稻米中氨基丁酸检测方案(液相色谱柱)

采用 TSKgel 色谱柱参考 NY/T 2890-2016 测定稻米中y-氨基丁酸 y-氨基丁酸 y-aminobutyric acid 【基本信息】 y-氨基丁酸(GABA)广泛分布于动植物体内。植物如豆属、参属、中草药等的种子、根茎和组织液中都含有 GABA。在动物体内， GABA 几乎只存在于神经组织中，其中脑组织中的含量大约为 0.1-0.6mg/克组织，免疫学研究表明，其浓度最高的区域为大脑中黑质。GABA 是目前研究较为深入的一种重要的抑制性神经递质，它参与多种代谢活动，具有很高的生理活性。 【样品的前处理】 提取：称称1g稻米粉末(60目)于离心管中，加入10 mL 80%乙醇超声提取 30 min，在旋涡混合器上震荡2 min， 静置5 min， 5000 r/min 离心5 min， 将上层清液转入25mL 容量瓶中，样品残渣再用10 mL 80%乙醇提取1次，合并2次提取液，定容至25mL，摇匀，待衍生化。 衍生：移取上述稻米提取液与γ-氨基丁酸标准品溶液各1mL，加入0.2 mL 碳酸氢钠溶液与 0.4 mL 4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯衍生剂，混匀后在70℃水浴中衍生反应20min， 用 0.45 um 水相滤膜过滤后进样。 【分析条件】 仪器： Thermo Ultimate 3000 色谱柱：TSKgel ODS-100V(4.6mmI.D×25 cm， 5 um) 流动相：乙腈-乙酸钠溶液 流速： 1.0 mL/min 柱温：30℃ 进样体积：10pL 检测器：紫外检测器，436 nm 分析结果 图1y-氨基丁酸标准品(0.01mg/mL)的色谱图 No. 对照品名称 保留时间(min) 理论塔板数 不对称因子 1 y-氨基丁酸衍生物 8.253 17232 1.06 图2 稻米提取衍生液的色谱图 No. 对照品名称 保留时间(min) 理论塔板数 不对称因子 1 y-氨基丁酸衍生物 8.258 13426 1.02 结论 采用 TSKgel ODS-100V (4.6 mm I.D.×25 cm，5 um) 色谱柱可以将稻米中y-氨基丁酸与其他物质完全分离，且出峰位置稳定，满足 NY/T 2890-2016 的要求。         本实验参照农业标准NY/T 2890-2016，采用TSKgel ODS-100V（4.6 mm I.D. × 25 cm, 5 μm）色谱柱建立了高效液相色谱法对稻米中γ-氨基丁酸含量进行测定。结果表明，该色谱柱可以将γ-氨基丁酸与其他物质完全分离，且出峰位置稳定，完全满足NY/T 2890-2016的分离要求。