猪肉中10种头孢类药物残留量检测方案(液质联用仪)

SSL-CA22-142Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-644 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn LC-MS/MS 检测猪肉中10种头孢类药物残留量 LCMSMS-644 摘要：本文参考中华人民共和国国家标准 GB 31658.4-2021《动物性食品中头孢类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》，建立了一种使用岛津三重四极杆液质联用仪检测猪肉中10种头孢类药物残留量的方法。样品经乙腈-水、磷酸盐缓冲液提取，固相萃取柱净化后，以LC-MS/MS外标法定量检测其中10种头孢类药物的残留量。实验结果表明：该方法灵敏度高，重复性好，校准曲线线性良好，适合用作检测猪肉中的头孢类物质残留量。 头孢类药物属于β-内酰胺类抗生素，是以冠头孢菌培养而得到的天然头孢菌素C为原料，经侧链改造而得。作为一种广谱抗菌药，头孢在临床和畜牧水产养殖中被广泛使用甚至滥用。猪肉属于日常生活中极为常见的肉食来源，若其中头孢类药物残留较多，则可能危害食用者身体安全。 2022年2月1日，中华人民共和国国家标准 GB31658.4-2021《动物性食品中头孢类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》开始实施，该标准规定了 猪肉等动物性食品中10种头孢类药物(头孢氨苄、头孢拉定、头孢唑林、头孢哌酮、头孢乙腈、头孢匹林、去乙酰基头孢匹林、头孢洛宁、头孢喹肟和头孢噻肟)残留量的检测方法。 本文参考该标准，利用岛津三重四极杆液质联用系统，建立了猪肉中卡拉胶的检测方法。该方法灵敏度高，重复性好，校准曲线线性良好，适合用作检测猪肉中的头孢类物质残留量。 1.1仪器 本实验采用岛津 Nexera LC-40B X3与三重四极杆贡谱仪LCMS-8045 联用系统。具体配置为： 系统控制器：CBM-40自动进样器： SIL-40C X3输液泵： LC-40B X3质谱仪：LCMS-8045柱温箱： CTO-40S色谱工作站： LabSolutions Ver. 5.99 SP2 1.2分析条件 液相条件 色谱柱： Shim-pack Velox SP-C18，100 mm×2.1mml.D.， 1.8 um P/N：227-32001-03，岛津(上海)实验器材有限公司 流动相：A相-0.1%甲酸水溶液；B相-甲醇 流速：0.3mL/min 柱温：30℃ 进样量：10uL 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为5%，洗脱程序见表1 表1 洗脱程序 Time(min) Module Command Value 1.0 Pumps Pump B Conc. 5 4.5 Pumps Pump B Conc. 50 5.5 Pumps Pump B Conc. 50 6.0 Pumps Pump B Conc. 95 7.5 Pumps Pump B Conc. 95 7.6 Pumps Pump B Conc. 5 10.0 Controller Stop 质谱条件 离子化模式：ESI* 干燥气：氮气10.0 L/min 接口温度：300C 雾化气：氮气3.0 L/min加热气：空气10.0 L/min加热模块温度：400℃ DL温度：250℃ 扫描模式：多反应监测(MRM) 表2 MRM 参数 序号 化合物名称 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias (V) CE Q3 Pre Bias (V) 1 348.10 158.10* -13.0 -11.0 -16.0 头孢氨苄 174.10 -25.0 -16.0 -18.0 2 头孢拉定 350.10 158.10* -26.0 -10.0 -17.0 176.20 -18.0 -14.0 -18.0 3 头孢乙腈 362.20 178.10* -14.0 -14.0 -28.0 258.00 -10.0 -14.0 -18.0 4 头孢唑林 455.20 156.10* -22.0 -18.0 -20.0 323.10 -13.0 -13.0 -22.0 5 头孢哌酮 646.10 143.20* -34.0 -35.0 -14.0 290.00 -24.0 -23.0 -20.0 6 头孢匹林 424.20 152.10* -21.0 -24.0 -16.0 292.10 -21.0 -16.0 -20.0 7 头孢洛宁 459.10 152.10* -17.0 -21.0 -10.0 337.10 -13.0 -11.0 -24.0 8 头孢喹肟 529.10 134.20* -20.0 -17.0 -27.0 396.10 -20.0 -14.0 -28.0 9 去乙酰基头孢匹林 382.20 112.10* -19.0 -26.0 -22.0 152.10 -19.0 -27.0 -30.0 10 头孢噻肟 456.20 167.10* -13.0 -20.0 -17.0 395.90 -29.0 -13.0 -27.0 *定量离子对 1.3样品前处理 样品前处理参照 GB31658.4-2021中“8.1提取”和“8.2净化”部分进行。 结果与讨论 2.1灵敏度和专属性 5 ng/mL 加标样品和空白样品的 MRM 色谱图如图1所示，空白样品无干扰，各目标组分在该浓度下(方法要求定量限)信噪比为13.9~422.3，以S/N=10 对应的浓度计算定量限，均可满足标准要求。 图115ng/mL加标样品和空白样品MRM 色谱图 2.2校准曲线 参照 GB31658.4-2021中“8.3基质匹配标准曲线的制备””，制备浓度分别为5、10、20、50、100、200ng/mL的基质加标溶液，外标法建立校准曲线如图2所示，线性方程、相关系数和准确度如表3所示。 图2 校准曲线 表3 校准曲线信息序 No. 目标物 线性范围(ng/mL) 线性方程 相关系数r 准确度(%) 1 头孢氨苄 5-200 Y=(51945.1)X+(76531.1) 0.9965 91.5-112.4% 2 头孢拉定 5-200 Y=(18854.6)X+(22726.3) 0.9980 94.0-109.0% 3 头孢乙腈 5-200 Y=(1128.8)X-(660.8) 0.9989 89.3-108.1% 4 头孢唑林 5-200 Y=(10519.9)X+(14296.1) 0.9976 92.9-110.2% 5 头孢哌酮 5-200 Y=(1601.4)X+(1793.7) 0.9986 93.1-107.8% 6 头孢匹林 5-200 Y=(12468.8)X+(13344.5) 0.9987 92.7-105.6% 7 头孢洛宁 5-200 Y=(25480.7)X+(14042.1) 0.9973 91.5-108.8% 8 头孢喹肟 5-200 Y=(27459.7)X+(43465.1) 0.9982 95.5-107.4% 9 去乙酰基头孢匹林 5-200 Y=(22808.3)X+(66593.9) 0.9981 93.7-106.8% 10 头孢噻肟 5-200 Y=(15246.3)X+(17212.1) 0.9981 93.2-107.3% 2.3残留考察 ULOQ 基质加标样品进样后，空白样品进样分析所得色谱图如图3所示，各目标组分保留时间处无明显色谱峰。 图3 残留考察 2.4重复性考察 对不同浓度的基质加标样品分别连续分析6次，计算保留时间和峰面积的RSD。结果见表4，保留时间RSD 均不高于0.13%，峰面积 RSD 均不高于7.43%。 表4 保留时间和面积 RSD No. 目标物 浓度 (ng/mL) 保留时间RSD(%) 峰面积 RSD (%) 5 0.06 3.26 1 头孢氨苄 20 0.05 1.39 100 0.09 2.08 5 0.07 2.41 2 头孢拉定 20 0.05 3.15 100 0.08 1.90 5 0.11 5.45 3 头孢乙腈 20 0.07 4.83 100 0.10 4.31 5 0.06 3.95 4 头孢唑林 20 0.03 3.00 100 0.09 2.45 5 0.06 7.43 5 头孢哌酮 20 0.05 5.13 100 0.07 3.20 5 0.10 2.98 6 头孢匹林 20 0.06 1.20 100 0.09 1.90 5 0.08 2.58 7 头孢洛宁 20 0.05 2.17 100 0.08 1.31 5 0.08 4.87 8 投保喹肟 20 0.05 2.86 100 0.11 1.35 5 0.13 4.38 9 去乙酰基头孢匹林 20 0.09 2.76 100 0.11 1.73 10 头孢噻肟 5 0.07 3.50 20 0.04 1.06 100 0.04 1.13 2.5加标回收率 空白样品中加入浓度分别为10 ng/mL 和100 ng/mL的混标，各浓度平行处理2份样品，进样分析后计算方法的回收率。结果如表5所示，不同浓度加标回收率分别在61.5%~77.9%和67.4%~81.4%之间，满足标准关于回收率在 60~130%之间的要求。 表4保留时间和面积 RSD 序号 目标物 加标浓度(ng/mL) 加标回收率(%) 1 头孢氨苄 10 61.8 100 70.4 2 头孢拉定 10 62.7 100 73.4 3 头孢乙腈 10 70.9 100 77.8 4 头孢唑林 10 63.8 100 74.2 5 头孢哌酮 10 70.6 100 77.9 6 头孢匹林 10 62.4 100 67.6 7 头孢洛宁 10 70.4 100 81.4 8 头孢喹肟 10 61.5 100 67.6 9 去乙酰基头孢匹林 10 66.6 100 67.4 10 头孢噻肟 10 73.2 100 80.1 结论 本文参考中华人民共和国国家标准 GB 31658.4-2021《动物性食品中头孢类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》，建立了一种使用岛津三重四极杆液质联用仪检测猪肉中10种头孢类药物残留量的方法。样品经乙腈-水、磷酸盐缓冲液提取，固相萃取柱净化后，以LC-MS/MS 外标法定量检测其中10种头孢类药物的残留量。实验结果表明：该方法灵敏度高，重复性好，校准曲线线性良好，适合用作检测猪肉中的岛津应用云头孢类物质残留量。 本文参考中华人民共和国国家标准GB 31658.4 -2021《动物性食品中头孢类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，建立了一种使用岛津三重四极杆液质联用仪检测猪肉中10种头孢类药物残留量的方法。样品经乙腈-水、磷酸盐缓冲液提取，固相萃取柱净化后，以LC-MS/MS外标法定量检测其中10种头孢类药物的残留量。实验结果表明：该方法灵敏度高，重复性好，校准曲线线性良好，适合用作检测猪肉中的头孢类物质残留量。