食品中克菌丹、灭菌丹及其代谢产物检测方案(液质联用仪)

Application No.C214News 岛津SHIMADZU用户服务热线电话： 800-810-0439第一版发行行：2020年11月400-650-0439 LCMSTM-8060、NexeraTM X2 使用APCI-LCMS-8060分析食品中的克菌丹、灭菌丹及其代谢产物 No.C214 D. Toinon 技术特点 快速测定食品中的克菌丹、灭菌丹及其代谢产物 ◆即使在复杂的基质中也能获得较高的灵敏度、良好的重复性和出色的稳定性 |前言 克菌丹、灭菌丹及其代谢产物被广泛用作农业杀菌剂，但鉴于以上物质的毒性，需要对食品中其含量进行检测。灭菌丹是在葡萄、小麦、蕃茄等作物中最为广泛使用的农药之一。根据2007/5/EC 指令，克菌丹被收录到 91/414/EEC 指令附录1的活性物质中。上述组分以往主要通过 GC/MS进行分析，但由于其受热易分解，稳定性可能会导致下降”。 本文介绍了使用岛津LCMS-8060， 采用 APCI离子源进行快速、高灵敏度分析的方法。参照 EN 15662：2018标准，样品经前处理后采用本方法进行分析，定量限低于 (EC) No 396/2005 或FAO/WHO 联合会议中的规定值。另外，在抹茶等复杂基质中，也能获得良好的重复性和出色的稳定性。 分析方法 分析条件 克菌丹和邻苯二甲甲亚亚(PI)购买于和光纯药株式会社，灭菌丹购买于Riedel-de Haen 公司，四氢邻苯二甲酰亚胺(THPI)购买于东京化成工业株式会社。 本文介绍了食品中克菌丹、灭菌丹及其代谢产物四氢邻苯二甲酰亚胺(THPI) 和邻苯二甲酰亚安(PI)的检测方法。采用岛津三重四极杆液质联用仪 LCMS-8060，前端液相为 Nexera X2 超高效液相系统， APCI离子源，采用流动注射分析(FIA)对各组分进行 MRM 优化。通过对离子源参数优化，改善了离子化和去溶剂化效果，提高检测灵敏度。 在本方法中，使用0.1%醋酸水溶液处理样品。加酸的目的是使各组分更稳定以及改善峰形。HPLC 及 MS 的分析条件如表1所示。 ( 1) https ： //eur-lex.europa.eu/legal-c o ntent/EN/TX T /?uri=celex：32007L0005 ) ( 2) http：//www.eurl-pestic i des.e u /library/docs/srm / EurlSrm_Observation_Captan_ F olpet_ L C-V1.pdf ) ( 3) https ： //apps.who.int/iris/bitstream/ha n dle/10665/44064/9789241665230_ en g.p d f?sequence=1&isAllowed=y ) [HPLC条件] (Nexera UHPLC 系统) 色谱柱 ： Shim-pack ScepterTM C18 (30mm ×2.0mml.D.， 1.9um) 柱温箱 ： 40C 溶剂A ： 10mM醋酸铵水溶液 溶剂B ：甲醇 流速 ：0.2mL/min 进样量 ： 10 uL 分析时间 ：10 min [MS 条件] (LCMS-8060) 离子源 ： APCI 模式 ： MRM 雾化气流速 ：3.0L/min 干燥气流速 ： 3.0 L/min DL温度 ： 150C 加热模块温度 ：300°℃ 离子源温度 ：400℃ 标准溶液的制备 使用含0.1%醋酸的乙腈溶液溶解克菌丹、灭菌丹、THPI、PI标准品，制成浓度为1 mg/mL 的溶液。通过稀释获得浓度为1ug/mL 和 10 ng/mL 的中间溶液，进一步稀释获得浓度分别为 0.5，1， 2.5， 5， 10， 25， 50， 100， 500， 1000 ng/mL的标准溶液。使用0.1%醋酸水溶液将上述溶液稀释5倍，然后进样分析。 样本的前处理 对大米、苹果、橙子、茶4种样品进行了分析。参照 EN15662：2018对上述样品进行了前处理，首先使用 QuEChERSQ-Sep@EN*1对样品进行提取，然后采用dSPE PSA/C18*1对样品进行净化。图1为样品的前处理流程。 *1Restek 产品 图1样品前处理流程 |结果和讨论 残留和基质干扰 标准曲线 为了考察残留，在标准曲线最高浓度溶液样本后，进样溶剂空白，未发现残留。然后，进样空白基质提取液以检查基质的干扰。在本分析条件下，基质不干扰目标组分的测定。 各组分标准曲线如图2所示。相关系数均大于0.99，校准点准确度在90%~110%之间。各组分标准曲线(无基质)定量下限(LOQ) 均为 0.1 ng/mL。 面积 面积 图2标准曲线及 MRM 色谱图(0.1ng/mL) 表2不同食品基质中的定量限 定量限(ppb) 基质 克菌丹 四氢邻苯二甲酰亚胺 灭菌丹 邻苯二甲酰亚胺 溶剂 (ng/mL) 0.1 0.1 0.1 0.1 茶 10 20 20 30 米 4 10 10 10 橙 1 5 5 10 苹果 1 5 5 5 LOC H 00H 10 图3不同食品中四种组分在定量下限的 MRM 色谱图 定量限 每种样本提取后添加不同浓度的标准溶液，以确认样品中的定量限(LOQ)。结果如表2所示。因基质或化合物的不同，LOQ 在1~30 ppb之间。LOQ处MRM 色谱图如图3所示。 重复性 以定量限浓度基质溶液进行重复性评估。各样品前处理后进行分析(n=3)。在各种基质中，峰面积重复性(%RSD)分别为克菌丹7~11%、THPI2~11%、灭菌丹2~7%、PI1~8%。 结论 本文介绍了使用岛津LCMS-8060 测定食品中克菌丹、灭菌丹及其代谢产物的方法。该方法分析时间为10分钟。即使在有基质存在的情况下，该方法的灵敏度也可以满足标准定量限的要求。本方法稳定性良好，即使在抹茶等复杂基质中，也能够得到良好的重复性 (RSD小于11%)。 目前，克菌丹和灭菌丹主要通过 GC/MS 进行分析，但容易受热分解，生成 THPI和Pl。受热易分解主要取决于 GC/MS 系统的硬件结构(特别是衬管及柱头)，难以控制”。从本次的结果判断， LC/MS 法可以替代GC/MS 法，应用于食品中克菌丹、灭菌丹及其代谢产物的测定。 ( LCMS、Nexera 及 Shim-pack Scepter 是岛津制作所式会社在日本和其他国家的商标。 ) Q-sep 是 Restek Corporation 在美国和其他国家的商标或注册商标。 ( 岛津企业管理(中国)有限公司岛津(香港)有限公司 ) ( http：//www.shimadzu.com.cn ) ( *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； ) ( *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。如有变动，恕不另行通知。 ) 本文介绍了使用岛津LCMS-8060测定食品中克菌丹、灭菌丹及其代谢产物的方法。该方法分析时间为10分钟。即使在有基质存在的情况下，该方法的灵敏度也可以满足标准定量限的要求。本方法稳定性良好，即使在抹茶等复杂基质中，也能够得到良好的重复性（RSD小于11%）。      目前，克菌丹和灭菌丹主要通过GC/MS进行分析，但容易受热分解，生成THPI和PI。受热易分解主要取决于GC/MS系统的硬件结构（特别是衬管及柱头），难以控制。从本次的结果判断，LC/MS法可以替代GC/MS法，应用于食品中克菌丹、灭菌丹及其代谢产物的测定。