顺反异构体中分离纯化检测方案(制备液相色谱)

SepaFlash® C18反相纯化柱应用案例 ——顺反异构体的分离纯化 应用技术研究中心 在医药中间体的化学合成过程中，往往会同时合成出多种异构体，其中就包括顺反异构体。顺反异构体属于立体异构体中的一种，形成原因是由于双键相连的两个碳原子不能绕σ键作相对的自由旋转。构成顺反异构体的一对分子由于原子或原子团的连接顺序以及双键的位置相同，只是空间排列方式不同，因此其化学性质基本相同。但顺反异构体的物理性质有所不同，例如熔点、溶解度等，因此有些顺反异构体可以利用减压蒸馏和重结晶的方法进行分离，而有些顺反异构体则可以利用柱层析进行分离。 本文中，合成人员在合成过程中得到了一对顺反异构体，通过减压蒸馏和重结晶的纯化方法无法达到纯度要求，基于这种情况，纯化人员尝试利用快速制备液相色谱仪SepaBean® machine配合SepaFlash®系列反相纯化柱对样品进行分离纯化。 实验部分 1. 样品信息 本次实验样品的结构式如图1所示，其中，分离纯化实验的目标物为顺式异构体，杂质为反式异构体。 图1. 样品的结构式。其中A为反式异构体，B为顺式异构体。 2. 样品初步分析 利用HPLC对样品进行了初步的纯度分析（参见图2），结果表明样品纯度为79%，主要杂质为样品中的反式异构体成分。分析HPLC图谱可知，目标产物和杂质得到了基线分离，因此后续采用反相分离方法进行分离纯化。 图2. 样品的HPLC分析谱图。 3. 样品的Flash制备纯化 样品的Flash制备实验参数如表1所示，Flash制备纯化谱图如图3所示。 表1. 样品的Flash制备实验参数 仪器 SepaBean® machine 分离柱 330g SepaFlash® Bonded Series C18反相纯化柱 (球形硅胶, 20-45μm, 100Å, 订货号：SW-5222-330-SP) 检测波长 220 nm；254 nm 流动相 溶剂A：水； 溶剂B：甲醇 流速 40 ml/min 进样量 5 mL (1.4g) 洗脱梯度 时间 (min) 溶剂B (%) 0 60 35 90 80 90 图3. 样品的Flash制备纯化谱图。 4. 纯化产物的纯度分析 将制备所得样品经旋蒸干燥后，利用HPLC对其进行纯度分析（参见图4），结果表明其纯度为98.7%，符合目标产物的纯度标准。需要指出的是，在对纯化产物进行HPLC分析检测时，通过方法优化，缩短了分离时间，因此对比图2和图4可以发现，图4中杂质和目标产物的保留时间均有所缩短。 图4. 纯化产物的HPLC分析谱图。 结果与讨论 对于异构体的分离纯化，通常研究人员会采用手性分离柱或者高压制备柱配合高压制备液相色谱进行制备纯化，但是这类方法的成本问题十分令人头疼。本文中的应用案例表明，对于有些分离难度不大的异构体样品，中压制备分离也可以达到很好的分离纯化效果，无疑这将大大降低研究人员的制备成本，从而获得更好的效益。 三泰科技出品的SepaBean® machine配合SepaFlash®系列C18反相纯化柱，可以为用户提供快速高效的样品制备纯化解决方案，助力实验室研究人员轻松完成各类样品纯化任务。 如需进一步了解SepaBean® machine的详细规格信息，或配套使用的Flash纯化柱订购信息，请访问ChemBeanGo在线商店：https://store.chembeango.com/。 在医药中间体的化学合成过程中，往往会同时合成出多种异构体，其中就包括顺反异构体。顺反异构体属于立体异构体中的一种，形成原因是由于双键相连的两个碳原子不能绕σ键作相对的自由旋转。构成顺反异构体的一对分子由于原子或原子团的连接顺序以及双键的位置相同，只是空间排列方式不同，因此其化学性质基本相同。但顺反异构体的物理性质有所不同，例如熔点、溶解度等，因此有些顺反异构体可以利用减压蒸馏和重结晶的方法进行分离，而有些顺反异构体则可以利用柱层析进行分离。本文中，合成人员在合成过程中得到了一对顺反异构体，通过减压蒸馏和重结晶的纯化方法无法达到纯度要求，基于这种情况，纯化人员尝试利用快速制备液相色谱仪SepaBean® machine配合SepaFlash®系列反相纯化柱对样品进行分离纯化。实验部分1. 样品信息本次实验样品的结构式如图1所示，其中，分离纯化实验的目标物为顺式异构体，杂质为反式异构体。图1. 样品的结构式。其中A为反式异构体，B为顺式异构体。2. 样品初步分析利用HPLC对样品进行了初步的纯度分析（参见图2），结果表明样品纯度为79%，主要杂质为样品中的反式异构体成分。分析HPLC图谱可知，目标产物和杂质得到了基线分离，因此后续采用反相分离方法进行分离纯化。图2. 样品的HPLC分析谱图。3. 样品的Flash制备纯化    样品的Flash制备实验参数如表1所示，Flash制备纯化谱图如图3所示。表1. 样品的Flash制备实验参数仪器SepaBean machine分离柱330g SepaFlash Bonded Series C18反相纯化柱(球形硅胶, 20-45μm, 100Å, 订货号：SW-5222-330-SP)检测波长220 nm；254 nm流动相溶剂A：水；溶剂B：甲醇流速40 ml/min进样量5 mL (1.4g)洗脱梯度时间 (min)溶剂B (%)06035908090图3. 样品的Flash制备纯化谱图。4. 纯化产物的纯度分析将制备所得样品经旋蒸干燥后，利用HPLC对其进行纯度分析（参见图4），结果表明其纯度为98.7%，符合目标产物的纯度标准。需要指出的是，在对纯化产物进行HPLC分析检测时，通过方法优化，缩短了分离时间，因此对比图2和图4可以发现，图4中杂质和目标产物的保留时间均有所缩短。图4. 纯化产物的HPLC分析谱图。结果与讨论对于异构体的分离纯化，通常研究人员会采用手性分离柱或者高压制备柱配合高压制备液相色谱进行制备纯化，但是这类方法的成本问题十分令人头疼。本文中的应用案例表明，对于有些分离难度不大的异构体样品，中压制备分离也可以达到很好的分离纯化效果，无疑这将大大降低研究人员的制备成本，从而获得更好的效益。三泰科技出品的SepaBean machine配合SepaFlash系列C18反相纯化柱，可以为用户提供快速高效的样品制备纯化解决方案，助力实验室研究人员轻松完成各类样品纯化任务。如需进一步了解SepaBean machine的详细规格信息，或配套使用的Flash纯化柱订购信息，请访问ChemBeanGo在线商店：https://store.chembeango.com/。