化妆品中十种生物碱检测方案(液质联用仪)

SSL-CA20-419Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-524 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.-Analytical Applications CenterEmail：sshzyan@shimadzu.com.cnTel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn LCMS-8045 测定化妆品中的十种生物碱 LCMSMS-524 摘要：本文采用岛津 LCMS-8045三重四极杆液质联用仪建立了一种同时检测化妆品中10种生物碱的方法。在护手霜和乳液基质中2~100 pg/kg浓度范围内建立标准曲线，10种生物碱线性良好，校准曲线相关系数均大于0.995，添加回收实验峰面积的重复性在 0.19~6.32%之间，精密度良好，方法检出限和方法定量限分别介于0.013~0.295 ug/kg 和 0.041~0.895 ug/kg 之间，能够满足日常分析要求。 关键词：三重四极杆液相色谱质谱联用仪化妆品 生物碱 生物碱(Alkaloids) 是一类存在于植物体内，由次生代谢产生的含氮有机化合物，种类繁多，具有显著的药理活性。如阿托品为抗胆碱药，可用于镇静、止痛，毛果芸香碱为胆碱酯酶抑制药，但同时它们也具有一定毒性，会引起恶心、呕吐、心悸等症状，严重时可能对神经系统、消化系统等造成损害导致死亡。如阿托品可能会引起中枢神经毒性；毛果芸香碱会引起恶心、腹痛等不良反应。 显著，具有毒性的生物碱类化合物，长期使用这种化妆品将会对人体健康带来影响。因此， 《化妆品安全技术规范》 (2015版)规定东莨菪碱、番木鳖碱、乌头碱、秋水仙碱等生物碱均为禁用物质。 近年来，随着消费者对安全、健康的关注，越来越多的化妆品开始通过添加中草药等天然成分达到相应的美白护肤功效，但同时也有可能会引入生物活性 本文参考 GB/T 36942-2018《化妆品中10种生物碱的测定液相色谱串联质谱法》标准中的要求，使用岛津超高效液相色谱仪 LC-20Axg 和三重四极杆质谱LCMS-8045联用，建立了化妆品中十种生物碱的超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱联用的分析方法，供相关人员参考。 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津 LCMS-8045 超高效液相色谱三重四极杆质谱联用系统，具体配置为： 系统控制器： CBM-20A脱气机： DGU-20A5R输液泵： LC-20ADxR×2自动进样器： SIL-20ACMP柱温箱： CTO-20AC质谱仪： LCMS-8045 色谱工作站： LabSolutions Ver. 5.99 1.2分析条件 液相色谱条件： 色谱柱： Shim-pack Velox SP-C18 100 mm×.2.1 mm 1.D， 1.8 um (岛津(上海)实验器材有限公司， P/N：227-32001-03) 流动相：A相-水(含0.1%甲酸)；B相-乙腈 流速：0.3 mL/min 柱温：30℃ 进样体积：2uL 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为10%，时间程序见表1。 表1 梯度洗脱时间程序 时间(min) 单元 处理命令 值 2.00 Pumps Pump B Conc. 10 8.00 Pumps Pump B Conc. 60 9.00 Pumps Pump B Conc. 90 10.00 Pumps Pump B Conc. 90 10.01 Pumps Pump B Conc. 10 12.50 Controller Stop 质谱条件： 分析仪器：LCMS-8045 加热模块温度：300℃ 离子源：ESI (+)雾化气流速：3.0L/min加热气流速：10.0L/min DL温度：250℃ 离子源温度：400℃ 扫描模式：多反应监测(MRM) 干燥气流速：10.0L/min MRM参数：见表2 表2 MRM 参数 序号 化合物名称 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias (V) CE Q3 Pre Bias (V) 1 209.20 95.05* -11 -32 -18 毛果芸香碱 163.10 -11 -19 -16 2 东莨菪碱 304.15 138.10* -15 -20 -14 156.10 -16 -16 -15 3 士的宁 335.30 184.15* -10 -38 -19 156.10 -18 -47 -29 4 番土鳖碱 395.20 244.05* -12 -39 -26 324.15 -20 -31 -16 5 阿托品 290.25 124.15* -15 -26 -23 93.10 -15 -33 -17 6 秋水仙碱 400.30 358.15* -12 -22 -16 310.10 -12 -29 -20 7 喜树碱 349.35 305.15* -11 -24 -20 219.15 -11 -51 -22 8 新乌头碱 632.50 105.00* -20 -55 -19 572.35 -20 -35 -38 9 次乌头碱 616.40 556.35* -32 -35 -38 524.30 -20 -39 -34 10 乌头碱 646.50 586.35* -20 -37 -40 105.05 -20 -55 -19 *定量离子对 1.3样品制备 样品前处理方法：参照 GB/T36942-2018《化妆品中10种生物碱的测定》。 标准溶液配制：取空白样品(护手霜)，按照样品制备方法进行处理，用得到的空白样品提取液将混合标准储备液逐级稀释得到10种生物碱的浓度为2、5、10、20、50、100 ug/kg的系列混合标准工作溶液。 结果与讨论 2.1标准样品的 MRM 色谱图 图1十种生物碱基质标准样品的 MRM 色谱图 (50.0 ug/kg) 2.2标准曲线和精密度实验 将1.3配制的不同浓度的基质加标样品，按1.2中的分析条件进行测定，外标法制作校准曲线，线性范围为2~100 ug/kg，结果表明，相关系数R均大于0.9995，线性良好。将 20 ug/kg 基质标液连续进样六针，峰面积的重复性在 0.33~2.81%之间，精密度良好，性线性方程、相关系数和重复性结果见表3. 表3护手霜基质匹配标曲中10种生物碱的校准曲线参数 序号 名称 校准曲线 相关系数R 检出限(ug/kg) 定量限(ug/kg) 保留时间 RSD% 峰面积RSD% 1 毛果芸香碱 Y=(23803.0)X+(27408.2) 0.9998 0.134 0.405 1.13 2.12 2 东莨菪碱 Y=(72411.1)X+(36990.0) 0.9998 0.039 0.119 1.20 0.33 3 士的宁 Y=(16932.8)X+(18277.6) 0.9995 0.039 0.118 0.22 0.96 4 番土鳖碱 Y=(11852.9)X+(10853.2) 0.9995 0.068 0.206 0.24 1.54 5 阿托品 Y=(106364)X+(121683) 0.9995 0.013 0.041 0.29 0.92 6 秋水仙碱 Y=(6419.4)X+(-3160.58) 0.9999 0.295 0.895 0.11 1.50 7 喜树碱 Y=(14092.5)X+(924.615) 0.9999 0.056 0.169 0.12 1.26 8 新乌头碱 Y=(25215.4)X+(30291.8) 0.9997 0.069 0.208 0.10 2.05 9 次乌头碱 Y=(18608.7)X+(39777.0) 0.9996 0.027 0.083 0.08 2.81 10 乌头碱 Y=(21129.9)X+(28502.2) 0.9999 0.081 0.245 0.09 1.75 2.3灵敏度实验 按照1.3中方法，将2 ug/kg 基质标液进样分析，10种生物碱的最低检出限 (S/N=3， LOD 表示)、最低定量限(S/N=10， LOQ表示)根据计算得出，方法检出限和方法定量限分别介于 0.013~0.295 ug/kg 和 0.041~0.895ug/kg之间，灵敏度完全满足标准要求，结果如表3所示。 2.4回收率实验 对高、、低2个加标水平下的乳液和护手霜样品按照1.3平行处理3次，峰面积相对标准偏差 (RSD%)在 0.19~6.32%之间，精密度良好，结果如表4所示。乳液和护手霜基质的2个加标水平的回收率在76.19~113.32%之间，回收率良好，结果如表4所示。 表4 乳液和护手霜基质中峰面积重复性和加标回收率结果((n=3) 化合物 加标水平 (ug/kg) 乳液 护手霜 回收率%(n=3) RSD%6(n=3) 回收率%((n=3) RSD%%(n=3) 毛果芸香碱 5 89.55 4.29 94.00 2.32 10 97.32 3.31 97.50 2.14 东莨菪碱 5 97.60 2.91 91.98 0.19 10 95.01 2.13 91.88 0.85 士的宁 5 87.29 4.69 90.33 0.23 10 88.88 1.99 90.82 1.36 番土鳖碱 5 88.06 6.32 84.31 2.18 10 96.53 3.23 89.12 1.52 阿托品 5 87.81 5.65 91.67 1.97 10 86.91 1.88 90.59 1.03 秋水仙碱 5 96.60 5.64 103.49 3.33 10 94.26 2.38 101.07 3.87 喜树碱 5 85.83 1.38 94.41 2.96 10 86.95 3.51 97.57 0.73 新乌头碱 5 83.28 3.42 87.97 4.99 10 96.71 3.57 86.67 0.94 次乌头碱 5 82.49 2.33 87.97 6.01 10 113.32 4.36 76.19 1.77 乌头碱 5 79.82 3.65 91.22 5.18 10 99.61 4.92 80.64 1.13 结论 参照国家标准建立了一种液相色谱串联质谱联用同时检测化妆品中10种生物碱的方法。该方法精密度实验结果表明：峰面积的相对标准偏差0.33~2.81%之间，仪器精密度良好，外标法标校准曲线相关系数均大于 0.995，线性良好，方法检出限和方法定量限分别介于0.013~0.295 ug/kg 和 0.041~0.895 ug/kg 之间。该方法前处理快速、操作简单、重复性好、灵敏高，适合化妆品中生物碱的高灵敏度检测。 岛津应用云 参照国家标准建立了一种液相色谱串联质谱联用同时检测化妆品中10种生物碱的方法。该方法精密度实验结果表明：峰面积的相对标准偏差0.33~2.81%之间，仪器精密度良好，外标法标校准曲线相关系数均大于0.995，线性良好，方法检出限和方法定量限分别介于0.013~0.295   μg/kg和0.041~0.895   μg/kg之间，对高、低2个加标水平下的乳液和护手霜样品平行处理3次，峰面积相对标准偏差（RSD%）在0.19~6.32%之间，精密度良好，乳液和护手霜基质的2个加标水平的回收率在76.19~113.32%之间，回收率良好。该方法前处理快速、操作简单、重复性好、灵敏高，适合化妆品中生物碱的高灵敏度检测。