制剂片剂中他达拉非检测方案(核磁共振)

nanalysis APPLICATION NOTENovember 2020 应用 通过台式 qNMR 测定制剂片剂中的Tadalafil 通过台式 gNMR 测定制剂片剂中的Tadalafil 介绍 核磁共振(NMR))是一种极其强大的表征技术，常用于药物研究以鉴定新化合物、评估纯度以及表征和优化化学反应，无论是在线(使用流通池)、离线还是在线(用于核磁共振管反应或等分分析)。虽然不太常见，但它也已被确立为制药行业常规定量分析的有用技支术。1，2，3，4台式 NMR 已成为一种易于使用的技术，可将 NMR 光谱的使用扩展到初创企业和中小企业制药公司，并提供易于使用、紧凑且可自动化的替代方案，允许 qNMR 直接纳入质量控制实验室并供技术人员使用。 在这方面，我们描述了使用台式INMR 对活性药物成分进行结构确认；降解产物和/或杂质的评估，以评估该技术在测定和含量均匀性测试中的功效和性能。 NMR 与常用方法相比具有许多优势，例如滴定、红外(IR)光谱、拉曼光谱和色谱法。它具有化学特异性、非靶向性、非破坏性、无需校准的固有定性，并且需要非常简单的样品制备。它不需要准备稀释系列，不消耗大量溶剂，也不需要真正的标准物质5进行分析。 在本应用说明中，我们使用1H NMR 评估作为参考标准购买的他达拉非的纯度(图1a)，并使用两种市售的含有Tadalafil的成分进行分析测试。这些药物以商品名Cialis 和通用名 Apo-Tadalafil出售。这些药物用于治疗良性前列腺增生6、勃起功能障碍7和肺动脉高压8。 在此定量NMR 分析中，对苯二甲酸二甲酯(图1b)用作内部校准物。选择它是因为它的1H共振中至少有一个与目标化合物的共振不重叠，并且它的T1值比其他可能的 qNMR 内标短。此处提供的示例特定于制药，但 qNMR 方法是通用的，可以在纯度测定对流程至关重要的任何领域的常规分析中进行验证。 图1： a) Tadalafil的结构， b) 对苯二甲酸二甲酯(DMT)的结构。绿色和红色圆圈代表本研究中评估的质子。 实验程序：Tadalafil参比标准品纯度测定 将参考标准化合物 (Tadalafil， 11.78 mg) Lot#： LRAB8867 和经认证的内部校准物(对苯二甲酸二甲酯 (DMT)，2.73mg) Lot#： BCBT9974准确称量到小瓶中，并加入600 uL DMSO-d(d6.使用涡旋混合器混合溶液直至样品和内标完全溶解。将得到的澄清溶液转移到 5 mm NMR 管中，并在确定T1 值后获得 1H NMR 谱。8.08 ppm DMT 信号的 T1值为2.82 s， Tadalafil 5.92 ppm信号的T1值为0.53 s。所有化合物均购自：Sigma-Aldrich， 无需进一步纯化即可使用。 光谱是在32°C下使用 Nanalysis 60PRO 台式 NMR 光谱仪在60MHz 质子频率(1.418特斯拉)下获得的。使用以下采集参数进行实验：复数点数，8192；光谱宽度，24ppm；扫描次数，32；扫描延迟，20s；光谱中心，8.03 ppm；采集时间，5.57秒；90°脉冲持续时间，15.1 us。每个光谱都应用零填充处理，零填充点数等于65536，进行相位和基线校正，洛伦兹到高斯窗口乘法应用于FID(指数线加宽(lb)和高斯线加宽(gb)分别设置为-0.1和 0.3Hz)。9光谱采集一式五份进行。 结果与讨论： Tadalafil参考标准化合物纯度测定使用以下等式(1)计算分析物 Px 的纯度： 式中 Ax 为Tadalafil在 5.92ppm处的信号积分值；1ADMT是属于DMT的8.08ppm处信号的积分值； NDMT和Nx 分别对应于，内分和Tadalafil的自旋数； Mx 和 MDMTT分别是Tadalafil和 DMT的分子量； mx 是Tadalafil的加权质量；mDMT 和 PDMT 分别是 DMT10的加权质量和报告的纯度。 表1：使用用苯二甲酸二甲酯 (DMT)作为内部校准物测定Tadalafil(X)参考化合物的纯度。 Ax ADMT NDMT Nx Mx(g.mol) MDMT (g.mol) mx(mg) MDMT(mg) PDMT% Px% 1 5228386.44 4884533.93 4 2 389.4 194.186 2.73 11.78 99.95 99.4 2 5224447.26 4858522.55 4 2 389.4 194.186 2.73 11.78 99.95 99.9 3 5231152.01 4866928.42 4 2 389.4 194.186 2.73 11.78 99.95 99.9 4 5245944.95 4870028.1 4 2 389.4 194.186 2.73 11.78 99.95 100.1 5 5215474.05 4883227.2 4 2 389.4 194.186 2.73 11.78 99.95 99.2 #商业供应商报告的价值10 应用于图2冲每个信号的预设积分区域为：DMT_为8.2791至7.9320?m，化合物为6.0283至5.7700ppm。用表1方程_!的变量值，Px纯度值为 达到99.7±0中擊.4。商公司报告的值范围--致11(99.7±0.1)。 图12. Tadalafil和 DMT 在 DMSO-d6中的混合物的1H NMR 谱，使用Nanalysis 台式60PRO采集。绿色和红色圆圈分别代表Tadalafil和 DMT 评估下的质子。 实验程序： Cialis 和 Apo-Tadalafil试验 通过称重和粉碎每种药物的五片来进行测定测试。药盒上标明每片盒20毫克Tadalafil。 每个充分混合的粉末(西力士 210.91毫克和：Apo--Tadalafi1 239.07毫克)和校准物化合物 DMT(西力士2.25毫克和1Apo-Tadalafil 3.6毫克)的一部分，代表大约20)活性化合物 ， 在分析天平(Mettler-Toledo MS上105DU)上称重，然后加入DMSO-d6(950PL) 将装有混合物的两个小瓶涡旋5分钟，然后再超声20分钟。 离心后，将上清液过滤并加入 5 mm标准 NMR中。每个1HNMR光谱中使用的采集和处理参数与纯度测定程序中所述的相同。 结果和讨论： Cialis 和 Apo-Tadalafil试验 为了确定每片中Tadalafil的平均质量，使用公式2： 基中 mpowder 是用于化验测试的片剂粉末样品的加权质量，T是平均片剂重量。任何其他参数的含义写公式1所述沐同 泰2：使用对苯二甲酸二甲酯 (DMT) 作为校准化合物测定希爱力片剂中他达拉非的平均质量。 Ax ADMT NDMT Nx Mx(g.mol') MDMT(g.mol) MDMT(mg) mpowder(mg) PDMT T (g) mx(mg) 1 278193.95 217851.59 4 2 389.4 194.18 2.25 210.91 0.9995 0.36191 19.8 2 277063.35 212686.38 4 2 389.4 194.18 2.25 210.91 0.9995 0.36191 20.2 3 273939.14 218779.56 4 2 389.4 194.18 2.25 210.91 0.9995 0.36191 19.4 4 277771.38 216568.53 4 2 389.4 194.18 2.25 210.91 0.9995 0.36191 19.9 5 276389.04 213979.22 4 2 389.4 194.18 2.25 210.91 0.9995 0.36191 20.0 #Value reported by the commercial supplier10 表3：使用对苯二甲酸二甲酯(DMT)作为校准化合物测定 Apo-Tadalafil片中Tadalafil的平均质量。 Ax ADMT NDMT Nx Mx(g.mol"') MDMT(g.mol") mDMT (mg) mpowder(mg) PDMT* T(g) mx (mg) 1 261260.33 314656.41 4 2 389.4 194.18 3.6 239.07 0.9995 0.41069 20.6 2 245126.49 301275.86 4 2 389.4 194.18 3.6 239.07 0.9995 0.41069 20.2 3 248098.42 304813.33 4 2 389.4 194.18 3.6 239.07 0.9995 0.41069 20.2 4 247394.95 303285.38 4 2 389.4 194.18 3.6 239.07 0.9995 0.41069 20.2 5 246545.00 300803.85 4 2 389.4 194.18 3.6 239.07 0.9995 0.41069 20.3 #商业供应商报告的价值10 通过对DMT 信号应用i8.1964到7.9930 ppm 和Tadalafil信号从5.9943到5.8340ppm时的预设积分区域来确定所选信号的相对面积(图2)。将表2和3中报告的值替换为公式2中的相应变量，获得了西力士每片19.8±0.3毫克和每片 Apo-Tadalafil片20.3±0.2毫克的平均质量。这两个值都在 USP 专论接受的他达拉非的范围内，报告为20±2 mg，以及高场数据， Cialis和Apo-Tadalafil分别确定为20.0 mg和 20.9 mg。 图3. Tadalafil参考标准在 DMSO-d6 中的 1H NMR 谱(黑色) 用 DMTDMT在 除了在化验测试中获得的定量信息外，在使用NM察到R分析时 空制，还可以观 ，纤维素、花：、酸、藏系一夏硫酸钠、滑骨、三氧化钛和用 Cialis 的三乙酸甘油酯和交联羧酸化饮、化化理花铁、经青纤 结论 台式核磁共振成功地用于评估Tadalafil的纯度，并对两种含有他达拉非作为活性成分的不同片剂进行分析测试。与其他方法一样，在数据采集和评估之前需要一个样品制备步骤。但是，使用 NMR， 可以在几分钟内获取数据。此外，数据评估很简单，因为 NMR 中的峰面积与分子中存在的质子数成正比。具有已知浓度和结构的内部校准物具有在可用子标分析物定量的区域中提供一种或多种信号的作用。 这项研究表明，食式 NMB在是控制分析中的作用有多，以及，楼c得鑫蜚，深需要专专券释智響数据，更不角说获得的大量信信。 ( 参考文献 ： ) ( 1 Jak i， B . U.； B zh el ya n sky ， A. ； Pauli， G. F . Ma gn . Reson. Che m . 2020； 1 - 9. h t tp s：/ /doi.or g/ 1 0. 10 0 2 / mrc.50 9 9 . ) ( 2 H a n n a ， G. M . J. As so c. Of f . An a l. C h e m . 19 84， 67， 222. ) ( B 3 H an n a，G. M .； L a u-Ca m ， C . A. Dru g De v . I n d. Ph ar m. 19 88， 1 4， 4 3. ) ( 1 4 H anna， G . M . ； L a u- C am， C. A . J . Assoc. O f f. A n al . C hem . 1 988，71 ， 1 1 1 8. ) ( Y an g， Q. ； Qiu， H.； G uo ， W.； Wa n g， D.； Zhou， X . ； X ue ， D . ； Zh a ng ， J.； W u， S.； Wa ng， Y. Mol ec ules 2015， 20，12114 . ) !6 Hatzimouratidis， K. Ther. Adv. 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