中药黄连、黄柏中33种农残检测方案

黄柏中久效磷(左)、甲基硫环磷(右)出峰情况 中药黄连、黄柏的33种农残测定分析 背景 近期部分中药检测企业反馈黄连、黄柏含大量色素和生物碱对 GCMSMS 色谱柱污染较为严重极易造成目标物线性不好、回收率低并且重现性差，常规的固相萃取法一、固相萃取法二、固相萃取法三都不能很好的净化，色谱柱前端污染较为严重，容易导致 GCMSMS 久效磷和甲基硫环磷丢峰。纳谱分析根据植物色素成分特点，近期又针对以上含色素和生物碱样品分析存在的问题，优化了固相2和固相3产品对于色素的吸附能力。相比常规固相萃取方式，优化后的固相萃取柱可以吸附更多生物碱类成分、鞣质类成分和色素成分，从而降低了样品中色素对色谱柱的污染和基质效应。今天，我们来看看黄连、黄柏项目的前处理效果吧。 黄连 黄柏 适用范围 本方法参考中国药典2020版2341第五法中的固相萃取法2和固相萃取法3，适用于含有生物碱基质干扰大和色素较多的中药材农残检测。 实验步骤 对照品溶液的制备 1.1 混合对照品配制 精密量取禁用农药混合1mL，置20mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用； 1.2气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备 取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙加溶解并制成每 1mL 含1.0mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每 1mL 含 0.1pg的溶液。 1.3空白基质溶液的制备 取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。 1.4 基质混合对照溶液的制备 分别精密量取空白基质溶液1.0mL(6份)，置氮吹仪上，40℃水浴浓缩至约 0.6mL，分别加入混合对照品溶液 10pL、20pL、50pL、100pL、150uL、200pL，加乙腈稀释至 lmL，涡旋混匀，即得。 2供试品溶液的制备 2.1提取 精密称取5g样品(3号筛)，加氯化钠1g，加入 50mL乙腈，：匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加50mL乙腈，，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5mL，加乙腈定容至10mL，摇匀，待净化。 3 净化 GCMSMS 样品： SPE 柱： SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱 500mg/500mg/6mL 净化：量取乙腈：甲苯(3：1) 10ml过 SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱 500mg/500mg/6mL 活化，活化液弃去，精密移取直接提取法制备的样品液2ml置萃取小柱上，待样品液全部过萃取小柱后，加乙腈：甲苯(3：1)20ml洗收，收集全部洗脱液，40℃以下减压回收至适量转移至已校准过的10ml具刻度离心管内，，再用适量乙腈充分洗涤减压回收瓶，洗液并入同一离心管内，氮吹至2ml，混匀，即得。 GC/MS/MS测定：精密量取过固相萃取柱后减压回收定溶后的溶液1mL，氮吹至0.4ml加入混合对照溶液，乙腈定溶至1ml，再加入0.3 mL 磷酸三苯酯溶液，混匀，过PTFE膜，上机分析。 注意事项：固相萃取柱 SelectCore GCB/NH2-A上层填料粒径较大，运输过程中可能会与上筛板产生一点间隙而导致滴速不均匀，使用前用玻璃棒或者注射器推杆压实就可以了。另外该固相萃取柱中含有的填料会对磺隆类化合物和久效磷产生较大吸附，故 LCMSMS 样品分析建议用固相2的方法来处理。 LCMSMS样品： SPE 柱： SelectCore HLB-B 固相萃取柱 200mg/6ml 净化：量取直接提取法制备的供试品液3ml， 过 SelectCore HLB-B中药农残专用固相萃取柱，收集全部净化液，混匀，即得。 LC/MS/MS 测定：精密量取过固相萃取柱后溶液 1mL 氮吹至 0.4ml 加入混合对照品液，乙腈定溶至 1ml，再加入 0.3 mL水，混匀，过 PTFE 膜， 上机分析。 4 气相色谱-串联质谱法(岛津 GC-MS-TQ8040 NX) 色谱条件 色谱柱： SHIMADZU SH-Rxi-17Sil MS， 30mx0.25mm， 0.25um； 进样口温度：250℃； 升温程序：初始温度为60℃，保持1min； 以10℃/min 升温至160℃；再以2℃/min 升温至230℃，最后以15℃/min 升温至300℃，保持6min； 载气：：高纯氦气(纯度>99.999%)； 进样方式：：不分流进样； 恒压模式：146kPa： 进样量：：1pL。 质谱条件 电离方式：：电子轰击电离源(EI)； 电离能量：70Ev： 接口温度：250℃； 离子源温度：250℃； 监测方式：多反应检测模式(MRM)； 溶剂延迟：：.10.0min。 5 高效液相色谱-串联质谱法(岛津 LC-MS 8045) 色谱条件 色谱柱： ChromCore C18-MS Pesticides 中药农残专用柱(2.1×100 mm， 2.6 p.m)流动相： A：0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L 甲酸铵) B：乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L 甲酸铵)=95：5 流速：0.3mL/min 柱温：40℃ 进样量：2 uL 梯度： 时间(min) 流速(mL/min) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 0.3 70 30 1 0.3 70 30 12 0.3 0 100 14 0.3 0 100 14.1 0.3 70 30 16 0.3 70 30 质谱条件 离子源：电喷雾离子源 (Electrosprayionization， ESI) 正离子扫描 监测方式：：多反应监测(Multiple Reaction Monitoring， MRM) 离子源接口电压：4.5kV 雾化气：：氮气3.0L/min 加热气： 干燥空气 10.0L/min DL 温度：250℃ 加热模块温度：400℃ 接口温度：300℃ 干燥气：t： N2 10 L/min 表1 黄连中33种农药残留的的则定添加回收结果：(%) 农残成分 回收率 农残成分 回收率 农残成分 回收率 甲胺磷 74.8% 地虫硫磷 88.1% 涕灭威砜 71.9% 甲基对硫磷 87.6% 硫线磷 88.2% 涕灭威亚砜 85.3% 对硫磷 99.8% 蝇毒磷 84.7% 灭线磷 85.5% 久效磷 84.5% 治螟磷 91.4% 氯唑磷 92.2% 磷胺 86.4% 特丁硫磷 92.9% 水胺硫磷 76.3% α-六六六 89.8% 特丁硫磷砜 89.7% α-硫丹 87.6% β-六六六 93.6% 特丁硫磷亚砜 88.2% β-硫丹 92.3% y-六六六 90.9% 甲基硫环磷 76.7% 硫丹硫酸酯 82.7% 8-六六六 76.3% 甲磺隆 93.6% 氟虫腈 90.1% 2，4'-滴滴涕 91.5% 氯磺隆 94.8% 氟虫腈砜 91.1% 4，4'-滴滴滴 90.2% 胺苯磺隆 89.9% 氟虫腈亚砜 91.3% 4，4'-滴滴涕 87.2% 甲拌磷 91.7% 氟甲腈 92.8% 4，4'-滴滴伊 96.2% 甲拌磷砜 92.9% o，p'-三氯杀螨醇 97.2% 杀虫脒 86.9% 甲拌磷亚砜 90.6% p，p'-三氯杀螨醇 98.8% 除草醚 87.3% 甲基异柳磷 89.5% 硫环磷 70.2% 艾氏剂 94.7% 内吸磷-O 94.3% 狄氏剂 96.6% 内吸磷-S 80.1% 苯线磷 91.2% 克百威 90.9% 苯线磷砜 92.7% 3-羟基克百威 70.2% 苯线磷亚砜 110.0% 涕灭威 85.0% 6 处理后溶液的颜色比对 GCMS/MS 样品： 从左至右分别是黄连提取液、黄连提取液过普通固3柱、黄连提取液过 SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱 从左至右分别是黄柏提取液、黄柏提取液过普通固3柱、黄柏提取液过 SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱 LCMS/MS样品： 从左至右分别是黄连提取液、黄连提取液过普通 HLB柱、黄连提取液过 SelectCore HLB-B 固相萃取柱 从左至右分别是黄柏提取液、黄柏提取液过普通 HLB 柱、黄柏提取液过 SelectCore HLB-B固相萃取柱 纳谱分析 7 黄连、黄柏普通净化方式与 GCB/NH2-A柱的 CGMSMS数据分析 TIC图 普通固3净化方式(黄连TIC 图) GCB/NH2-A 固相萃取柱净化(黄连TIC图) GCB/NH2-A 固相萃取柱净化(黄柏TIC 图) 0O120083000023D)803.(50888200011010080623800081534165.201.80X286326.0D>233.0036108D>109. 黄连中久效磷(左)、甲基硫环磷(右)出峰情况 8实验讨论 通过以上实验数据比对，，1可以看出，SelectCore GCB/NH2-A 中药农残专用固相萃取柱，针对黄连、黄柏中大量色素和生物碱类成分去除效果良好，且溶液颜色较浅，减少污染气相色谱柱、衬管和离子源的风险，还极大的消除了由于基质效应带来的硫丹、滴滴滴、六六六等农残成分的回收率偏低、目标物线性不好，回收率重现性差的问题，并且有客户反馈色谱柱前端污染而导致久效磷和甲基硫环磷丢峰的问题也得到了解决。SelectCore HLB-B中药农残专用固相萃取柱，对黄连、黄柏中色素成分祛除效果良好，减轻了由于基质中干扰物导致的LCMSMS 上样品中目标化合物响应低的问题，极大地减小了对离子源的污染，且目标化合物回收率高而稳定。两款固相萃取柱为黄连和黄柏的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。 参、款冬花、乌梅、桑叶、牛蒡 类化合物具有一定 子、菟丝子、酸枣仁、火麻仁、 吸附作用，故羌活、莪术、槟榔、小茴香、枳 LCMSMS样品分实、郁金、白头翁、菊花、陈皮、 析不适用，白花蛇舌草、褚实子、化橘红、 GCMSMS 样品分川防风、当归、马钱子等富含挥 析需5mL样品上 发油和色素类气质质测定项目 柱净化 色素较多，挥发油较多如：火麻 对滴滴滴类化合物 仁、菟丝子、酸枣仁、羌活、川 具有一定吸附性， SelectCore HLB-B 中药农 HLBB60- 残专用柱 060200-1 200mg/6mL；30/pkg 芎、莪术、蛇床子、紫苏叶、姜 适用于 LCMSMS黄、干姜、陈皮、枳实、青皮、 样品分析，3mL样防风、莱菔子、槟榔、当归、小 品上柱净化茴香、豆蔻、黄连、黄柏、虎杖、 大黄、马钱子、化橘红、当归 洗脱液中有甲苯， 色素含量多，含少量挥发油如： 毒性较大，且洗脱 SelectCore GCB/NH2-I 金银花、菊花、款冬花、忍冬花、 时间较长； 固相萃取柱 GN100-06 益母草、淫羊藿、龙胆草、大黄、 对磺隆类农药有一 500mg/500mg/6mL； 1000-2 虎杖、何首乌、麻黄、苦丁茶、 定吸附 LCMSMS 30/pkg 刘寄奴、山银花、忍冬藤、川牛 样品分析时应联合 膝、地黄、桑叶 其他净化方式分析 磺隆类数据 固相萃取方法 黄连、黄柏、何首乌、干益母草、 吴茱萸、虎杖、大黄、决明子、 三 胡黄连、苕叶细辛、菊花、千里 适用于干扰较为严 光、蒲公英、艾叶、荆芥、茵陈、 SelectCore GCB/NH2-A 重的 GCMSMS 样 金银花、番泻叶、龙胆草、蛇床 固相萃取柱 GNA100- 品分析。如若用于 500mg/500mg/6mL； 061000-1 30/pkg 子、川乌、草乌、车前子、地耳LCMSMS样品分草、金钱草、薄荷、广藿香、老析，应联合其他净鹳草、紫苏叶、忍冬藤、栀子、化方式连翘、莲子心、竹叶柴胡、矮地 茶、红景天、麻黄、白鲜皮、赶 黄草、款冬花等 纳谱分析NanoChrom纳谱分析技术(苏州)有限公司Phone： E-mail： customerservice@nanochrom.com Web： www.nanochrom.com 农残成分回收率农残成分回收率农残成分回收率甲胺磷74.8%地虫硫磷88.1%涕灭威砜71.9%甲基对硫磷87.6%硫线磷88.2%涕灭威亚砜85.3%对硫磷99.8%蝇毒磷84.7%灭线磷85.5%久效磷84.5%治螟磷91.4%氯唑磷92.2%磷胺86.4%特丁硫磷92.9%水胺硫磷76.3%α-六六六89.8%特丁硫磷砜89.7%α-硫丹87.6%β-六六六93.6%特丁硫磷亚砜88.2%β-硫丹92.3%γ-六六六90.9%甲基硫环磷76.7%硫丹硫酸酯82.7%δ-六六六76.3%甲磺隆93.6%氟虫腈90.1%2,4'-滴滴涕91.5%氯磺隆94.8%氟虫腈砜91.1%4,4'-滴滴滴90.2%胺苯磺隆89.9%氟虫腈亚砜91.3%4,4'-滴滴涕87.2%甲拌磷91.7%氟甲腈92.8%4,4'-滴滴伊96.2%甲拌磷砜92.9%o,p'-三氯杀螨醇97.2%杀虫脒86.9%甲拌磷亚砜90.6%p,p'-三氯杀螨醇98.8%除草醚87.3%甲基异柳磷89.5%硫环磷70.2%艾氏剂94.7%内吸磷-O94.3%狄氏剂96.6%内吸磷-S80.1%苯线磷91.2%克百威90.9%苯线磷砜92.7%3-羟基克百威70.2%苯线磷亚砜110.0%涕灭威85.0%