LC-MS/MS法测定婴幼儿奶粉中胆碱含量

本应用采用岛津三重四极杆液质联用仪，参照GB 5413.20-2022《食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定》第三法，建立了婴幼儿奶粉中胆碱含量测定的方法，本方法灵敏度较高、重现性较好，可为食品行业相关人员提供参考。SSL-CA22-557Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-734 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cnTel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn LC-MS/MS 法测定婴幼儿奶粉中胆碱含量 LCMSMS-734 摘要：本文参照 GB 5413.20-2022《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定》，建立了婴幼儿奶粉中胆碱含量测定的方法。在优化后的色谱及质谱条件下，采用正离子模式扫描，通过多反应监测模式对目标化合物进行测定。结果表明：胆碱在1~500 ng/mL的范围内线性良好，所得校准曲线相关系数在0.9994以上，各校准点准确度在95.90%~105.35%之间，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.08%和3.48%以内，加标回收率在96.1%~103.1%之间。 关键词： LC-MS/MS胆碱 婴幼儿奶粉 内标法 技术特点： 必满足 GB 5413.20-2022《婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定》的相关要求，具更宽线性范围。 胆碱 (choline) 是一种强有机碱，有很强的吸湿性，暴露于空气中能很快吸水。其广泛存在于动植物中，是卵磷脂和鞘磷脂的重要组成部分，具有促进脑部发育，提高记忆力，保证信息传递，调控细胞凋亡等多种作用。 GB 5413.20-2022《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定》将于2022年12月30日正式实施，其规定了婴幼儿食品和乳品中胆碱测定的方法，包括酶比色法、离子色谱法和液相色谱-串联质谱法。GB 10765-2021《食品安全国家标准婴儿配方食品》和 GB 10766-2021《食品安全国家标准较大婴儿配方食品》中均规定，胆碱作为新的必需营养成分，在食品中的添加量为 4.8~23.9 mg/100 kJ。 本文采用岛津三重四极杆液质联用仪，参照 GB5413.20-2022《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定》第三法，对婴幼儿奶粉中的胆碱进行测定，本方法灵敏度高、重现性好，可为食品行业相关人员提供参考。 实验部分 1.1仪器 岛津LCMS-8050三重四极杆液质联用系统。配置信息如下： 系统控制器：：SCL-40输液泵：LC-40B X3自动进样器：SIL-40C X3柱温箱：：CTO-40C质 谱：：LCMS-8050工作站：Labsolutions Ver. 5.99 1.2分析条件 1.2.1液相条件 色 谱普柱：：Shim-pack GIST Amide (100 mm×2.1 mm I.D.，3 um， 岛津((上海)实验器材有限公司， P/N：227-30818-04) 流动 相： A-10 mmol/L甲酸铵水溶液；B-乙腈流进柱 表1梯度洗脱时间程序 速末：0.3mL/min样量量： luL温品： 40°℃ 洗脱方式： 梯度洗脱，B相初始浓度为90%，洗脱程序见表1 Time(min) Module Command Value 1.00 Pumps B.Conc 90 3.00 Pumps B.Conc 60 4.00 Pumps B.Conc 60 5.00 Pumps B.Conc 90 8.00 Controller Stop 1.2.2质谱条件 分析仪器 LCMS-8050 接口温度： 300°C ：离子 源ESI (+) DL温 度： 200°℃ 雾化气流速： 3.0 L/min 加热模块温度： 400°℃ 干燥气流速： 10.0L/min 多反应监测(MRM) 扫描模式：加热气流速：10.0 L/min 参 MRM 数： 见表2 表2 MRM 参数 序号 化合物 CAS NO. 前体离子 产物离子 Q1 PreBias (V) CE(V) Q3 PreBias (V) 1 胆碱 62-49-7 104.0 60.1* -20 -23 -22 45.1 -18 -24 -16 2 氯化胆 285979-70-6 108.0 60.0* -20 -23 -20 碱-D4 49.0 -16 -24 -18 *表示定量离子对 1.3混合标准工作溶液的制备 参照 GB 5413.20-2022《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定》第三法，采用80%乙腈-水将烘至恒重的胆碱酒石酸氢盐和氯化胆碱-D4标准品先后溶解、稀释，最终得到浓度分别为 1.00 ng/mL、2.00ng/mL、5.00 ng/mL、10.0 ng/mL、20.0 ng/mL、100ng/mL、200 ng/mL 和 500 ng/mL的胆碱，浓度为50.0 ng/mL 的氯化胆碱-D4标准工作溶液。 ■样品前处理 样品前处理操作参照 GB 5413.20-2022《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定》第三法。 图1 婴幼儿奶粉样品提取流程图 结果与讨论 3.1 MRM 色谱图 图2 标准溶液 MRM 色谱图 3.2校准曲线、检出限及定量限 将“1.3混合标准工作溶液”按“1.2分析条件”进行测定，使用内标法定量。以待测物定量离子与内标物定量离子峰面积比为纵坐标，对应的浓度比值为横坐标，绘制校准曲线，如图3所示。所得校准曲线相关系数大于0.9994，准确度在 95.90%~105.35%之间， Labsolutions 软件依据信噪比自动计算检出限(S/N=3)及定量限(S/N=10)。检出限及定量限结果分别为 0.05 ng/mL 和 0.15 ng/mL。 Area Ratio 图3 校准曲线 3.3精密度结果 采用标准工作溶液连续测定6次，考察仪器的精密度。结果如表3所示，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.08%和3.48%以内，显示仪器精密度良好。 表3精密度结果(n=6) 目标物 理论浓度(ng/mL) 保留时间 RSD(%) 峰面积 RSD(%) 胆碱 1.00 0.08 3.48 3.4加标回收率 准确称取某品牌婴幼儿奶粉样品，按照“2.样品前处理”项下进行提取，然后上机测试。根据测得结果，样品中胆碱的含量为152.2 mg/100 g。 向样品中加入低、中和高三个浓度的胆碱的标准溶液，按照“2.样品前处理”方法处理后上机分析，加标回收率结果见表4。结果显示：不同加标浓度下，胆碱加标回收率在96.1%~103.1%之间。 表4加标回收率结果(n=3) 目标物 样本浓度 (mg/100g) 添加浓度((mg/100g) 实测浓度(mg/100g) 平均回收率 (%) RSD(%) 胆碱 152.2 100 255.4 103.1 6.72 152.2 200 344.5 96.1 9.46 152.2 400 562.3 102.5 2.02 3.5样品测定结果 取市售某品牌婴幼儿奶粉样品1g，每批次6样品，按照“2.样品前处理”方法处理及“1.2分析条件”进行测定，回算后的婴幼儿奶粉中胆碱含量结果见表5。 表5样品测定结果(mg/100g， n=6) 目标物 1 2 3 4 5 6 平均值 RSD((%) 胆碱 146.1 148.6 161.0 160.5 149.6 147.6 152.2 4.40 结论 本应用采用岛津三重四极杆液质联用仪，参照 GB 5413.20-2022《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定》第三法，建立了婴幼儿奶粉中胆碱含量测定的方法，本方法灵敏度较高、重现性较好，可为食品行业相关人员提供渗考。 岛津应用云