【应用实例】皖仪科技离子色谱脉冲积分安培检测法测定硫酸新霉素

本次建立的离子色谱脉冲安培检测器方法检测硫酸新霉素专属性强、灵敏度高、重复性好，将方法用于实际样品的有关物质及含量测定，方便快捷，结果准确可靠，该方法具有良好的应用前景，可以作为补充中国药典硫酸新霉素标准的推荐方法，用于生物效价验证测试分析及方法优化。离子色谱脉冲积分安培检测法测定硫酸新霉素 龚婷婷，裴波*安徽皖仪科技股份有限公司 关键词：离子色谱；脉冲安培检测器；硫酸新霉素；氨基糖苷类抗生素 引言 硫酸新霉素是从新霉素链霉菌( streptomycesfradiae) 的代谢产物中分离得到的多组分氨基糖类抗生素；新霉素的耳、肾毒性较强，但当局部应用时，很少引起毒性或过敏性反应，因此主要用于治疗皮肤感染性疾病；新霉素口服极少吸收，在肠道内浓度很高，，与其他抗生素混合口服可用于对肠道微生物群系的控制，适合于手术前的肠道消毒等。 其原料药在《中国药典》(2020)(ChP2020)等国内外药典均有收录；含量测定均采用专属性差、繁琐耗时的抗生素微生物检定法，但有关物质检查项除EP9.0外， 其他药典中均未设定。 该方法虽然比较成熟经典，但冗长繁琐的实验操作对实验人员要求较高，影响因素较多，专属性较差，且仅反映药物整体的抗菌活性，不能反映多组分抗生素中各组分的准确含量。因此有必要建立更加方便快捷，准确度高，专属性更强的理化分析方法测定含量。 本实验使用离子色谱法配置脉冲安培检测器测试硫酸新霉素的含量，以及解决色谱峰分离和专属性差等问题。 仪器：皖仪科技硫酸新霉素专用系统； 色谱柱：氨基糖苷类专用柱； 柱温：：30℃： 流速：1.0ml/min； 碱泵流速： 0.5ml/min； 进样方式及进样量：：自动部分25uL进样； 检测器：脉冲积分安培检测器 金电极糖四电位； 1.2试剂及实验材料 三氟乙酸(99.5%，色谱级) 无水硫酸钠(优级纯)； 去离子水，18.25兆欧； 氢氧化钠(电子级)； 乙二胺四乙酸二钠(优级纯)； 硫酸新霉素标准品； 1.3标样制备 称取一定量标准品于 250mL 容量瓶中，加超纯水超声溶解并定容至刻度，使配制成约 100U/mL 的标准溶液，备用。 1.4样品制备 将样品摇匀，根据估价，称取适量的样品于容量瓶中，用超纯水稀释成含硫酸新霉素浓度约为 100U/mL， 摇匀，离心，过滤。 1.5测定方法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 25u1，注入离子色谱仪，测定，即得。 2测试结果 2.1方法适用性测试 按照1.1测试条件进行硫酸新霉素方法适用性测试，硫酸新霉素C与硫酸新霉素B分离度为5.42且无其他杂质峰干扰，满足分析需求，该方法可以用于定量检测，检测谱图如图1。 图1方法适用性测试谱图 2.2含量测定 按照“1.1”项下色谱条件对硫酸新霉素样品进行测试，测试结果谱图如图2 20 图2样品含量测试谱图 2.3重复性验证 为验证分析条件的稳定性，特对硫酸新霉素标准品进行重复性验证，取同一批号硫酸新霉素标准品6份照“1.4”项含量测定溶液方法配制，按照“1.1”项色谱条件进样分析，新霉素B含量的 RSD(n=6)为0.78%，新霉素C含量的RSD(n=6)为0. 87%，重复性谱图见图3。 重复性数据 表1.重复性数据 序号 硫酸新霉素C 硫酸新霉素B 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 8.192 629.664 10.925 2567.466 2 8.192 623.925 10.925 2539.366 3 8.200 639.804 10.942 2576.157 4 8.200 635.027 10.933 2569.882 5 8.192 626.539 10.925 2524.786 6 8.183 628.159 10.925 2553.215 平均 8.193 627.186 10.929 2555.145 RSD(%) 0.08 0.87 0.06 0.78 3结论 本次建立的离子色谱脉冲安培检测器方法检测硫酸新霉素专属性强、灵敏度高、重复性好，将方法用于实际样品的有关物质及含量测定，方便快捷，结果准确可靠，该方法具有良好的应用前景，可以作为补充中国药典硫酸新霉素标准的推荐方法，用于生物效价验证测试分析及方法优化。 图3连续测试6份标准品重叠谱图 根据谱图和数据显示，仪器定性定量重复性良好，分析结果稳定，测试条件完全可以应用于数据检测。重复性数据见表1. www.wayeal.com.cn