血液中46种农药类毒物检测方案(气质联用仪)

SSL-CA20-047Excellence in Science Excellence in ScienceGCMSMS-191 岛津应用云岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.- Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel： 86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn ATLAS-LEXT结合 GCMSMS 法测定血液中46种农药类毒物 GCMSMS-191 摘要：本文采用 ATLAS-LEXT 自动样品前处理装置结合岛津三重四极杆气质联用仪建立了快速测定血液中农药类毒物的方法。采用经 ATLAS-LEXT 处理过的空白血液基质配制标准曲线，标准曲线在10~300 ng/mL 浓度范围内，各化合物标准曲线线性良好，相关系数均大于0.995，检出限在0.007~1.037 ng/mL之间。20和50 ng/mL标准品连续进样6次，峰面积相对标准偏差 (RSD%)均小于6.57%，重复性良好。空白血液样品在80、320和 640 ng/mL加标水平下，各组分平均回收率基本均在50~140%之间，且平行两次重复性均在10%以内。本方法操作简便，可以为血液中农药类毒物的检测提供一个的快速准确的检测方法。 关键词：气相色谱三重四极杆质谱联用仪/ATLAS-LEXT 血液 毒物 毒物分析是刑事案件分析中经常接触的一个项目。常规分析方法是采用液液萃取或者乙腈沉淀蛋白等前处理之后，用单四极杆气质联用仪进行分析。采用单四极分析时需要逐个对色谱峰进行检索分析，而由于基质的复杂性， 经常一个样品出峰很多很复杂，内源性代谢物甚至可能和待测毒物共流出，增大了毒物分析的难度和检测结果假阴性的概率。 乙腈沉淀蛋白法操作简单，但是沉淀蛋白过程中会导致部分毒物回收率很低。而且提取样品中引入了大量血液中的水份，不利于气质分析，通常需要溶剂转换才能上机。液-液萃取法采用乙酸乙酯作为萃取溶剂，回收率较乙腈沉淀蛋白较好，且由于其与水互溶性较乙腈差很多，其提取样品中水含量 实验部分 1.1仪器 自动前处理装置： ATLAS-LEXT 三重四极杆气质联用仪：GCMS-TQ8040 NX 1.2分析条件 色谱柱： SH-Rxi-5 Sil MS，(30m×0.25mm×0.25um)进样口温度：280℃柱温程序：40℃(4 min)_25℃/min_125℃_10℃/min_300C (1 min)载气控制方式：恒流(1mL/min) 低，；，可以直接上机进行测试。但是，传统的液-液萃取法存在耗时长、溶剂用量大、对人体和环境危害大等特点。 岛津公司针对公安行业毒物分析的特点，推出了ATLAS-LEXT自动样品前处理装置。该装置针对尿液、血液等样品中的毒物可自动进行液-液萃取等过程完成样品制备，样品经萃取后，可以进行液质联用分析或气质联用分析，自动化程度高，大大节省人力。 本文利用 ATLAS-LEXT结合GCMS-TQ8040 NX和 Smart Database 数据库建立了血液中46种毒物的快速检测方法，该方法操作简单，实用性强，可以为血液中毒物筛查提供一定的参考。 进样方式：不分流进样(1min) 高压进样：250 kPa (1 min) 离子源温度：230℃ 接口温度：300℃ 检测器电压：调谐电压+0.6 kV 采集方式：MRM，离子信息见表1 1.3样品前处理 采用 ATLAS-LEXT 前处理装置自动处理样品。处理过程如图所示：向 ATLAS-LEXT样品管中加入0.5mL经3倍纯水稀释(1：3/V：V)的全血样品，加入2.0 mL (V：V/1：1)乙酸乙酯提取溶液，取上清液1.0mL，上机分析。 结果与讨论 2.1标准色谱图 标准溶液色谱图如图1所示，化合物相关信息见表1，部分化合物质量色谱图见图2 (x1，000，000) 图146种毒物血液基质加标溶液色谱图((100ng/mL) 表146种毒物 MRM 参数 No. 化合物名 英文名 CAS号 保留时间 (min) 定量离子 CE 电压 定量离子 CE 电压 1 涕灭威分解物 Aldicarb deg. 6.403 209.1>132.1 18 133.1>117.1 24 2 沙蚕毒素 Nereistoxin 10.135 164.1>98.0 12 111.1>82.0 8 3 速灭威 Metolcarb 1129-41-5 11.976 366.9>212.9 30 368.9>214.9 30 4 异丙威 Isoprocarb 2631-40-5 12.795 239.0>143.0 12 239.0>178.0 4 5 仲丁威 Fenobucarb 3766-81-2 13.558 212.1>122.1 12 212.1>94.0 22 6 残杀威 Propoxur 114-26-1 13.575 248.1>157.1 26 159.1>123.1 22 7 灭线磷 Ethoprophos 13194-48-4 13.607 352.8>262.9 14 354.8>264.9 20 8 治螟磷 Sulfotep 3689-24-5 13.882 185.0>149.0 6 185.0>121.0 12 9 久效磷 Monocrotophos 6923-22-4 14.273 330.9>258.9 6 258.9>188.0 14 10 硫线磷 Cadusafos 95465-99-9 14.321 238.0>137.1 14 181.1>138.1 10 11 甲拌磷 Phorate 298-02-2 14.430 213.1>121. 1 14 213.1>185.1 6 12 乐果 Dimethoate 60-51-5 14.519 262.0>91.0 16 262.0>227.0 10 13 克百威 Carbofuran 1563-66-2 14.853 294.9>109.0 16 296.9>109.0 16 14 地虫硫磷 Fonofos 944-22-9 14.864 123.1>81.1 10 136.1>93.1 14 15 磷胺-1 Phosphamidon-1 13171-21-6 14.879 323.0>267.0 16 267.0>159.0 18 16 氯唑磷 Isazofos 42509-80-8 14.967 238.1>165.0 12 165.0>102.0 24 17 抗蚜威 Pirimicarb 23103-98-2 15.479 352.8>253.0 26 354.8>253.0 18 18 磷胺-2 Phosphamidon-2 13171-21-6 15.516 329.0>131.1 18 329.0>159.1 4 19 甲基毒死蜱 Chlorpyrifos-methyl 5598-13-0 15.746 123.1>81.1 10 136.1>93.1 14 20 甲基对硫磷 Parathion-methyl 298-00-0 15.998 277.1>221.1 14 221.1>155.0 14 21 甲基立枯磷 Tolclofos-methyl 57018-04-9 16.277 201.1>174.1 16 174.1>130.1 10 22 甲基嘧啶磷 Pirimiphos-methyl 29232-93-7 16.471 149.1>79.1 14 149.1>105.1 4 23 杀螟硫磷 Fenitrothion 122-14-5 16.583 119.1>91.1 10 145.1>112.1 8 24 毒死蜱 Chlorpyrifos 2921-88-2 16.614 283.0>96.0 10 285.0>96.0 10 25 噻唑膦-1 Fosthiazate-1 98886-44-3 17.022 168.1>70.0 10 128.1>65.0 22 26 噻唑磷-2 Fosthiazate-2 98886-44-3 17.077 187.0>159.0 16 187.0>123.0 24 27 硫环磷 Phosfolan 947-02-4 17.265 206.1>179.1 14 278.1>73.0 6 28 喹硫磷 Quinalphos 13593-03-8 17.391 259.9>130.0 14 261.9>130.0 18 29 杀扑磷 Methidathion 950-37-8 17.397 111.1>55.0 18 111.1>83.0 12 30 苯硫威 Fenothiocarb 62850-32-2 17.842 239.1>107.0 16 254.1>137.1 6 31 苯线磷 Fenamiphos 22224-92-6 17.889 168.1>70.0 10 128.1>65.0 22 32 稻瘟灵 lsoprothiolane 50512-35-1 18.227 358.9>302.9 16 302.9>284.9 18 33 乙硫磷 Ethion 563-12-2 18.355 374.8>265.9 26 372.8>263.9 28 34 三唑磷 Triazophos 24017-47-8 18.629 125.0>89.0 16 125.0>99.0 18 35 禾草灵 Diclofop-methyl 51338-27-3 18.746 277.1>221.1 14 221.1>155.0 14 36 莎稗磷 Anilofos 64249-01-0 18.823 220.1>140.1 12 220.1>125.1 24 37 伏杀硫磷 Phosalone 2310-17-0 19.029 234.0>206.0 8 206.0>148.0 16 38 甲基谷硫磷 Azinphos-methyl 86-50-0 19.180 246.0>176.0 30 248.0>176.0 28 39 蝇毒磷 Coumaphos 56-72-4 19.773 262.0>91.0 16 262.0>227.0 10 40 精喹禾灵 Quizalofop-ethyl (Quizalofop-P-ethyl) 76578-14-8 20.118 328.9>109.0 20 330.9>109.0 22 41 内吸磷-1 demeton(O&S) 图2部分化合物MC图 2.2标准曲线 以空白血液基质提取液配制46种毒物不同浓度的标准溶液，浓度分别为10、20、50、100、200和500ng/mL， 经 GCMS-TQ8040 NX分析。以目标化合物浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，线性方程及相关系数如表2所示，部分化合物校准曲线图如图3所示。 2.3检测限及重复性 分别取浓度为20和50 ng/mL的混合标准溶液，连续进样6次，考察仪器重复性，各组分峰面积RSD%见表2。以10 ng/mL 的混合标准溶液结果计算检测限(S/N=3)，检测限结果见表2。 表2各化合物校准曲线方程、相关系数、重复性结果及检测限 36 苯线磷 0.9997 2.96 3.35 0.101 37 稻瘟灵 0.9997 4.79 1.43 0.009 38 吡氟禾草灵 0.9998 3.84 1.27 0.017 39 乙硫磷 0.9994 1.88 1.98 0.475 40 三唑磷 0.9998 3.59 1.41 0.933 41 禾草灵 0.9998 2.13 2.46 0.081 42 苯线磷亚砜 0.9980 5.09 2.46 0.051 43 苯胺磷砜 (苯线磷砜) 0.9997 1.60 0.55 0.007 44 莎稗磷 0.9993 1.21 0.98 0.028 45 伏杀硫磷 0.9995 1.01 1.21 0.008 46 甲基谷硫磷 0.9992 3.87 2.52 0.459 47 蝇毒磷 0.9995 2.25 1.89 0.128 48 精喹禾灵 0.9998 2.38 1.18 0.024 表注：噻唑磷为采用组校准模式进行定量。 2.4回收率 按照1.3样品前处理过程进行空白血加标测试，加标浓度为80、320和640 ng/mL， 以上述前处理方法进行处理，平行2次，每个样品采集3次，回收率结果见表3。 表33加标回收率 No. 化合物名称 80ng/mL 320 ng/mL 640 ng/mL 回收率% RSD% 回收率% RSD% 回收率% RSD% 1 涕灭威分解物 120.5 3.39 81.3 2.51 110.1 8.2 2 沙蚕毒素 31.3 22.16 7.7 4.41 14.1 2.77 3 速灭威 136.5 5.37 88.6 1.93 126.5 7.45 4 异丙威 127.0 2.36 89.3 2.00 127.6 7.45 5 仲丁威 131.8 3.26 89.3 2.08 123.5 7.44 6 残杀威 131.5 2.96 87.5 2.39 123.6 7.66 7 内吸磷-1 108.7 4.21 70.4 4.13 87.6 9.17 8 灭线磷 135.5 3.42 89.6 1.57 126.9 7.41 9 治螟磷 89.1 5.84 59.9 5.19 75.8 7.86 10 久效磷 42.9 3.36 27.0 3.21 38.3 7.82 11 硫线磷 127.5 4.37 83.1 2.5 114.7 7.7 12 甲拌磷 111.3 6.84 67.7 3.63 87.5 6.38 13 内吸磷-2 161.9 6.10 104.0 1.92 146.4 6.59 14 乐果 120.7 2.87 81.1 2.30 112.3 7.17 15 阿特拉通 135.2 4.39 90.1 2.88 125.2 8.49 16 克百威 133.2 2.24 86.0 1.57 118.5 8.43 17 地虫硫磷 107.2 5.52 67.3 3.46 92.4 6.76 18 磷胺-1 96.1 5.34 66.8 5.04 94.3 8.5 19 氯唑磷 124.1 5.31 86.1 4.27 113.4 7.87 20 抗蚜威 142.5 4.58 87.7 1.67 123.7 7.52 21 磷胺-2 111.1 4.70 72.2 3.02 103.9 8.42 22 甲基毒死蜱 105.9 5.14 67.4 4.1 84.5 7.18 23 甲基对硫磷 135.0 4.80 78.9 3.88 106.9 8.25 24 甲基立枯磷 89.4 6.11 58.4 5.57 77.0 7.09 25 甲基嘧啶磷 88.6 7.07 60.5 5.4 75.0 6.53 26 杀螟硫磷 137.1 3.16 69.6 3.64 91.5 7.96 27 甲拌磷亚砜 133.5 5.20 82.4 4.14 127.0 8.06 28 甲拌磷砜 136.5 3.00 87.2 2.2 122.1 7.62 29 毒死蜱 56.4 7.62 35.5 6.88 49.9 6.14 30 噻唑膦 102.1 4.52 79.0 4.57 108.0 5.32 31 硫环磷 106.8 6.55 69.1 4.82 96.3 7.52 32 喹硫磷 111.3 5.75 72.4 4.35 93.7 7.27 33 杀扑磷 134.0 2.97 88.8 1.89 120.4 7.63 34 蚜灭磷 50.8 7.03 38.7 6.58 52.4 10.95 35 苯硫威 123.0 4.56 83.9 2.79 112.0 6.95 36 苯线磷 134.8 2.37 89.6 1.8 122.6 7.77 37 稻瘟灵 126.8 5.47 85.6 1.89 117.5 7.28 38 吡氟禾草灵 40.6 4.54 25.1 10.47 27.4 10.77 39 乙硫磷 59.1 3.69 26.9 8.39 39.1 6.22 40 三唑磷 116.2 7.04 73.7 3.09 99.4 10.72 41 禾草灵 51.3 6.85 35.2 10.27 48.5 7.4 42 苯线磷亚砜 126.8 5.36 59.2 3.47 96.5 8.58 43 苯胺磷砜 (苯线磷砜) 141.1 4.82 89.8 3.89 127.7 7.85 44 莎稗磷 109.6 6.60 69.5 5.45 91.6 7.49 45 伏杀硫磷 83.4 5.35 46.5 7.38 58.8 6.25 46 甲基谷硫磷 125.2 5.30 80.6 1.01 117.2 9.15 47 蝇毒磷 84.9 6.26 52.8 5.52 71.2 6.33 48 精喹禾灵 68.0 6.27 42.5 7.1 47.1 9.01 表注：噻唑磷为采用组校准模式进行定量。 结论 本文利用 ATLAS-LEXT 结合 GCMS-TQ8040 NX三重四极杆气质联用仪建立了血液中46种农药类毒物快速测定的方法。在10~300 ng/mL浓度范围内，各化合物标准曲线线性良好，相关系数均大于0.995，检出限在0.007~1.037 ng/mL之间。20和50ng/mL标准品连续进样6次，峰面积相对标准偏差(RSD%)均小于6.57%，重复性良好。在80、320和640 ng/mL加标水平下，各组分平均回收率基本在50~140%之间。本方法操作简便，使用ATLAS-LEXT 前处理装置可以大大节省前处理时间， GCMSMS 则可以有效的去除血液复杂基质的干扰， 两者的联合使用可以为血液中农药类毒物的测定提供一种快速准确的方法。 本文采用ATLAS-LEXT自动样品前处理装置结合岛津三重四极杆气质联用仪建立了快速测定血液中农药类毒物的方法。采用经ATLAS-LEXT处理过的空白血清基质配制标准曲线，标准曲线在10~300 ng/mL浓度范围内，各化合物标准曲线线性良好，相关系数均大于0.995，检出限在0.007~1.037 ng/mL之间。 20和50 ng/mL标准品连续进样6次，峰面积相对标准偏差（RSD%）均小于6.57%，重复性良好。空白血液样品在80、320和640 ng/mL加标水平下，各组分平均回收率基本均在50~140%之间，且平行两次重复性均在10%以内。本方法操作简便，可以为血液中农药类毒物的检测提供一个的快速准确的检测方法。