人血浆中瑞德西韦及代谢产物检测方案(液质联用仪)

Application No.C218Newshttp：//www.shimadzu.com.cn用户服务热线电话： 800-810-0439第一版发行行：2020年6月400-650-0439 Application：News LC-MS 人血浆中瑞德西韦及代谢产物的同时分析 |前言 瑞德西韦(商品名称： Veklury) 是Gilead Sciences 公司(U.S.)开发的一种治疗埃博拉出血热的前体药物，该药物对单链RNA病毒具有抗病毒活性，部分药物会在体办代谢为活性型的 GS-441524"。在本文中，本公司建立了使用具有出色的可选择性的分析方法 LC/MS/MS(图1)，对瑞德西韦及其代谢产物进行同时检测的分析系统，在本文中介绍相关研究成果。 E. lmoto， D. Kawakami 图1LCMS-8060 的外观图 |分析条件及样品的预处理 检测目标化合物瑞德西韦(PN： C8799*)、GS-441524(PN： C8847*)及其稳定同位素[U-Ring-13C6]-瑞德西韦(PN： C8845*)、[5C5]-GS-441524 (PN： C8855*)均从岛津制作所的集团下属企业 Alsachim 公司购买，[U-Ring-6C6]-瑞德西韦、[5C5]-GS-441524 作为内标物质使用。瑞德西韦、GS-441524的结构式如图2所示。在市售的经过 EDTA 2K处理的人血浆中添加瑞德西韦和 GS-441524，配制了标准曲线。使用表1所示的 LC 及MS的分析条件、表2所示的 MRM 参数进行了检测。分析柱使用了 Shim-pack Scepter C18-120 (50mm×2.1 mm l.D.， 1.9 um、P/N： 227-31012-03)。MS色谱图如图3所示。 瑞德西韦将100，500，1000，2500， 5000 ng/mL 作为校准点， GS-441524 将5，25，50， 250， 500 ng/mL 作为校准点，每个校准点重复测定5次。使用甲醇制备[U-Ring-c。]-瑞德西韦(2.5 ug/mL)、[C，]-GS-441524 (0.25 ug/mL) 的混合溶液，作为 ISTD 使用。 预处理方法的流程如下所示。添加75%IPA 20 uL、血浆50 uL、ISTD 10 uL、乙腈100 uL，进行充分搅拌后，将离心分离得到的上清液移至 LC试剂瓶中，进行检测。 *岛津GLC 及 Alsachim 产品编号 图2瑞德西韦及 GS-441524的结构式 UHPLC NexeraX2 LC-MS/MS 系统 LCMS-8060 Shim-pack Scepter C18-120 分析柱 (50 mm×2.1 mml.D.， 1.9 接口 加热 ESI um) A： 0.05%甲酸-水 流动相 B： 0.05%甲酸-乙腈 5%(0-0.30 min) MS检测模式 MRM(+) 梯度程序 (%B) 30%(0.35 min) 70%(1.50min) 90%(1.80-2.80 min)→ 5%(2.90-4.50 min) 加热块温度 400℃ 流速 0.4mL/min DL 温度 200℃ 柱温箱 温度 40°℃ 接口温度 300℃ 进样量 2.0pL(同时注入水20 pL) 雾化器气体流量： 3L/min 清洗溶液 干燥气体流量 10L/min (仅外部 MeOH： IPA=1：1(v/v) 清洗) 加热气体流量 10 L/min 表2瑞德西韦及 GS-441524 的 MRM 化合物名称 离子 前体离子(m/z) 产物离子(m/z) 瑞德西韦 定量离子 603.05 272.10 定性离子 603.05 229.00 [c]-德德西韦 定量离子 609.05 278.20 定性离子 609.05 229.15 GS-441524 定量离子 291.90 163.05 定性离子 291.90 173.05 [C，]-GS-441524 定量离子 296.90 164.10 定性离子 296.90 174.10 图3瑞德西韦、[U-Ring-13C6]-瑞德西韦(左) 及 GS-441524、[C，]-GS-441524(右)的MS色谱图 标准曲线的绘制 通过添加血浆的样品绘制标准曲线的结果如表3所示。瑞德西韦及 GS-441524 在配置的浓度范围内得到了良好的线性。通过评估准确度(准确性)及精度(重复性)发现，在含定量下限的全浓度范围中，瑞德西韦的精度为%RSD 0.8%-1.8%， GS-441524的精度为 %RSD 2.2%-5.0%。另外，瑞德西韦的准确性为92.0%-107%、GS-441524的准确性为 94.8%-106%，均在100±15%以内。 表3使用 LC/MS/MS分析血浆中瑞德西韦、GS-441524时的线性、准确度及精度 化合物 瑞德西韦 GS-441524 ID 加标浓度(ng/mL) 测定浓度(ng/mL) 精密度%RSD 准确度% 加标浓度(ng/mL) 测定浓度(ng/mL) 精密度%RSD 准确度% 空白样品 --- --- 1级 100 92.0 1.2 92 5 4.74 3.8 95 2级 500 535 0.8 107 25 26.6 2.8 106 3级 1000 1036 0.9 104 50 50.7 5.0 101 4级 2500 2433 1.8 97 125 121 2.2 97 5级 5000 5004 1.8 100 250 252 2.3 101 校准曲线 面积比 !Remdesivir_Pos：1y=4.021322x+0.01906747R²=0.9991526R=0.9995762 ，曲线拟合：默认(线性)加权：默认值(1/C)1零：默认(非强制) 611平均RF：4.150981e+000SD RF： 1.781905e-00151%RSD：4.292733 41 23 R2=0.999211 0.0 0.2 0 0.81.01241 2.0浓度比(ng/mL) 分析系统的稳定性试验 为了评估本次建立的分析系统的稳定性及重现性，使用在人血浆中添加瑞德西韦1000 ng/mL 及 GS-441524 50 ng/mL的样品，分成两天检测了100次。每次进样得到的面积值用第一次进样得到的面积值归一化和统计的结果如图4所示。在人血浆的检测中，各化合物的%RSD为2.2%-3.9%，得到了良好的进样重性性。上述结果表明，本分析系统可以长时间维持高灵敏度分析，具有良好的稳定性。 图4瑞德西韦、[U-Ring-c。]-瑞德西韦、GS-441524、[C，]-GS-441524 的100次检测结果用第一次进样得到的面积值归一化，统计各进样结果 总结 <参考文献> 岛津应用云 1) RichardT等， “Remdesivir：回顾紧急使用授权治疗新冠病毒的发现和开发”， ACS Cent.Sci. 建立了血浆中瑞德西韦及其代谢产物 GS-441524检测的LC-MS/MS 的分析系统。绘准标准曲线后发现，可以得到良好的线性。另外，为评估分析系统的稳定性而进行100次检测，结果显示可长时间维持高灵敏度的分析，具有良好的稳定性。 岛津企业管理(中国)有限公司岛津(香港)有限公司 ( *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； ) ( *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。 ) ( 如有变动，恕不另行通知。 ) 瑞德西韦（商品名称：Veklury）是Gilead Sciences 公司（U.S.）开发的一种治疗埃博拉出血热的前体药物，该药物对单链RNA病毒具有抗病毒活性，部分药物会在体办代谢为活性型的GS-441524。在本文中，本公司建立了使用具有出色的可选择性的分析方法LC/MS/MS，对瑞德西韦及其代谢产物进行同时检测的分析系统，在本文中介绍相关研究成果。