大米中维生素B6检测方案(液相色谱仪)

SSL-CA20-201Excellence in Science Excellence in ScienceLC-215 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.-Analytical Applications CenterTel：86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn 高效液相色谱法测定食品中维生素B，的含量 LC-215 摘要：：本文利用岛津LC-20 AT 高效液相色谱仪建立了食品中维生素B，的测定方法。样品参照国标《GB5009.154-2016》中的里处理方式，进行提取、上机分析。维生素B。在0.1-1.0 ug/mL 浓度范围内具有较好的线性关系，线性相关系数r>0.9998，系统精密度良好，符合标准检测要求。 关键词：高效液相色谱法泛酸 保健食品 维生素B，是一种水溶性B族维生素，又名吡哆素，包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺。维生素B，在酵母菌、肝脏、谷粒、肉、鱼、蛋、豆类及花生中含量较多。维生素B，参与人体多种代谢反应，尤其是和氨基酸代谢有密切关系。临床上应用维生素B，制剂防治妊娠呕吐和放射病呕吐。 食品安全国家标准《GB 5009.210-2016》中规定 高效液相色谱法，适用于对添加了维生素B，的食品测定，并对检测限和定量限做了明确的规定。 本实验参照标准中的实验条件，使用岛津Prominence LC-20 AT 高效液相色谱仪对大米中维生素B。含量进行测定，结果表明，该方法检测灵敏度高，重复性好，可以满足标准中的检测要求。 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津 Prominence LC-20 AT 高效液相色谱仪，包括 CBM-20A系统控制器，LC-20AT 输送泵，SIL-20A自动进样器， CTO-20AC 柱温箱， RF-20A荧光检测器，，LabSolutions 色谱工作站。 1.2分析条件 色谱柱： Tnature C18 (150 mm x4.6 mml.D.， 5 um) 流动相：甲醇50mL、辛烷磺酸钠2.0 g、三乙胺2.5 mL， 用水溶解并定容1000 mL， 冰乙酸调pH至3.0±0.1 流速：1.0 mL/min 柱温：30℃ 检测波长：激发波长293 nm，发射波长395nm； 进样体积：10 uL 洗脱方式：等度洗脱 样品前处理 提取：称取5g粉碎后的大米样品，于150mL锥形瓶中，加入25 mL 40 ℃温水、0.5g淀粉酶，充氮后盖上瓶塞，置于50℃培养箱内约 30 min，取出冷却至室温。 用盐酸溶液，调节上述试样溶液的 pH至1.7±0.1，放置约1 min。 再用氢氧化钠溶液调节试样溶液的 pH至4.5±0.1。把上述锥形瓶放入超声波振荡器中，超声振荡 10 min。将试样溶液转移至50 mL容量瓶中，用水冲洗锥形瓶。洗液合并于50 mL容量瓶中，用水定容至50mL。另取 50mL锥形瓶，上面放入漏斗和滤纸，把定容后的试样溶液倒入其中，自然过滤。滤液再经0.45 um 微滤滤膜过滤，用试管收集，转移1mL滤液至进样瓶作为试样待测液。 结果与讨论 3.1标准品溶液色谱图和线性范围 分别精密称取泛吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺准品适量，用 0.1 mol/L 盐酸溶解定容，临用前配制成20 ug/mL混合标准中间液，用水稀释成浓度为0.1、0.2、0.4、0.6、1.0 ug/mL 五个浓度的标准溶液，按1.2中的分析条件进行测定，三种标准品溶液色谱图如图1所示。 图1维生素B，混合标准品溶液色谱图 (0.4ug/mL) 以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，采用外标法建立标准曲线，结果如图2所示。所得曲线线性关系良好，线性方程、线性范围、相关系数和检出限(检出限、定量限根据最低浓度点计算得出))见表1。 图2维生素B，混合标准品校准曲线 表1 校准曲线参数 中文名称 标准曲线 相关系数r 线性范围(ug/mL) 检出限(ng/mL) 定量限(ng/mL) 吡哆醛 Y=4.41e+006X-24568.9 0.9999 0.1-1.0 0.3 0.9 吡哆醇 Y=7.20e+006X-45694.9 0.9999 0.1-1.0 0.3 0.9 吡哆胺 Y=6.20e+006X-150245 0.9998 0.1-1.0 0.5 1.5 3.2精密度实验 按照1.2分析条件测定，选择浓度为0.6 ug/mL的基标加标样品溶液分别连续进样测定6次，重复性色谱图如图3所示。：三种化合物的保留时间 RSD% 为 0.12-0.26%；峰面积RSD%为 0.35-0.58%，结果见表2。精密度实验结果表明，岛津LC-20 AT 高效液相色谱仪具有良好的精密度。 uV(x100.000) 图3 标准品溶液6针重复性色谱图(浓度 0.6ug/mL) 表2 维生素B，保留时间和峰面积重复性结果(n=6) 名称 RSD% (0.6ug/mL) R.T. Area 吡哆醛 0.12 0.35 吡哆醇 0.15 0.42 吡哆胺 0.26 0.58 3.3回收率试验 称取空白大米样品，加入一定量维生素B。混合标准品溶液，使样品加标浓度为 0.7 mg/100g，按照2.中所述前处理方式处理3个平行加标样品，按1.2中条件进行测试，计算平均回收率。空白样品色谱图见图4，空白基质中未检出。0.7 mg/100g 加标样品的回收色谱图见图5，三种化合物的平均回收率在86.2%，满足该标准检测要求，结果详见表 3。 图4空白样品色谱图 图5 加标样品色谱图：((加标量0.7 mg/100g) 表3 加标回收率((n=3) 名称 加标样梓实际浓度(mg/100g) — 平均回收率% RSD% 平行1 平行2 平行3 吡哆醛 0.601 0.606 0.601 86.1 0.39 吡哆醇 0.601 0.603 0.609 86.3 0.56 吡哆胺 0.602 0.608 0.602 86.3 0.46 结论 本文采用岛津 Prominence LC-20 AT 高效液相色谱仪，参考《GB5009.154-2016食品中维生素B，的测定》中规定的检测方法，建立了一种测定食品中维生素B，的方法。该方法检测灵敏度高，重复性好，3种标准品0.1-1.0ug/mL浓度范围内具有较好的线性关系，线性相关系数r>0.9998，吡哆醛、吡哆醇、吡哆胺仪器定量限分别为0.9、0.9、1.5 ng/mL。3种标液加标回收实验平均回收率为86.2%，连续进样6针保留时间 RSD% 在 0.12%-0.26%之间，峰面积 RSD%在0.35%-0.58%之间，系统精密度良好。实验表明，该方法完全满足标准中的各项规定，， I可用于食品中维生素B，的检测。 岛津应用云 本文采用岛津Prominence LC-20 AT高效液相色谱仪，参考《GB 5009.154-2016 食品中维生素B6的测定》中规定的检测方法，建立了一种测定食品中维生素B6的方法。该方法检测灵敏度高，重复性好，3种标准品0.1-1.0 µg/mL浓度范围内具有较好的线性关系，线性相关系数r＞0.9998，吡哆醛、吡哆醇、吡哆胺仪器定量限分别为0.9、0.9、1.5 ng/mL。3种标液加标回收实验平均回收率为86.2 %，连续进样6针保留时间RSD%在0.12 %-0.26 %之间，峰面积RSD%在0.35 %-0.58 %之间，系统精密度良好。实验表明，该方法完全满足标准中的各项规定，可用于食品中维生素B6的检测。