GCMS法测定甘磷酸胆碱原料药中3种遗传毒性杂质

本文利用岛津GCMS-QP2020 NX气质联用仪，建立了甘磷酸胆碱原料药中环氧氯丙烷、缩水甘油、3-氯-1,2-丙二醇3种遗传毒性杂质的检测方法。环氧氯丙烷在10~1000 ng/mL浓度范围，缩水甘油与3-氯-1,2-丙二醇在20~1000 ng/mL浓度范围，三种化合物线性关系良好，相关系数均在0.999以上。方法检出限分别为环氧氯丙烷0.61 ng/mL、缩水甘油4.78 ng/mL、3-氯-1,2-丙二醇3.32 ng/mL。取浓度为20 ng/mL标准溶液连续进样6针，三种化合物峰面积重复性均在2%以下。加标实验中，以200 ng/g与400 ng/g为加标浓度，三种化合物平均回收率在95.3 %~106.2 %之间。该方法简便快捷，灵敏度高，重复性好，能够有效地用于甘磷酸胆碱原料药中环氧氯丙烷等3种遗传毒性杂质的检测。SSL-CA22-531Excellence in Science Excellence in ScienceGCMS-490 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cnTel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn GCMS 法测定甘磷酸胆碱原料药中3种遗传毒性杂质 GCMS-490 摘要：本文利用岛津 GCMS-QP2020 NX气质联用仪，建立了甘磷酸胆碱原料药中环氧氯丙烷、缩水甘油、3-氯-1，2-丙二醇3种遗传毒性杂质的检测方法。3种化合物在相应浓度范围内线性关系良好，相关系数均在0.999以上。取浓度为20 ng/mL标准溶液连续进样6针，三种化合物峰面积重复性均在2%以下。加标实验中，以200 ng/g与 400 ng/g为加标浓度，三种化合物平均回收率在95.3%~106.2%之间。该方法简便快捷，灵敏度高，重复性好，能够有效地检测甘磷酸胆碱原料药中环氧氯丙烷等3种遗传毒性杂质。 关键词：：气相色谱质谱联用仪 甘磷酸胆碱 环氧氯丙烷缩水甘油 3-氯-1，2-丙二醇 技术特点： 必可以同时检测甘油磷酸胆碱原料药中3种遗传毒性杂质。 甘油磷酸胆碱是机体内磷脂代谢的产物之一，也是重要的神经传递介质乙酰胆碱的生物合成前体。适用于10日内脑缺血发作(中风或短暂性脑缺血发作)，轻度至中度阿尔茨海默痴呆，，以及多发性脑梗死性痴呆的患者，是治疗老年痴呆的处方药。 3-氯-1，2-丙二醇是合成甘油磷酸胆碱的起始物料，该物质可能对人体产生肝肾毒性、免疫毒性、遗传毒性、生殖毒性，并具有致癌性。环氧氯丙烷、缩水甘油分别为3-氯-1，2-丙二醇合成的起始物料和合 成副产物。这两种物质也具有潜在的致突变性、致畸性和致癌性。 本文用二氯甲烷作为前处理的提取剂，利用岛津GCMS-QP2020 NX气质联用仪，建立了甘油磷酸胆碱原料药中环氧氯丙烷、缩水甘油、3-氯-1，2-丙二醇3种遗传毒性杂质的检测方法。该方法简便快捷，灵敏度高，重复性好，能够有效地检测甘磷酸胆碱原料药中环氧氯丙烷等3种遗传毒性杂质的检测。 1.2分析条件 GC参数： 色 谱 柱： SH-Stabilwax-MS， 30 m×0.25 mm×0.25 um 柱温程序：：40℃ (2min)_15℃/min_220℃_30℃/min_240℃ (5 min) 进样口温度：220℃ 离子化方式： EI 流速控制方式： 恒线速度 离子源温度： 230°℃ 线速 度：36.5cm/s 接妾口温温度： 250℃进进 ( 样方 式： 不分流进样 检测器电压： 调谐电压 +0.3kV ) 样 量：：luL采 集 模 模 式 ： S IM ， 离 子 信 息 见 表 1 1.3样品前处理 图1样品前处理流程图 ■结果与讨论 2.13种遗传毒性杂质质量色谱图 图23种遗传毒性杂质标准溶液质量色谱图 (环氧氯丙烷为 10 ng/mL， 缩水甘油与3-氯-1，2-丙二醇为20ng/mL) 表1化合物信息 NO. 中文名称 英文名称 CAS号 保留时间 (min) 定量离子(m/z) 定性离子(m/Z) 1 环氧氯丙烷 epichlorohydrin 106-89-8 6.190 62 49 2 缩水甘油 glycidyl 57044-25-4 8.815 31 44 3 3-氯-1，2-丙二醇 3-chloro-1，2-propanediol 96-24-2 13.485 61 79 2.2标准曲线和检出限 分别配制10、20、50、100、200、500、1000 ng/mL的标准溶液，进样1uL，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做标准曲线，标准曲线如图3所示(其中环氧氯丙烷浓度范围为10~1000 ng/mL， 缩水甘油与3-氯-1，2-丙二醇浓度范围为20~1000 ng/mL)。根据各化合物标线最低浓度点数据，，以3倍信噪比计算仪器检出限，三种物质的标准曲线、检出限如表2所示。 环氧氯丙烷 缩水甘油 3-氯-1，2-丙二醇 图3 3种遗传毒性杂质标准曲线 表2 曲线信息、仪器检出限 NO. 化合物名称 相关系数(R) 检出限(ng/mL) 1 环氧氯丙烷 0.9999 0.61 2 缩水甘油 0.9999 4.78 3 3-氯-1，2-丙二醇 0.9997 3.32 2.3重复性实验 取浓度为 20 ng/mL标准溶液，连续进样6次，考察仪器的重复性，测定结果见表3。 表3重复性结果 NO. 化合物名称 峰面积1 峰面积2 峰面积3 峰面积4 峰面积5 峰面积6 RSD(%) 1 环氧氯丙烷 2717 2812 2821 2763 2742 2828 1.7 2 缩水甘油 9695 9727 9781 9716 9770 9814 0.5 3 3-氯-1，2-丙二醇 14707 14593 14318 14486 14303 14146 1.4 2.4加标回收率 取甘磷酸胆碱原料药按上述方法进行测定，原料药中未检出这3种遗传毒性杂质。以此样品进行两个浓度水平的加标实验，回收率结果如表4所示。 图4 原料药加标样品质量色谱图 表4羟丙基淀粉样品加标实验结果 加标(200ng/g) 加标(400ng/g) NO. 化合物名称 平均测试值 (ng/g) 平均回收率(%) 平均测试值 (ng/g) 平均回收率(%) 1 环氧氯丙烷 190.54 95.3 417.43 104.4 2 缩水甘油 210.46 105.2 413.83 103.5 3 3-氯-1，2-丙二醇 212.41 106.2 414.63 103.7 ■结论 本文利用岛津 GCMS-QP2020 NX气质联用仪，建立了甘磷酸胆碱原料药中环氧氯丙烷、缩水甘油、3-氯-1，2-丙二醇3种遗传毒性杂质的检测方法。环氧氯丙烷在 10~1000 ng/mL浓度范围，缩水甘油与3-氯-1，2-丙二醇在20~1000 ng/mL 浓度范围，三种化合物线性关系良好，相关系数均在0.999 以上。方法检出限分别为环氧氯丙烷 0.61 ng/mL、缩水甘油 4.78 ng/mL、3-氯-1，2-丙二醇 3.32 ng/mL。取浓度为 20 ng/mL标准溶液连续进样6针，三种化合物峰面积重复性均在2%以下。加标实验中，以200 ng/g 与 400 ng/g 为加标浓度，三种化合物平均回收率在 95.3%~106.2%之间。该方法简便快捷，灵敏度高，重复性好，能够有效地用于甘磷酸胆碱原料药中环氧氯丙烷等3种遗传毒性杂质的检测。 岛津应用云