猪肉中卡拉胶检测方案(液质联用仪)

SSL-CA22-141Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-643 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel： 86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn LC-MS/MS检测猪肉中卡拉胶含量 LCMSMS-643 摘要：本文参考中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3876-2021《猪肉中卡拉胶的检测液相色谱-串联质谱法》，建立了一种使用岛津三重四极杆液质联用仪检测猪肉中卡拉胶含量的方法。样品经盐酸溶液处理后，其中的卡拉胶降解生成特征性寡糖，以LC-MS/MS 外标法定量检测特征性寡糖含量。实验结果表明：该方法灵敏度高，重复性好，校准曲线线性良好，适合用作检测猪肉中的卡拉胶。 关键词：猪肉卡拉胶 三重四极杆液质联用仪 卡拉胶 (Carrageenan) 是从麒麟菜、石花菜和鹿角菜等红藻类海草中提炼出来的一种亲水性胶体，其具有较强的保水性和增稠性等特点，少数不法分子将其注入猪肉等肉品中增重以便达到非法获利的目的。 2021年11月1日，中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3876-2021《猪肉中卡拉胶的检测液相色谱- 串联质谱法》开始实施，该标准规定了猪肉中卡拉胶检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。 本文参考该标准，利用岛津三重四极杆液质联用系统，建立了猪肉中卡拉胶的检测方法。该方法灵敏度高，重复性好，校准曲线线性良好，适合用作检测猪肉中的卡拉胶。 1.1仪器 本实验采用岛津 Nexera LC-40B X3与三重四极杆质谱仪 LCMS-8045联用系统。具体配置为： 系统控制器：CBM-40自动进样器：SIL-40C X3输液泵： LC-40B X3质谱仪： LCMS-8045柱温箱： CTO-40S色谱工作站： LabSolutions Ver. 5.99 SP2 1.2分析条件 液相条件 色谱柱： BEH Amide (100 mm×2.1 mm l.D.， 1.7 um) 流动相：A相-5mM乙酸铵水溶液；B相-乙腈 流速：0.4mL/min 柱温：30℃ 进样量：1uL 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为90%，洗脱程序见表1 表1 洗脱程序 Time(min) Module Command Value 1.5 Pumps Pump B Conc. 40 3.0 Pumps Pump B Conc. 40 3.1 Pumps Pump B Conc. 90 6.0 Controller Stop 质谱条件 离子化模式：ESI 雾化气：氮气3.0L/min 干燥气：氮气10.0 L/min 加热气：空气10.0 L/min 接口温度：300℃ 加热模块温度：400℃ DL 温度：250℃ 扫描模式：多反应监测(MRM) 表2 MRM参数 序号 化合物名称 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias (V) CE Q3 Pre Bias (V) 1 卡拉胶降解的 403.10 96.70* 28.0 42.0 16.0 特征性寡糖 241.00 29.0 32.0 11.0 *定量离子对 1.3样品前处理 (1)待测样品：参照 NY/T 3876-2021，称取5g样品于50mL离心管中，加入20mL水，于4℃下10000r/min 匀浆1 min。加入2mL浓盐酸，涡旋30s，置于80℃恒温振荡水浴锅振荡2h，取出后冷却至室温。依次加入190 g/L 乙酸锌溶液 1.5 mL、150 g/L 亚铁氰化钾溶液1.5mL， 涡旋1 min 沉淀蛋白质。于4℃下8000r/min离心5 min， 取上清液转移至50mL容量瓶中，乙腈定容，0.22 um 有机系滤膜过滤后待测。 (2)标准样品：参照 NY/T 3876-2021， 50 mL离心管中加入适量标准储备液，再加入23 mL水和2mL浓盐酸，涡旋30s， 置于80℃恒温振荡水浴锅振荡2h，取出后冷却至室温，转移至50 mL容量瓶中，乙腈定容，0.22 um 有机系滤膜过滤后待测。 结果与讨论 2.1灵敏度和专属性 0.05 pg/mL 卡拉胶标准样品降解后生成的特征性寡糖和空白样品的 MRM 色谱图如图1所示，空白样品无干扰，特征性寡糖在该浓度下信噪比为21.9，以S/N=10对应的浓度计算定量限，可得其仪器定量限为 0.023ug/mL。 图1特征性寡糖(蓝色)和空白样品(绿色) MRM 色谱图 图22校准曲线 2.2校准曲线 制备浓度分别为0.1、0.5、1、2、5、10、20 ug/mL的标准溶液，外标法建立校准曲线如图2所示。结果显示，在0.1~20 ug/mL浓度范围内，线性相关系数为0.997，准确度88.0%~109.8%。 2.3残留考察 ULOQ标准样品进样后，空白样品进样分析所得色谱图如图3所示，目标组分保留时间处无明显色谱峰。 图3 残留考察 2.4重复性考察 对不同加标浓度的样品分别连续分析6次，计算保留时间和峰面积的 RSD. 结果见表3，保留留间RSD均不高于0.11%，峰面积 RSD 均不高于5.41%. 表3 保留时间和面积 RSD 名称 浓度(ug/mL) 保留时间RSD(%) 峰面积 RSD ((%) 卡拉胶特征性寡糖 2 0.11 5.41 20 0.07 3.33 2.5加标回收率 浓度分别为 2 ug/mL 和 20 ug/mL的基质加标样品处理后进样分析，方法的回收率结果如表4所示，加标回收率分别在88.6%~91.8%之间。 表4加标回收率实验 序号 目标物 基质样品浓度 加标浓度 加标样品检测浓度 加标回收率 (ug/mL) (ug/mL) (ug/mL) (%) 1 卡拉胶特征性寡糖 N.D. 2 1.77 88.6 2 20 18.36 91.8 N.D. 表示未检出 结论 本文参考中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3876-2021《猪肉中卡拉胶的检测液相色谱-串联质谱法》，建立了一种使用岛津三重四极杆液质联用仪检测猪肉中卡拉胶含量的方法。样品经盐酸溶液处理后，其中的卡拉胶降解生成特征性寡糖，以 LC-MS/MS 外标法定量检测特征性寡糖含量。实验结果表明：该方法灵敏度高，重复性好，校准曲线线性良好，适合用作检测猪肉中中卡拉胶。 岛津应用云 本文参考中华人民共和国农业行业标准NY/T 3876-2021《猪肉中卡拉胶的检测液相色谱-串联质谱法》，建立了一种使用岛津三重四极杆液质联用仪检测猪肉中卡拉胶含量的方法。样品经盐酸溶液处理后，其中的卡拉胶降解生成特征性寡糖，以LC-MS/MS外标法定量检测特征性寡糖含量。实验结果表明：该方法灵敏度高，重复性好，校准曲线线性良好，适合用作检测猪肉中的卡拉胶。