细胞中病毒检测方案(流式细胞仪)

新冠疫情肆虐全球，进一步促进了世界各地的研究人员迅速开发疫苗对抗疾病大流行因此需要利用新的方法和技术加速病毒疫苗的开发过程。GEN eBook包含一系列文章和研究，重点关注创新的研究和开发策略，让科学家们能够充分利用新方法和获得的新见解，解决病毒生物学的复杂问题，从而加快发现和开发抗病毒感染新疫苗的速度。—— 关键主题 ——- 流感疫苗可预防患有镰刀形细胞症小鼠的H1N1感染- 细胞系中的微粒释放及其抗流感活性- 接受肾透析的HIV阳性患者在接种水痘-带状疱疹病毒疫苗后的血清学和T细胞反应- 使用新型多重T细胞活化试验进行的激酶抑制剂表型筛选- 对四价丙型肝炎病毒样颗粒疫苗佐以Toll样受体2型激动剂的抗体应答—— 精彩预览 ——利用生物制剂、小分子或基因工程的方法调节TCR信号通路，在众多治疗领域发挥重要作用，包括癌症免疫治疗、过继细胞治疗及疫苗开发。自身免疫性疾病的一个主要原因是某些干扰导致TCR信号增强和T细胞过度激活。例如，一些遗传缺陷、突变和其他机制导致T细胞激酶活性增强，从而参与许多自身免疫病的病理发生，使它们成为有吸引力的T细胞活化抑制剂靶点。目前，FDA批准的激酶抑制剂（KI）有37种，主要用于肿瘤治疗，此外约有250种正在临床试验中。专门针对T细胞激活早期信号事件的KI药物，已成为治疗自身免疫性疾病的新焦点，最近FDA已批准KI治疗类风湿性关节炎。在开发调节TCR活性的药物和疗法时，需要对细胞功能和健康进行分析。为了满足快速监测T细胞功能的需要，我们采用高通量流式细胞术开发了一种优化的、高内涵的、多重性检测方法来分析T细胞激活，可用于同时评估T细胞表型、T细胞激活标记物、细胞增殖、细胞活力及其分泌的细胞因子定量，并适用于96孔或384孔板的高通量筛选需求。采用这种方法快速筛选了152个KI小分子，以验证其对人原代T细胞激活的抑制能力。样本来自人外周血PBMC，采用抗CD3/CD28微球刺激。在基于流式细胞术的筛选中，我们将以下检测在一次实验中完成，节省时间，同时获得丰富的样本信息，以便做出综合性决策：    检测T细胞活化早、中、晚期的活化标志，分别是CD69、CD25和HLA-DR    评估CD4和CD8细胞的增殖水平    分析CD4和CD8细胞的活性    定量细胞分泌的多种细胞因子，以评估T细胞功能我们将这些分析的指标作为小分子库的筛选标准，用系统内置的筛选工具（Profile Map）进行筛选。如下图所示，左边面板（图A）显示了筛选中整合的11个参数，及每个指标的用户定义阈值。通过这种筛选方法，我们鉴定出27种不同的KI，它们抑制所有的T细胞激活标记物及细胞因子分泌（如图B所示）。图C的折线图对所有hits命中和抑制程度进行了排序，对每个指标提供了简单的可视化呈现。例如，一些KI处理完全抑制所有激活标志，而其他化合物对某些特定的表型标志或细胞因子影响更大。此外，本次实验还用不同浓度的化合物（20uM - 20nM）处理细胞，以获得抑制浓度曲线及IC50。这些数据显示这些KI具有不同的MOA特性。这种基于流式细胞术的高通量筛选方法，既可用于抗体和小分子开发流程中的初筛，也可用于二次表型筛选。此外，T细胞活化和细胞因子检测还可用于肿瘤免疫学领域的功能研究，对细胞制造过程中的T细胞进行表征。更多实验信息和详细数据等你来查看↓点击下方下载全文↓