胶塞提取液中13种亚硝胺检测方案(液质联用仪)

SSL-CA20-463Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-534 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cnTel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn LCMS-8045 测定医用胶塞提取液中13种亚硝胺类化合物 LCMSMS-534 摘要：本文利用岛津 LCMS-8045三重四极杆液质联用系统分别建立了医用胶塞提取液中13种亚硝胺类化合物的测定方法。在该系统下，得到了相应检测限和定量限，且线性良好；定量限重复性实验结果显示，其保留时间和峰面积的相对标准偏差 (RSD%)分别小于1%和5%，表明重复性良好，适合医用胶塞提取液中13种亚硝胺类化合物的快速准确检测。 关键词： LCMS-8045 医用胶塞亚硝胺类化合物 药用包材在药品货期过程中为制剂质量提供一定保护作用，要求药用包材不能与制剂相互作用而引起制剂质量的变化，比如包材浸出物引起活性成分的降解等。因此，需对药用包材的相容性和安全性进行考察。 应用于药品包装材料的合成橡胶主要是卤化丁基橡胶。卤化丁基橡胶呈立体网状多孔结构，具有良好的弹性、阻隔性，对热、臭氧和化学品具有良好的抗耐性。但是卤化丁基橡胶在合成过程中需使用硫化剂， 如秋兰姆类。秋兰姆类硫化促进剂具有很强的化学反应活性，不仅相互之间存在发生反应的可能性，还可以与胶塞中的硝化剂发生反应生成有致癌性的亚硝胺类化合物，故需对其进行特别关注、进行相容性研究。 本文针对医用胶塞的提取液中亚硝胺类化合物，采用岛津 LCMS-8045 三重四极杆液质联用系统，建立了相关分析检测方法，供相关检测人员参考。 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津LCMS-8045 三重四极杆液质谱联用系统。具体配置为： 系统控制器： SCL-40自动进样器： SIL-40CX3输液泵： LC-40B X3质谱仪： LCMS-8045柱温箱： CTO-40S ( 色谱工作站： Lab S olutions LCMS Ver. 5.99 ) 1.2分析条件 液相色谱条件： 色谱柱： ACE Excel 3 C18-AR， 50 mm x4.6 mm l.D.， 3 um 流动相：A相-0.1%甲酸水溶液；B相-0.1%甲酸甲醇溶液 流速：0.8mL/min 柱温：40℃ 进样量：10uL 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为30%，时间程序见表1。 表1 梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 1.00 Pump B.Conc 1.0 2.00 Pump B.Conc 20.0 7.00 Pump B.Conc 70.0 9.00 Pump B.Conc 75.0 9.10 Pump B.Conc 100.0 11.00 Pump B.Conc 100.0 11.10 Pump B.Conc 1.0 13.50 Controller Stop LCMS-8045 质谱条件： 离子源： APCI(+) 加热模块温度：200℃ 雾化气流速：4L/min 扫描模式：多反应监测(MRM) DL 温度：180℃ 干燥气流速：10.0L/min 接口温度：300℃ MRM 参数：见表2 表2 MRM参数 No. 名称 缩写 前体离子产物离子 Q1 Pre Bias(V) CE(V) Q3 Pre Bias(V) N-亚硝基二甲胺 NDMA 75.10 58.10 -16 -12 43.05 -15 -18 2 NDEA 103.30 75.10 -10.0 -13.0 -11.0 N-亚硝基二乙胺 47.10 -25.0 -17.0 -20.0 3 N-亚硝基二丁胺/N-亚 NDBA/NDiBA 159.20 57.15 -12.0 -15.0 -24.0 硝基二异丁胺 103.00 -12.0 -14.0 -11.0 4 N-亚硝基二丙胺/N-亚 NDPA/NDiPA 131.20 43.10 -28.0 -15.0 -29.0 硝基二异丙胺 89.15 -23.0 -11.0 -29.0 5 NMOR 117.00 87.15 -10.0 -14.0 -10.0 N-亚硝基吗啉 86.20 -21.0 -14.0 -20.0 6 N-亚硝基哌啶 NPIP 115.15 41.10 -26.0 -14.0 -30.0 69.10 -23.0 -15.0 -27.0 7 NMPhA 137.20 107.30 -12.0 -14.0 -20.0 N-亚硝基-N-甲基苯胺 66.30 -12.0 -22.0 -28.0 8 NEPhA 150.90 77.20 -12.0 -21.0 -15.0 N-亚硝基-N-乙基苯胺 51.20 -12.0 -36.0 -20.0 9 NDBzA 227.20 91.20 -10.0 -12.0 -17.0 N-亚硝基二苄胺 65.20 -12.0 -50.0 -25.0 10 NDELA 135.00 74.00 -10.0 -14.0 -13.0 N-亚硝基-二乙醇胺 56.20 -28.0 -26.0 -25.0 11 N-亚硝基吡咯烷 NPYR 101.15 55.20 -23.0 -15.0 -22.0 41.10 -25.0 -31.0 -30.0 1.3标准溶液的配置 取相应标准贮备液(1000 mg/L)，用超纯水做溶剂逐级稀释为2、5、8、10、20、50、100、200 ng/mL 的标准系列工作溶液，待上机分析。 1.4样品前处理方法 提取液为某橡塑有限公司提供。吸取上清液，直接上机分析。 结果与讨论 2.1线性范围 按照1.3配制成相应浓度标准溶液，以各目标物浓度为横坐标，目标物峰面积为纵坐标，以外标法绘制标准曲线，所得校准曲线线性关系良好，线性相关系数大于0.99，准确度在90.0%-110.0%之间。曲线结果如下表3所示。 表3 标准曲线 名称 标准曲线 线性方程 范围 (ng/mL) 相关系数r NDMA Y=4521.71X+2437.15 2-200 0.9991 NDEA Y=4781.15X+3205.24 2-200 0.9998 NDBA Y=33829.5X+9666.42 2-200 0.9997 NDiBA Y=24276.5X+12552.2 2-200 0.9998 NDPA Y=12724.0X+6467.07 2-200 0.9996 NDiPA Y=15512.6X+5898.37 2-200 0.9990 NMOR Y=4693.48X+1573.84 2-200 0.9994 NPIP Y=15658.0X+5082.76 2-200 0.9996 NMPhA Y=15976.6X-3377.40 2-200 0.9997 NEPhA Y=18460.1X-6357.61 2-200 0.9996 NDBzA Y=85774.3X+23855.2 2-200 0.9998 NDELA Y=14674.3X+6517.38 2-200 0.9991 NPYR Y=21017.2X+8864.73 4-200 0.9996 2.2灵敏度实验 配制 2ng/mL 或 4 ng/mL 标准溶液进行灵敏度测试，其结果如图1所示。 NDMA： 2ng/mL NDEA ： 2ng/mL NDBA*： 2ng/mL Q131.20>43.10(+) 7.18e3 Q 131.20>43.10(+) 7.18e3 Q117.00>87.15 (+) RT=6.587 RT=2.956 RT=6.587 NDiBA*：2ng/mL 图1 2亚硝胺类化合物标准样品色谱图 2.3重复性实验 按照1.3步骤配制灵敏度相关浓度标准溶液，连续进样6次，考察保留时间和峰面积的重复性，结果如下表4所示。标准溶液的保呆时间和峰面积的相对标准偏差(RSD%)分别小于1%和小于5%，满足方法要求，表明仪器精密度良好。 表4 重复性测试 (n=6) 名称 平行1 平行2 平行3 平行4 平行5 平行6 AVG RSD/% NDMA R.T. 1.766 1.754 1.754 1.76 1.756 1.755 1.758 0.27 Area 8755 9066 8587 8102 8521 8358 8565 3.86 NDEA R.T. 4.278 4.282 4.292 4.286 4.285 4.288 4.285 0.11 Area 9773 9862 9562 10138 9639 9030 9667 3.84 NDBA R.T. 8.036 8.039 8.044 8.039 8.044 8.04 8.04 0.04 Area 52842 49568 52891 50901 52628 55421 52375 3.81 NDiBA R.T. 8.274 8.271 8.284 8.278 8.278 8.282 8.278 0.06 Area 40968 42390 46338 42376 43293 42906 43045 4.17 NDPA R.T. 6.178 6.178 6.186 6.18 6.18 6.186 6.181 0.06 Area 25220 25220 23793 27115 24699 25569 25269 4.34 NDiPA R.T. 6.587 6.591 6.583 6.586 6.593 6.589 6.588 0.05 Area 27238 28940 30678 30459 30294 28352 29327 4.70 NMOR R.T. 2.954 2.956 2.956 2.959 2.96 2.961 2.958 0.09 Area 9258 9609 10653 10098 9708 9747 9845 4.86 NPIP R.T. 4.775 4.779 4.783 4.786 4.784 4.782 4.782 0.08 Area 29175 30152 30332 29964 32769 30408 30467 3.98 NMPhA R.T. 6.753 6.746 6.755 6.753 6.752 6.756 6.752 0.05 Area 28995 31041 31765 28951 31698 29880 30388 4.24 NEPhA R.T. 7.505 7.516 7.51 7.515 7.517 7.517 7.513 0.06 Area 25372 25560 24956 24427 25596 24971 25147 1.79 NDBzA R.T. 9.511 9.516 9.509 9.515 9.516 9.513 9.513 0.03 Area 172082 185327 180514 170639 172200 175840 176100 3.27 NDELA R.T. 1.208 1.206 1.217 1.207 1.206 1.207 1.208 0.33 Area 28855 28594 31345 30114 31717 31031 30276 4.35 NPYR R.T. 3.407 3.403 3.407 3.406 3.403 3.406 3.405 0.05 Area 85690 84096 94276 86544 90298 83308 87369 4.77 2.4实际样品测试 将样品按1.4步骤进行处理，上机分析，平行测定两次，检测结果见表5。 表 5 样品检测结果 样品名称 提取液1 提取液2 浓度 (ng/mL) NDMA N.D. N.D. NDEA N.D. N.D. NDBA N.D. N.D. NDiBA N.D. N.D. NDPA N.D. N.D. NDiPA N.D. N.D. NMOR N.D. N.D. NPIP N.D. N.D. NMPhA N.D. N.D. NEPhA N.D. N.D. NDBzA N.D. N.D. NDELA N.D. N.D. NPYR N.D. N.D. 结论 本实验建立了一种使用岛津三重四重杆质谱仪 LCMS-8045 测定医用胶塞提取液中13种N-亚硝胺类的方法，用外标法定量， NPYR 的定量限为4 ng/mL， 其余亚硝胺类化合物定量限艮 2ng/mL；定量限浓度溶液重复进样6针，其保留时间和和面积的 RSD%分别为小于1%和小于5%，满足方法要求。建立的方法可应用于医用胶塞提取液中亚硝胺类化合物的测试。 岛津应用云 本实验建立了一种使用岛津三重四极杆质谱仪LCMS-8045测定医用胶塞提取液中13种N-亚硝胺类的方法，用外标法定量；定量限浓度溶液重复进样6针，其保留时间和峰面积的RSD%分别为小于1%和小于5%,   满足方法要求。建立的方法可应用于医用胶塞提取液中亚硝胺类化合物的测试。