动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测方案(液相色谱仪)

月旭科技(上海)股份有限公司 动物性食品中氟喹诺酮类药物残留的检测 农业部1025号公告-14-2008 1、适用范围 本标准规定了动物性食品中达氟沙星、恩诺沙星和环丙沙星药物残留检测的高效液相色谱检测方法。 本标准适用于猪与鸡的肌肉、肝脏和肾脏中达氟沙星、恩诺沙星和环丙沙星药物残留的检测。((本实验样品为鸡肉) 参考标准： 《农业部1025号公告-14-2008动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测 高效液相色谱法》 2、溶液的配置 1) 5.0mol/L 氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠固体于100mL容量瓶中，用水定容至刻度。 2) 0.1mol/L氢氧化钠溶液：量取2.0mL5.0mol/L 氢氧化钠溶液于 100mL容量瓶中，用水定容至刻度。 3)0.05mol/L 磷酸/三乙胺溶液：量取3.4mL 浓磷酸，用水稀释至1000mL， 再用三乙胺调pH至2.4。 4)磷酸盐缓冲溶液：称取6.8g磷酸二氢钾，用水稀释至500mL， 并用 5.0mol/L氢氧化钠溶液调 pH至7.0。 5)达氟沙星标准储备液：称取5mg达氟沙星标准品，用甲醇定容至10mL，配制成 500ug/mL 的标准储备液。 6)恩诺沙星标准储备液：：称取5mg恩诺沙星标准品，用甲醇定容至10mL， 配制成 500ug/mL 的标准储备液。 7)环丙沙星标准储备液：称取 5mg 环丙沙星标准品，用 0.1mol/L 氢氧化钠溶液定容至10mL， 配制成 500ug/mL 的标准储备液。 8) 达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星标准工作液：分别都吸取三种标准储备液各0.4mL， 用 0.1mol/L 氢氧化钠溶液分别都定容到10mL，配置成对应的 20ug/mL的标准工作液。 9)混合标准工作液：吸取 0.1mL 达氟沙星标准工作液、0.5mL恩诺沙星、环丙沙星标准工作液，混合，再用 0.1mol/L氢氧化钠溶液定容至10mL，配制成混合工作液。 3、提取步骤 准确称取鸡肉样品2.0g于离心管中，加入磷酸盐缓冲溶液 10.0mL，混匀，超声 10min， 8000r/min 离心10min，上清液转移至另一支离心管中，残渣再加入磷酸盐缓冲溶液10.0mL， 重复上述提取步骤，合并上清液，备用。 4、净化步骤 SPE 柱：月旭Welchrom@ BRP 小柱， 规格：200mg/6mL 活化：2mL甲醇，2mL磷酸盐缓冲溶液，弃去； 上样：5mL上清液，弃去； 淋洗：1mL水，抽干，弃去； 洗脱：5mL流动相，抽干，收集； 收集到的洗脱液过0.22um 微孔滤膜，供上机检测。 5、注意事项 1)加标水平：2g样品中加入500uL 混合工作液，因此达氟沙星加标水平为0.05mg/kg，最终机度数为 5pg/L；恩诺沙星、环丙沙星加标水平为 0.25mg/kg，最终机度数为 25ug/L。 6、色谱条件 6.1高效液相色谱条件 色谱普：月旭UltimateRXB-C18 4.6×250mm，5um 流动相： 0.05mol/L 磷酸溶液/三乙胺：乙腈=82：18，等度洗脱 流速：0.8mL/min 柱温：25℃ 进样量：20uL 检测器：荧光光测器，激发波长为280nm，发射波长450nm。 心 7、色谱图或者加标回收率结果 mV 图1.达氟沙星 5pg/L，恩诺沙星、环丙沙星 25ug/L图谱 峰名称 保留时间 峰面积 峰高 相对峰面积 拖尾因子 塔板数 min mV*min mV % (EP) (EP) 环丙沙星 9.250 579881 52995 18.702 1.110 17012 达氟沙星 10.665 1232227 101353 39.742 1.079 18179 恩诺沙星 12.341 1288453 94428 41.555 1.058 19315 图2.鸡肉样品空白图谱 mV 图3.鸡肉样品达氟沙星加标 0.05mg/kg，恩诺沙星、环丙沙星加标 0.25mg/kg 图谱 表1.加标回收率表 物质 加标水平 平均回收率 RSD 直(n=2) 达氟沙星 0.05mg/kg 94.21% 2.65% 恩诺沙星 0.25mg/kg 85.27% 1.81% 环丙沙星 0.25mg/kg 87.88% 3.43% 8、相关产品信息 货号 名称 规格 00522-20014 SPE 小柱 WelchromQ BRP，200mg/6mL， 30pk 00837-05006 50mL 螺口尖底离心管 离心管一次性离心管，平盖，锥形底，RCF12000xg，袋装，未灭菌，50mL， 50/包 00824-31001 Welch 固相萃取装置 12 位方缸 00821-32291 盖子+垫片 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖中心孔6mm 100pk 00821-40927 样品瓶 2mL 透明短螺纹广口样品瓶带书写处11.6*32mm一级水解玻璃 100pk 00201-31043 UltimateR XB-C18 4.6×250mm， 5um 00802-02201 针头式过滤器 进口 NY，13mm*0.22um，100pk 达氟沙星标准品 CAS：112398-18-0 恩诺沙星标准品 CAS：93106-60-6 环丙沙星标准品 CAS：85721-33-1 海松江启迪漕河泾(中山)科技园·紫荆园楼 1）5.0mol/L 氢氧化钠溶液：称取 20g 氢氧化钠固体于 100mL 容量瓶中，用水定 容至刻度。 2）0.1mol/L 氢氧化钠溶液：量取 2.0mL5.0mol/L 氢氧化钠溶液于 100mL 容量瓶 中，用水定容至刻度。 3）0.05mol/L 磷酸/三乙胺溶液：量取 3.4mL 浓磷酸，用水稀释至 1000mL，再用 三乙胺调 pH 至 2.4。 4）磷酸盐缓冲溶液：称取 6.8g 磷酸二氢钾，用水稀释至 500mL，并用 5.0mol/L 氢氧化钠溶液调 pH 至 7.0