猪肝中维生素B2检测方案(液相色谱仪)

SSL-CA20-200Excellence in Science Excellence in ScienceLC-214 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.- Analytical Applications CenterTel：86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn 高效液相色谱法测定猪肝中维生素B，的含量 LC-214 摘要：本文建立了高效液相色谱法测定猪肝中维生素B，含量的方法。样品参照国标《GB5009.84-2016》中的前处理方式，分别进行提取、衍生化、上机分析。维生素Bz在0.02-0.5 ug/mL浓度范围内具有较好的线性关系，线性相关系数r>0.9998，系统精密度良好。 维生素B， (化学式： C17H20N4O，)又叫核黄素，微溶于水。是体内黄酶类辅基的组成部分，参与机体复杂的生物氧化过程，具有重要药理作用。核黄素生物利用度低，极易引起各种核黄素缺乏症。我国流行病学调查表明：核黄素缺乏症的发病率为20%-40%，主要表现为为口、眼和外生殖器部位的炎症，如口角炎、唇炎、舌炎、眼结膜炎和阴囊炎等。 如果缺乏维生素B，可选择奶类及其制品，动物内脏(肝、肾和心等)，蛋黄，多种鱼类(特别是鳝鱼、 鲫鱼等)，菠菜、胡萝卜等蔬菜，橘子和柑橙等水果食用，一般不必额外补充。 《GB5009.85-2016 食品中维生素B，的测定》标准中规定了测定食品中维生素B，的液相色谱方法。本实验参照标准中的实验条件，使用岛津 Prominence-iLC-2030 高效液相色谱仪对猪肝中维生素B，含量进行测定，结果表明，该方法检测灵敏度高，重复性好，可以满足标准中的检测要求。 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津一体机 Prominence-i LC-2030 液相色谱仪(配RF-20A荧光检测器) 1.2分析条件 色谱柱： Symmetry C18(150 mm x 4.6 mml.D.， 5 um) 流动相：A：乙酸钠溶液(0.05mol/L)；；B：甲醇 流速： 1mL/min 柱温：30℃ 检测波长：激发波长462nm，发射波长522nm； 进样体积：20uL 洗脱方式：等度洗脱， A： B=65：35 (v/v) 样品前处理 取样品约500g，用组织捣碎机充分打匀均质，分装入洁净棕色磨口瓶中，密封避光存放备用。 称取10.00 g均质后的试样于100 mL具塞锥形瓶中，加入60 mL 0.1mol/ L盐酸溶液，充分摇匀，塞好瓶塞。将锥形瓶放入高压灭菌锅内，121℃下保持 30min，冷却至室温后取出。用1 mol/L氢氧化钠溶液调pH至6.0-6.5，加入2mL混合酶溶液，摇匀后置于37℃培养箱中过夜酶解。将酶解液转移至100mL 容量瓶中加水定容至刻度，离心，取清液，过 0.45 um 水相滤膜作为待测液。 结果与讨论 3.1标准品溶液色谱图和线性范围 精密量取维生素B，标准品适量，用甲醇稀释成浓度为 0.02、0.05、0.1、0.2、0.5 ug/mL 五个浓度的标准溶液，按1.2中的分析条件进行测定，维生素B，标准品溶液色谱图如图1所示。 图1标准品溶液色谱图 (0.1ug/mL) 以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，采用外标法建立标准曲线，结果如图2所示。所得曲线线性关系良好，线性方程、线性范围、相关系数和检出限(检出限、定量限根据最低浓度点计算得出)见表1。 图2维生素B，标准品校准曲线 表1 校准曲线参数 中文名称 标准曲线 相关系数r 线性范围 (ug/mL) 检出限(ng/m) 定量限(ng/mL) 维生素B， Y=2.697e+006X+5233.07 0.9998 0.02-0.5 0.07 0.22 3.2精密度实验 按照1.2分析条件测定，选择浓度为 0.4 ug/mL的猪肝基质加标样品连续进样测定6次，重复性色谱图如图3所示。维生素B，的保留时间 RSD% 为 0.054%；峰面积 RSD% 为 0.339%，结果见表2。精密度实验结果表明， Prominence-i LC-2030高效液相色谱仪具有良好的精密度。 图3基质标准溶液6针重复性色谱图(浓度0.5ug/mL) 表2 维生素B，保留时间和峰面积重复性结果(n=6) 名称 RSD%(0.4ug/mL) R.T. Area 维生素B， 0.054 0.339 3.3回收率试验 称取空白猪肝样品，加入一定量维生素B，标准品，使加标浓度为0.050.10mg/100g，按照2.中所述前处理方式处理加标样品，每个加标浓度分别进行三个平行实验，然后按1.2中条件进行测试。空白猪肝样品色谱图见图4，空白基质中检出维生素B2，浓度为 0.324 mg/100g。加标样品的回收色谱图见图5，根据标准添加法计算平均回收率，两个添加水平的平均回收率分别为84.0%、83.0%，满足该标准中规定，结果详见表3。 图4空白样品色谱图 图5 加标样品色谱图(加标量0.10mg/100g) 表3 加标回收率((n=3) 名称 加标水平 实际检测样品浓度(扣除基质响应) (mg/100g) 平均回收率% RSD% (mg/100g) 平行1 平行2 平行3 维生素B， 0.05 0.042 0.041 0.043 84.0 1.9 0.10 0.087 0.080 0.082 83.0 3.5 结论 本文采用岛津 Prominence-i LC-2030高效液相色谱系统，参考《GB5009.84-2016》中规定的检测方法，建立了一种测定食品中维生素Bz含量的方法。该方法检测灵敏度高，重复性好，维生素B，在 0.02-0.5 ug/mL浓度范围内具有较好的线性关系，线性相关系数r>0.9998。加标回收实验回收率在 80.0-87.1%之间，连续6次进样保留时间 RSD% 为 0.054%、峰面积 RSD% 为 0.339%，系统精密度良好。实验表明，该方法完全满足标准中的各项规定，可用于食品中维生素B，的检测。 岛津应用云 采用岛津Prominence-i LC-2030高效液相色谱系统，参考《GB5009.84-2016》中规定的检测方法，建立了一种测定食品中维生素B2含量的方法。该方法检测灵敏度高，重复性好，维生素B2在0.02-0.5 µg/mL浓度范围内具有较好的线性关系，线性相关系数r＞0.9998。加标回收实验回收率在80.0-87.1%之间，连续6次进样保留时间RSD%为0.054%、峰面积RSD%为0.339%，系统精密度良好。实验表明，该方法完全满足标准中的各项规定，可用于食品中维生素B2的检测。