番茄样品中维生素B1检测方案(液相色谱仪)

SSL-CA20-184Excellence in Science Excellence in ScienceLC-211 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn 高效液相色谱法测定食品中维生素B， LC-211 摘要：本文建立了高效液相色谱法测定食品中维生素B维的方法。样品参照国标《GB 5009.84-2016》中的前处理方式，分别进行提取、衍生化，然后进行上机分析。维生素B1 在 0.03-1.5 ug/mL浓度范围内具有较好的线性关系，线性相关系数r> 0.9990， 仪器定量限为 0.619 ng/mL。加标回收实验回收率在86.5-88.0%之间，连续6次进样保留时间 RSD% 为 0.186%、峰面积 RSD%为1.296%，系统精密度良好，满足标准要求。 关键词：高效液相色谱法 维生素B11番茄 《GB 5009.84-2016食品中维生素B的测定》标准中规定了高效液相色谱法测定食品中维生素 B方法。本实验参照标准中的实验条件，使用岛津LC-20A 高效液相色谱仪对番茄中维生素B，进行测定，结果表明，该方法检测灵敏度高，重复性好，可以满足标准中的检测要求。 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津 Prominence LC-20A 高效液相色谱仪，包括CBM-20A系统控制器， LC-20AT输送泵，SIL-20A 自动进样器， CTO-20AC 柱温箱，RF-20A 荧光检测器， LabSolutions 色谱工作站。 1.2分析条件 色谱柱： Tnature C18 (250 mmx4.6 mm l.D.， 5 um) 流动相： A：0.05 mol/L乙酸钠溶液； B： 甲醇 流速：0.8 mL/min 柱温：40℃ 检测波长：激发波长375nm， 发射波长435 nm 进样体积：20uL 洗脱方式：等度洗脱， A：B=65： 35 1.3标准品与试剂 标准品：购于上海安谱，，于-20℃冰箱保存，备用。 试剂：均为分析纯以上。 甲醇：色谱级，室温保存。 实验用水：由 Milli-Q Plus 水净化系统经去离子水二次净化制得。 样品前处理 试样制备：新鲜蔬菜(番茄)：取500g左右，用匀浆机将样品均质后，制得均匀性一致的匀浆，立即处理或者于冰箱中冷冻保存。 提取：称取5g(精确至0.01g)样品于100 mL锥形瓶中，加60 mL 0.1 mol/L盐酸溶液，充分摇匀，塞上软质塞子，高压灭菌锅中121℃保持30 min。水解结束待冷却至40℃以下取出，轻摇数次；用pH计指示，用2.0mol/L乙酸钠溶液调节 pH至4.0左右，加入2.0mL混合酶溶液，摇匀后，置于培养箱中37℃过夜；将酶解液全部转移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，离心，取上清液备用。 试液衍生化：准确移取上述上清液2.0 mL 于 10mL试管中，加入1.0mL碱性铁氰化钾溶液，涡旋混匀后，准确加入2.0mL正丁醇，再次涡旋混匀 1.5 min 后静置约 10 min， 待充分分层后，吸取正丁醇相(上层)经0.45um 有机微孔滤膜过滤，取滤液于2 mL棕色进样瓶中，供分析用。另取2.0mL标准系列工作液，与试液同步进行衍生化。 注1：室温条件下衍生产物在4h 内稳定。 注2：操作过程应在避免强光照射的环境下进行。 结果与讨论 3.1标准品溶液色谱图和线性范围 精密量取维生素B标准品适量，用甲醇稀释成浓度为 0.03、0.15、0.3、0.8、1.5 ug/mL五个浓度的标准溶液，按1.2中的分析条件进行测定，维生素B1标准品溶液色谱图如图1所示。 图1标准品溶液色谱图(0.3 ug/mL) 以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，采用外标法建立标准曲线，结果如图2所示。所得曲线线性关系良好，线性方程、线性范围、相关系数和检出限见表1，检出限、定量限根据最低浓度点计算得出。 图2维生素B标准品校准曲线 表1L校准曲线参数 中文名称 标准曲线 相关系数r 线性范围 (ug/mL) 检出限(ng/mL) 定量限(ng/mL) 维生素B Y=4.88209e+006X-485.487 0.9990 0.03-.1.5 0.186 0.819 3.2精密度实验 按照1.2分析条件测定，选择浓度为5.0 ug/mL的标准品溶液连续进样测定6次，重复性色谱图如图3所示。烟酸、烟酰胺的保留时间 RSD%分别为 0.04%、0.02%；峰面积 RSD%为 0.13%0.07%，结果见表2。精密度实验结果表明，Nexera LC-40 高效液相色谱仪具有良好的精密度。 图3 标准品溶液6针重复性色谱图(浓度0.18 ug/mL) 表2 维生素B保留时间和峰面积重复性结果(n=6) 名称 RSD% ((0.180 ug/mL) R.T. Area 维生素B 0.186 1.296 3.3回收率试验 称取空白番茄样品，加入一定量维生素B_标准品，使加标浓度分别为 0.2、0.4 mg/100 g， 每个浓度分别进行三个平行实验，按照2中所述前处理方式处理加标样品，然后按1.2中条件进行测试，计算平均回收率。空白番茄样品色谱图见图4，空白基质中检出维生素B(响应远低于定量限)。0.2 mg/100g加标样品的回收色谱图见图5，各添加水平的平均回收率在86.5.3-88.0%之间，结果详见表3。 图4 空白样品色谱图 图55加标样品色谱图(加标量0.2mg/100g) 表3 加标回收率(n=3) 名称 加标水平 (mg/100g) 实际检测样品浓度(mg/100g) 平行1 平行2 平行3 平均回收率% RSD% 维生素B 0.2 0.176 0.177 0.174 87.7 0.53 0.4 0.348 0.348 0346 86.8 0.54 结论 本文采用岛津 LC-20A 高效液相色谱系统，参考《GB 5009.84-2016食品中维生素B的测定》中规定的检测方法，建立了一种测定番茄中的维生素B方法。该方法检测灵敏度高，重复性好，系统精密度良好。实验表明，该方法满足标准中的各项规定，可用于食品中维生素B， 的检测。 岛津应用云 维生素B1（Vitamin B1）又称硫胺素，是一种水溶性维生素，与人体内糖、蛋白质和脂肪代谢紧密相关，能促进食欲，维持神经、消化及循环系统的正常功能，是人体必须的营养成分。《GB 5009.84-2016食品中维生素B1的测定》标准中规定了高效液相色谱法测定食品中维生素B1方法。本实验参照标准中的实验条件，使用岛津LC-20A高效液相色谱仪对番茄中维生素B1进行测定，结果表明，该方法检测灵敏度高，重复性好，可以满足标准中的检测要求。