褐篮子鱼中水解氨基酸检测方案(氨基酸分析仪)

Biochrom30+氨基酸分析仪检测褐篮子鱼中水解氨基酸 摘要： 以褐篮子鱼为原料，使用 Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明褐篮子鱼肌肉中氨基酸总量的质量百分比为 17770.7mg/100g，必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸总量的39.37%，鲜味氨基酸占氨基酸总量的 39.27%。 样品前处理 1、 所用试剂 1、1 浓盐酸，浓度≥36%，优级纯 1、2 6mol/L 盐酸：取500mL 盐酸加水稀释至1000mL，混匀。 1、3 水：去离子水 1、 4 苯酚：须重蒸 1、5 17种氨基酸标准品 行号 氨基酸 行号 氨基酸 1 Asp 天冬氨酸 2 Thr 苏氨酸 3 Ser 丝氨酸 4 Glu 谷氨酸 5 Pro 脯氨酸 6 Gly 甘氨酸 7 Ala 丙氨酸 8 Cys 胱氨酸 9 Val 缬氨酸 10 Met 蛋氨酸 11 lle 异亮氨酸 12 Leu 亮氨酸 13 Tyr 酪氨酸 14 Phe 苯丙氨酸 15 His 组氨酸 16 Lys 赖氨酸 17 Arg 精氨酸 2、 前处理设备 1) 分析天平：感量分别为0.0001g 和0.00001g。 2)水解管：耐压螺盖玻璃试管，体积为25mL 3) 匀浆机。 4 无油真空泵 5) 干浴水解浓缩仪 5) 移液管 7 0.22um 滤膜 13、 样品制备(参考国参GB 5009.124-2016) 原料鱼手工去除鱼鳞、鱼皮、鱼刺和内脏，采肉后清洗、沥干，在匀浆机中打成肉糜，于-18℃冰箱中冷冻保存，分析时取出解冻后使用。 4、 试样水解 称取含蛋白 7.5-25mg 的试样，加入水解管中，加入15mL 6mol/L盐酸，继续向水解管内加入苯酚3滴~4滴。冷冻 3min~5min，接到真空泵的抽气管上，抽真空(接近OPa)，然后充入氮气，重复抽真空-充入氮气3次后，在充氮气状态下拧紧螺盖。将水解管放入干浴水解浓缩仪中，110℃水解 22-24h，冷却、混匀、开管、转移并定容到50ml 容量瓶中，用移液管取适量样液，在干浴水解浓缩仪中50℃吹干，必要时加入少许水，重复吹干1-2次，加入3-5mL PH2.2的稀释上机用柠檬酸钠缓冲液溶解，振荡混匀后，吸取溶液通过 0.22 um 滤膜后，转移至仪器进样瓶，为样品测定液，供仪器测定用。 分析方法描述(Biochrom 30+) 氨基酸分析仪分析方法参数： 1)色谱柱：： Biochrom Na 型阳离子交换树脂柱， 4.6×20cm 2)分离程序： NO. Time lemp Buffer Pump Nin Rec Commands 1 01：00 48 1 35.0ml/h ON OFF 00：00 48 1 35.0ml/h ON OFF Reset 3 01：00 48 1 35.0ml/h ON OFF Load 4 06：40 48 1 35.0ml/h ON ON 5 13：00 52 2 35.0ml/h ON ON 6 01：00 52 5 35.0ml/h ON ON 7 16：00 95 5 35.0ml/h ON ON 8 04：00 95 6 35.0ml/h ON ON 9 04：00 95 1 35.0ml/h ON ON 10 09：00 48 1 43.0ml/h ： OFF OFF 11 02：00 48 1 35.0ml/h ON OFF End 3))运行时间：经分析时间+再生时间 57min 4)反应单元温度：1135°C。 5)) 检测波长：570nm、440nm 同时检测。 三、 样品中氨基酸含量的计算 样品测定液氨基酸的含量按式(2)计算： 式中： ci———样品测定液氨基酸i的含量，单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)； Ai—一试样测定液氨基酸i的峰面积； As.s -氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积； CS ——一氨基酸标准工作液氨基酸s 的含量，单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)。 试样中各氨基酸的含量按式(3)计算： 式中： Xi―――试样中氨基酸i的含量，单位为克每百克(g/100g)； ci————-试样测定液中氨基酸i的含量，单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)；F――—稀释倍数； -试样水解液转移定容的体积，单位为毫升(mL)； M————-氨基酸i的摩尔质量，单位为克每摩尔(g/mol)； m———-尔样量，单位为克(g)； 10°’———将试样含量由纳克(ng)折算成克(g)的系数； 100—―—换算系数。 附、褐篮子鱼分析图谱及做样结果 570nm Results Pk # Name Retention Time Area ESTD concentration(mg/100g) 4 Asp 7.733 4328929 1874.2 6 Thr 9.499 2206353 838.2 7 Ser 10.333 2321810 750.1 8 Glu 12.399 5852515 2653.6 10 Gly 19.065 5257310 1190.0 11 Ala 20.399 4201530 1261.4 12 Vel 22.665 2585902 1000.1 13 Met 24.498 1114322 475.3 14 Ile 25.998 1885461 845.2 15 Leu 26.998 3565235 1454.3 16 Tyr 29.998 1050824 641.0 17 Phe 30.998 1435996 723.1 18 His 36.264 1103755 471.2 19 Lys 38.098 4091352 1659.4 22 Arg 46.030 2312439 1183.9 Totals 43313733 17021.1 440nm Results Pk # Name Retention Time Area ESTD concentration(mg/100g) 3 Pro 14.132 830577 749.7 830577 749.7 以褐篮子鱼为原料，使用Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明褐篮子鱼肌肉中氨基酸总量的质量百分比为17770.7mg/100g，必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸总量的39.37%，鲜味氨基酸占氨基酸总量的39.27%。