蜂蜜中各成分含量检测方案

中国药典2020年版蜂蜡 酸不溶性灰分 不得过6.0%(通则2302)。 重金属及有害元素 照铅、镉、砷、汞、铜则定法(通则2321 原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质谱法)测定，铅不得过 8mg/kg。 氧化时间 取本品粉末约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加人乙醇 25ml，密塞，振摇1小时，再精密加人水100ml，习匀，滤过，精密量取续滤液0.5ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置具塞锥形瓶中，精密加入20%硫酸溶液 2ml，振摇1分钟，精密加密0.02mol/L高锰酸钾溶液0.05ml，同时，开动秒表计时，当溶液的紫红色完全消退时，停止秒表，记录的时间即为供试品的氧化时间。不得过22秒。 【浸出物】照醇溶性浸出物测定法(通则2201)项下的冷浸法测定，用乙醇作溶剂，不得少于50.0%。 【含量测定】 白杨素、高良姜素、咖啡酸苯乙酯 照高效液相色谱法(通则0512)测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；白杨素、高良姜素检测波长为270nm，咖啡酸苯乙酯检测波长为329nm；柱温为30℃。理论板数按咖啡酸苯乙酯峰计算应不低于3000。 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~65 53 47 65~70 100 0 70~82 53 47 对照品溶液的制备 取白杨素对照品、高良姜素对照品、咖啡酸苯乙酯对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1ml含白杨素、高良姜素各100pg，咖啡酸苯苯酯 40pg的溶液；分别精密量取上述对照品溶液溶 5ml，置同同50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含白杨素、高良姜素各10ug，含咖啡酸苯乙酯4ug)。 供试品溶液的制备 取本品粉末(过二号筛)约4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇100ml，密塞，冷浸6小时，并时时振摇，再静置18小时，滤过，精密量取续滤液2ml，置100ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含白杨素(Cis H1oO4)不得少于2.0%；高良姜素(Cs HoOs)不得少于1.0%；咖啡酸苯乙酯(C17H16O)不得少于0.50%。 乔松素 照高效液相色谱法(通则0512)测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为289nm；柱温为30℃。理论板数按乔松素峰计算应不低于3000。 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~55 34 66 55~~60 100 0 60~72 34 66 对照品溶液的制备取乔松素对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含10ug的溶液，即得。 供试品溶液的制备 取〔含量测定〕白杨素、高良姜素、咖啡酸苯乙酯项下的供试品溶液，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10pl，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含乔松素(Cis H120)不得少于1.0%。饮片 【炮制】酒制蜂胶 取蜂胶粉碎，用乙醇浸泡溶解，滤过，滤液回收乙醇，晾干。 【性味与归经】苦、辛，寒。归脾、胃经。 【功能与主治】补虚弱，化浊脂，止消渴；外用解毒消肿，收敛生肌。用于体虚早衰，高脂血症，消渴；外治皮肤皲裂，烧烫伤。 【用法与用量】0.2~0.6g。外用适量。多人丸散用，或加蜂蜜适量冲服。 【注意】 过敏体质者慎用。 【贮藏】 置一4℃贮存。 蜂 蜡 Fengla CERA FLAVA 本品为蜜蜂科昆虫中华蜜虫Apis cerana Fabricius 或意大利蜂 Apis mellifera Linnaeus 分泌的蜡。将蜂巢置水中加热，滤过，冷凝取蜡或再精制而成。 【性状】 本品为不规则团块，大小不一。呈黄色、淡黄棕色或黄白色，不透明或微透明，表面光滑。体较轻，蜡质，断面砂粒状，用手搓捏能软化。有蜂蜜样香气，味微甘。 【性味与归经】 甘，微温。归脾经。 【功能与主治】 解毒，敛疮，生肌，止痛。外用于溃疡不敛，臁疮糜烂，外伤破溃，烧烫伤。 【用法与用量】 外用适量，熔化敷患处；常作成药赋型剂及油膏基质。 【贮藏】 置阴凉处，防热。 蜂 蜜 MEL 本品为蜜蜂科昆虫中华蜜蜂 Apis cerana Fabricius 或意大 利蜂 Apis mellifera Linnaeus 所酿的蜜。春至秋季采收，滤过。 【性状】 本品为半透明、带光泽、浓稠的液体，白色至淡黄色或橘黄色至黄褐色，放久或遇冷渐有白色颗粒状结晶析出。气芳香，味极甜。 相对密度 本品如有结晶析出，可置于不超过60℃的水浴中，待结晶全部融化后，搅匀，冷至25℃，照相对密度测定法(通则0601)项下的韦氏比重秤法测定，相对密度应在1.349以上。 【检查】 水分 不得过24.0%(通则0622折光率测定法进行测定)。取本品(有结晶析出的样品置于不超过60℃的恒温水浴中温热使融化)1~2滴，滴于棱镜上(预先连接阿贝折光计与恒温水浴，并将水浴温度调至40℃±0.1℃至恒温，用新沸过的冷水校正折光计的折光指数为1.3305)测定，读取折光指数，按下式计算： 式中 X为样品中的水分含量，%； n 为样品在40℃时的折光指数。 酸度 取本品 10g，加新沸过的冷水50ml，混匀，加酚酞指示液2滴与氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)4ml，应显粉红色，10秒钟内不消失。 淀粉和糊精 取本品 2g，加水10ml，加热煮沸，放冷，加碘试液1滴，不得显蓝色、绿色或红褐色。 寡糖 取本品2g，置烧杯中，加人10ml水溶解后，缓缓加至活性炭固相萃取柱(在固相萃取空柱管底部塞人一个筛板，压紧，置固相萃取装置上。称取硅藻硅 0.2g，加水适量混匀，用吸管加至固相萃取柱管中，自然沉降形成3mm厚的硅藻土层，打开真空泵吸引，称取活性炭 0.5g加10ml水搅拌，混匀，用吸管加人，在真空泵的吸引下使活性炭沉降，当水面接近活性炭层面时，再次注入0.2g用水混匀的硅藻土，在真空泵的吸引下，以1秒/滴的速度用25ml的水预洗，当液面到达柱面上 2mm时关掉活塞，再压人上筛板，备用)中，打开活塞，在真空泵的吸引下，使溶液通过柱子，待液面下降到柱面以上2mm时，用7%乙醇25ml洗脱，弃去洗脱液。再用50%乙醇10ml洗脱，收集洗脱液，置65℃水浴中减压浓缩至至，残渣加30%乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取麦芽五糖对照品，加30%乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液与对照品溶液各3ul，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以正丙醇-水-三乙胺(60∶30∶0.7)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以苯胺-二苯胺-磷酸的混合溶液(取二苯胺1g，苯胺1ml，磷酸5ml，加丙酮至50ml，混匀)，加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照品相应位置的下方，应不得显斑点。 5-羟甲基糠醛 照高效液相色谱法(通则0512)测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%甲酸溶液(5：95)为流动相；5-羟甲基糠醛检测波长为284nm，鸟苷检测波长为 254nm。理论板 数按鸟苷峰计算应不低于 3000。 对照品溶液的制备 取鸟苷对照品适量，精密称定，加10%甲醇制成每1ml含鸟苷0.2mg的溶液，即得。另取5-羟甲基糠醛对照品适量，加10%甲醇制成每1ml 含 4ug的溶液，作为定位用。 供试品溶液的制备 取本品 lg，置烧杯中，精密称定，加10%甲醇适量溶解，并分次转移至50ml量瓶中，精密加人鸟苷对照品溶液1ml，力10%甲醇至刻度，摇匀，即得。 测定法 精密吸及供试品溶液 10ul，注入液相色谱仪，测定；另取鸟苷对照品溶液，5-羟甲基糠醛对照品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，用以确定供试品色谱中5-羟甲基糠醛及鸟苷的色谱峰；以鸟苷对照品计算含量并乘以校正因子0.340进行校正，即得。 本品含5-羟甲基糠醛，不得过0.004%。 蔗糖和麦芽糖 照〔含量测定〕项下方法测定，分别计算含量。本品含蔗糖和麦芽糖分别不得过5.0%。 【含量测定】 照高效液相色谱法(通则0512)测定。 色谱条件与系统适用性试验 以 Prevail Carbohyrate ES为色谱柱，以乙腈-水(75：25)为流动相；示差折光检测器检测。理论板数按果糖峰计算应不低于2000。 标准曲线的制备 分别精密称取果糖对照品1.0g，葡萄糖对照品 0.8g，置一一具塞锥形瓶中，精密加人40%乙腈20ml，溶解，摇匀，作为果糖、葡萄糖对照品储备液。另精密称取蔗糖对照品 0.2g，麦芽糖对照品0.2g，置同一具塞锥形瓶中，精密加人40%乙乙10ml，溶解，摇匀，作为蔗糖、麦芽糖对照品储备液。分别精密量取果糖、葡萄糖对照品储备液和蔗糖、麦芽糖对照品储备液，加40%乙腈配成不同浓度的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖混合对照品溶液。每一浓度溶液配制中，储备液的用量和稀释体积见下表。 精密吸取混合对照品溶液各15ul，注入液相色谱仪，分别测定。以对照品浓度为横坐标，以峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。 供试品溶液的制备 取本品约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加加40%乙腈 20ml，溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法 精密量取供试品溶液15ul，注入液相色谱仪，测定，按标准曲线法计算含量。 本品含果糖(CH12O；)和葡萄糖(CH12O；)的总量不得少于60.0%，果糖与葡萄糖含量比值不得小于1.0。 【性味与归经】 甘，平。归肺、脾、大肠经。 【功能与主治】 补中，润燥，止痛，解毒；外用生肌敛疮。用于脘腹虚痛，肺燥干咳，肠燥便秘，解乌头类药毒；外治疮疡不敛，水火烫伤。 【用法与用量】 15~30g。 【贮藏】 置阴凉处。 序号 果糖、葡萄糖 蔗糖、麦芽糖 稀释体积 混合对照品溶液浓度(mg/ml) 对照品储备液体积(ml) 对照品储备液体积(ml) (ml) 果糖 葡萄糖 蔗糖 麦芽糖 1 1.0 0.125 5 10 8 0.5 0.5 2 3.0 0.5 10 15 12 1.0 1.0 3 2.0 0.5 5 20 16 2.0 2.0 4 5.0 2.0 10 25 20 4.0 4.0 5 3.0 1.5 5 30 24 6.0 6.0 锦 灯笼 Jindenglong PHYSALIS CALYX SEU FRUCTUS 本品为茄科植物酸浆 Physalis alkekengi L. var. franchetii(Mast. )Makino 的干燥宿萼或带果实的宿萼。秋季果实成熟、宿萼呈红色或橙红色时时收，干燥。 【性状】 本品略呈灯笼状，多压扁，长3~4.5cm，宽2.5~4cm。表面橙红色或橙黄色，有5条明显的纵从，棱间有网状的细脉纹。顶端渐尖，微5裂，基部略平截，中心凹陷有果梗。体轻，质柔韧，中空，或内有棕红色或橙红色果实。果实球形，多压扁，直径1~1.5cm，果皮皱缩，内含种子多数。气微，宿萼味苦，果实味甘、微酸。 【鉴别】 (1)本品粉末橙红色。表皮毛众多。腺毛头部椭圆形，柄2~4细胞，长95~170um。非腺毛3~4细胞，长130~170um，胞腔内含橙红色颗粒状物。宿萼内表皮细胞垂周壁波状弯曲；宿萼外表皮细胞垂周壁平整，气孔不定式。薄壁组织中含多量橙红色颗粒。 (2)取本品粉末 0.5g，甲甲醇 5ml，超声处理10分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取酸浆苦味素L对照品，加二氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液15pl、对照品溶液2ul，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇(25：1：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 【检查】 水分 不得过10.0%(通则0832第二法)。 【含量测定】 照高效液相色谱法(通则0512)测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.2%磷酸溶液(20∶80)为流动相；检测波长为350nm。理论板数按木犀草苷峰计算应不低于3000。 对照品溶液的制备 取木犀草苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成成1ml含40pg的溶液，即得。 供试品溶液的制备 取本品粉末(过三号筛)约0.4g，精 密称定，置具塞锥形瓶中，精密加人70%甲醇20ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含木犀草苷(C21H20On)不得少于0.10%。 【性味与归经】 苦，寒。归肺经。 【功能与主治】 清热解毒，利咽化痰，利尿通淋。用于咽痛音哑，痰热咳嗽，小便不利，热淋涩痛；外治天疱疮，湿疹。 【用法与用量】 5~9g。外用适量，捣敷患处。 【贮藏】 置通风干燥处，防蛀。 矮 地 茶Aidicha ARDISIAE JAPONICAE HERBA 本品为紫金牛科植物紫金牛 Ardisia japonica(Thunb.)Blume 的干燥全草。夏、秋二季茎叶茂盛时采挖，除去泥沙，干燥。 【性状】 本品根茎呈圆柱形，疏生须根。茎略呈扁圆柱形，稍扭曲，长10~30cm，直径0.2~0.5cm；表面红棕色，有细纵纹、叶痕及节；质硬，易折断。叶互生，集生于茎梢；叶片略卷曲或破碎，完整者展平后呈椭圆形，长3~7cm，宽1.5~3cm；灰绿色、棕褐色或浅红棕色先端尖，基部楔形，边缘具细锯齿；近革质。茎顶偶有红色球形核果。气微，味微涩。 【鉴别】 (1)本品茎横切面：表皮细胞壁厚，有腺毛；老茎可见木栓层。皮层较宽，外侧为数列厚角细胞；有的含草酸钙方晶；具分泌腔。内皮层明显。韧皮部甚窄，外侧有少数纤维。形成层环不明显。木质部细胞均木化，导管多单行排列，髓部较大，具分泌腔。薄壁细胞含草酸钙方晶和淀粉粒，有的含棕色物。 本品叶表面观：表皮细胞垂周壁波状弯曲；气孔为不等式，偶见不定式。腺鳞头部8~10细胞，柄单细胞。 本品粉末棕褐色。螺纹导管较多见，直径7.5~25um · 中国药典2020版一部推荐用Prevail Carbohydrate ES（5μm，250 x 4.6mm）色谱柱进行蜂蜜含量测定。货号：5126533.s2546描述：Exsil Carbohydrate plus, 5µm规格：250x4.6mm