方便面中防腐剂检测方案(液相色谱仪)

FULI 食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定 一、检测方法： 依据国家标准：食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定 (GB 5009.28-2016)。 二、方法提要 样品经水提取，经蛋白沉淀剂沉淀蛋白，采用液相色谱分离、紫外检测器检测，外标法定量。 三、试剂和材料 3.1甲醇：色谱纯。 3.2亚铁氰化钾溶液(92g/L)：称取 10.6g亚铁氰化钾，加入适量水溶解，用水定容至100mL。 3.3乙酸锌溶液 (183 g/L)：称取22g乙酸锌溶于少量水中，加入3mL冰乙酸，用水定容至100mL. 3.4乙酸铵溶液(20 mmol/L)：称取1.54g乙酸铵，加入适量水溶解，用水定容至1000 mL，经0.22 um 水相微孔滤膜过滤后备用。 3.5水：纯净水。 四、仪器和装置 4.1高效液相色谱仪：福立 LC5090 高效液相色谱仪，配备 LC5090 在线脱气机、LC5090二元高压输液泵、LC5090 自动进样器、LC5090柱温箱、LC5090双波长-紫外检测器。 4.2色谱柱： Sapphiresil C18色谱柱， 4.60 mm*250mm， 粒径为 5.0 um。 4.3一次性注射器。 4.4针头过滤器：0.22 um 有机滤膜。 4.5超声清洗仪。 4.6离心机。 4.7一般实验室常用仪器。 五、实验 5.1样品制备 准确称取约2g(精确到0.0001g)试样于具塞离心管中，加水约25mL， 涡旋混匀，于50℃水浴超声 20 min， 冷却至室温后亚铁氰化钾溶液2mL 和乙酸锌2mL， 混匀，于8000 r/min 离心5min， 将水相转移至50 mL 容量瓶，于残渣中加水20mL， 涡旋混匀后超声 5min， 于8000 r/min 离心 5min， 将水相转移到同一50mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混匀。取适量上清液过0.22 um滤膜，待测。 5.2标准曲线的制备 5.2.1苯甲酸、山梨酸标准储备溶液：分别准确称取 0.0275g 苯甲酸、0.0241g山梨酸，用甲醇溶解并定容至 10 mL， 配制成苯甲酸、山梨酸浓度分别为 2750 mg/L、2410 mg/L的混合储备溶液； 5.2.2糖精钠(以糖精计)标准储备溶液：称取0.0226g糖精钠，用水溶解并分别定容至10 mL，配制成糖精钠浓度为2260 mg/L的储备溶液。 5.2.3苯甲酸、山梨酸和糖精钠((以糖精计)第一级标准溶液：分别准确吸取苯甲酸、山梨酸(5.2.1) 0.75 mL 内糖精钠(5.2.2) 0.9 mL标准储备溶液于10 mL 容量瓶中，用水定容，配制成苯甲酸、山梨酸、糖精钠浓度分别为 206.25 mg/L、177.00 mg/L、196.2 mg/L的标准溶液。5.2.4苯甲酸、山梨酸和精精钠(以糖精计)第二级标准溶液：准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠第一级标准溶液(5.2.3) 5mL于 10 mL容量瓶中，用水定容，酉配制成苯甲酸、山梨酸、糖精钠浓度分别为 103.12 mg/L、88.5mg/L、98.1 mg/L 的标准溶液。 5.2.5苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)第三级标准溶液：准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠第二级标准溶液(5.2.4)5mL于10mL量量瓶40中，用水定容，配制成苯甲酸、山梨酸、糖精钠浓度分别为51.56mg/L、44.25mg/L、49.05mg/L的标准溶液。 5.2.6苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)第四级标准溶液：准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠第三级标准溶液(5.2.5) 4 mL于10mL容量瓶中，用水定容，配制成苯甲酸、山梨酸、糖精钠浓度分别为 19 mg/L、18.6mg/L、17.64 mg/L的标准溶液。 5.2.7苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)第五级标准溶液：准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠第四级标准溶液(5.2.6) 5mL于 10 mL容量瓶中，用水定容，酒配制成苯甲酸、山梨酸、糖精钠浓度分别为9.5 mg/L、9.3 mg/L、8.82 mg/L 的标准溶液。 5.2.8苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)第六级标准溶液：准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠第五级标准溶液(5.2.7) 5mL于10 mL容量瓶中，用水定容，配制成苯甲酸、山梨酸、糖精钠浓度分别为4.75mg/L、4.65 mg/L、4.41 mg/L的标准溶液。 5.2.9苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)第七级标准溶液：准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠第六级标准溶液(5.2.8) 2mL 于10mL容量瓶中，用水定容，酉配制成苯甲酸、山梨酸、糖精钠浓度分别为 0.95mg/L、 0.93 mg/L、0.88 mg/L 的标准溶液。 5.3分析结果 5.3.1苯甲酸、山梨酸和糖精钠第三级标准溶液典型谱图及结果 1、苯甲酸2、山梨酸3、糖精钠 峰序 组分 保留时间「min1 峰面积「uAU*s] 峰高[uAU] 理论塔板 拖尾因子 1 苯甲酸 10.198 151143.9 1562345 22448 1.285 2 山梨酸 15.021 162945.7 2427907 23459 1.187 3 糖精钠 17.308 57844.9 996515.4 23287 1.233 5.3.2标准曲线 标准曲线的绘制：分别进样第一到第七级标准系列工作溶液各10uL， 进行 HPLC 分析。然后以峰面积为纵坐标，以目标物的含量为横坐标，绘制标准曲线。 5.3.3样品典型谱图及结果 5.3.3.1某方便面酸菜包样品典型谱图及结果 未检出 本实验测定的酸菜结果均符合国家标准GB2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中对苯甲酸、山梨酸和糖精钠的限量要求。 5.3.4样品加标回收率数据汇总 样品种类 组分名 样品中平均含量(g/kg) 加标浓度(mg/L) 称样量(g) 测量值(g/kg) 回收率(%) 回收率范围(%) 酸菜包 苯甲酸 0 50.58 0.4181 0.9922 82.02 82.02-88.65 0.4420 0.9701 84.77 0.4490 0.9986 88.65 山梨酸 0 43.38 0.4181 0.8027 77.36 77.36-82.96 0.4420 0.7784 79.31 0.4490 0.8015 82.96 糖精钠 0 49.72 0.4181 0.9314 78.32 78.32-89.13 0.4420 0.9600 85.34 0.4490 0.9870 89.13 六、实验结果 方法验证结论：苯甲酸、山梨酸和糖精钠的精密度、线性相关系数、检出限及回收率汇总如下： 方法评价 组分名 保留时间/min 检出限g/kg 定量限g/kg 峰面积RSD% 线性相关系数 加标回收率% 苯甲酸 10.198 0.00069 0.0028 0.38 0.999 82.02-88.65 山梨酸 15.021 0.00066 0.0026 0.11 0.999 77.36-82.96 糖精钠 17.308 0.00064 0.0026 0.49 0.999 78.32-89.13 由以上实验结果可知，采用福立 LC5090 测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠，方法稳定可靠，目标物线性范围良好，灵敏度较高，1有很好的重现性，能够对样品进行准确定性定量。 苯甲酸、山梨酸、糖精钠这类食品添加剂是国家允许使用在食品中的，但添加使用量有严格要求。在2014年正式实施的GB 2670-2014《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》中，苯甲酸、山梨酸这一类常用的防腐剂物质在腌渍蔬菜中，最大使用量1.0g/kg。而增味剂糖精钠同为食品添加剂，在腌渍的蔬菜中最大使用量仅为0.15g/kg。本方案参考GB 5009.28-2016《食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的测定》采用福立LC 5090高效液相色谱仪搭载紫外检测器对方便面中酸菜包进行了上述三种食品添加剂的测定。酸菜包标样某方便面中酸菜包样品