 2.3 0.0270.452 0.0640.613 44.3 88.6 179 89.5 6 CI 14270 酸性橙6 0.9991 96.5~105.3 1.1 0.054(0.441 0.0380.484 48.9 97.8 191.2 95.6 7 CI 45380 酸性红87 0.9989 98.7~103.1 2.4 0.0220.459 0.0560.461 46.5 93 192.6 96.3 8 CI16185 食品红9 0.9992 96.5~104.8 0.7 0.0160.508 0.0490.592 51.2 102.4 197.4 98.7 9 CI 42053 食品绿3 0.9993 95.2~103.6 1.1 0.0260.454 0.0810.533 43.7 87.4 178.8 89.4 10 CI 42045 酸性蓝1 0.9997 97.4~105.3 2.3 0.076)0.453 0.06220.688 53.2 106.4 206.6 103.3 11 CI 42051 食品蓝5 0.9994 96.4~104.2 1.2 0.0970.457 0.0580.625 44.3 88.6 183.4 91.7 12 CI 58000 颜料红83 0.9999 96.6~106.1 2.6 0.075)(0.537 0.06330.497 46.5 93 190.2 95.1 13 CI 15880 颜料红63 0.9998 97.6~104.9 2.1 0.0640.628 0.0510.814 48.3 96.6 196.4 98.2 14 CI 45190 酸性紫9 0.9999 98.4~108.3 3.5 0.0450.577 0.0680.766 54.6 109.2 210.6 105.3 15 CI 15800 颜料红64 0.9992 94.1~103.8 1.2 0.0790.679 0.0940.692 44.2 88.4 187.2 93.6 16 CI11920 食品橙3 0.9998 97.3~107.5 1.0 0.0610.759 0.0750.773 49.2 98.4 190.2 95.1 17 CI 12010 溶剂红3 0.9999 96.7~103.2 2.3 0.0730.494 0.0820.588 48.6 97.2 187.6 93.8 18 CI 45370 酸性橙11 0.9979 95.8~105.3 1.3 0.1070.641 0.0930.696 52.4 104.8 217.8 108.9 19 CI 12085 颜料红4 0.9999 97.5~106.3 0.8 0.0820.825 0.0660.831 53.2 106.4 198.8 99.4 20 CI 44045 碱性蓝26 0.9985 93.6~108.9 0.5 0.0940.766 0.0810.779 51 102 208.4 104.2 21 CI42510 碱性紫14 0.9998 94.3~107.6 1.5 0.0580.527 0.0700.628 45.1 90.2 178.4 89.2 22 CI47000 溶剂黄33 0.9990 95.7~102.8 0.9 0.0661.215 0.0411.036 42.6 85.2 178.8 89.4 23 CI 60725 溶剂紫13 0.9998 97.1~102.5 1.4 0.0730.744 0.0630.782 53.3 106.6 202.6 101.3 24 CI 61565 溶剂绿3 0.9996 94.6~105.1 0.7 0.0680.639 0.0550.694 45.8 91.6 191.6 95.8 结论 本文使用岛津双进样液相色谱仪建立快速测定溶剂绿7等24种禁用着色剂含量的方法，并考察了线性、重复性、加标回收率，可以满足国家药监局发布的检测方法《化妆品中 CI 59040等24种原料的检测方法》的检测需求。双进样液相色谱仪可以实现一次进样同时分析两组样品，不改变法规方法、分析耗时降低一倍，可供相关行业参考。 岛津应用云