药物中甲氧氯普胺检测方案(二手分析仪器)

启用 ISET 的 Agilent 1260 Infinity IIPrime 液相色谱仪 模拟 Waters Alliance 液相色谱仪对甲氧氯普胺及其杂质进行分析 作者 摘要 Melanie Metzlaff安捷伦科技公司 仪器间方法转移对很多行业来说都是一个至关重要的问题，受监管的制药行业中更是如此。安捷伦智能系统模拟技术 (ISET) 有利于在常规液相色谱系统与安捷伦UHPLC 系统之间实现分析方法的无缝转移。本应用简报展示了使用 ISET 将分析方法从 Waters Alliance 2695液相色谱仪直接转移到 1260 Infinity II Prime 液相色谱仪的过程。采用上述两种系统对甲氧氯普胺及其杂质进行分析。对不同实验中的保留时间与分离度进行评估与比较。 从常规 HPLC系统到 1260 Infinity II Prime液相色谱仪等 UHPLC 系统的分析方法转移，对很多实验室都是重要而且通常很关键的问题，对处于严格监管环境下的实验室更是如此。改变成熟的分析方法需要进行费时又昂贵的重新验证。1260 InfinityII Prime 液相色谱仪能够通过 ISET 对Waters Alliance 2695 液相色谱仪等传统液相色谱系统进行模拟。 多数液相色谱方法中都使用线性溶剂强度梯度。然而， Alliance 2695 液相色谱仪能够提供不同的梯度曲线，例如凹形和凸形的梯度曲线。启用了 ISET 的1260Infinity lI Prime 液相色谱仪可以模拟这些梯度曲线。 ( 本应用 简报介 绍了对 一 种止吐药物甲 氧氯 普胺 及 其七种不同杂 质 的分析。使 用 Waters A l liance 2 69 5 液 相色 谱仪 以 及凹 线 梯度 对 药物 混 合 物进 行 分 离 。再 用 I S E T 将分析方法 进一步 转移 到1 2 60 Infini ty II Pri m e 液相色 谱 仪。对 两 系 统得 到 的 保 留时间与 分 离 度进 行评 估 和 比较 。 ) 仪器 ( 采 用以下 仪器 对甲氧氯普胺 及 其杂 质 进行 分 析 ： ) ( 配 备双 波 长吸 收检测器 V WD 2487 的 Waters A lliance 2 695 高效 液相 色谱系 统 ) ( Agilent 1 2 60 In fi n i t y Il P rime 液 相色谱 仪 ： ) ( A gi l en t 1 260 Infin i t y Ⅱ 全能泵 (G 71 04C) ) ( A gilent 1260 I n finity I样 品 瓶 进样器 (G 7 129 C )，配 备集 成 式 样 品 冷 却( 选 件# 10 0) 以及 集成 式柱温箱 ( 6u L加 热器； 选 件 #0 66) ) ( Agilent 1260 Infi n i ty Ⅱl二极管阵 列 检 测器 WR ( G 7 1 1 5 A )，配 备一 个标准 1 0m m 流通 池 ( G 1 31 5- 6 0022) ) ( 软件 ) ( Agilent Ope n Lab C D S 2 . 2(M8413A) ， 使 用Op enL a b CDS 2.2 控 制 Wa t ers A lli a nce 2695 液 相色谱 仪，安 装 W aters DP 201 7R 2。 ) 实验中使用下列化合物： ( 盐酸甲氧氯 普胺 ) 杂质B：4-乙酰氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸甲酯 ( 杂质C： 4- 氨基- 5 - 氯 - 2 -甲氧基 苯甲 酸杂质 D： 4 - 乙酰氨 基- 2 -甲氧基苯甲酸 甲 酯 ) ( 杂质F： 4- 氨 基 - 5 -氯 - N - [ 2- ( 二乙氨 基 ) 乙基]- 2 -羟基 苯甲酰胺 ) ( 杂质G：N'- (4-氨 基 -5 - 氯 -2- 甲 氧 苯 甲 酰 基) - N，N-二 乙 基-1， 2 -乙 二胺- N- 氧 化 物 ) ( 杂质H：4 - 乙酰 氨基 -2 - 羟基苯 甲酸 ) ( 杂质9：4-氨基 -2- 甲氧基苯 甲 酸 甲 酯 每 种化合物 用 10 0% 乙 醇 溶 解至2 m g/mL 的浓度， 再 进一 步用水 稀 释 至2 0 ng/pL 的最终 浓度 。 ) 化学品 ( 所有试剂 均为 液 相 色 谱级。新制 超纯 水产 自配置 0.2 2 p m 膜式终 端过 滤 器(M ill i p a k) 的 Mi ll i -Q Inte gral 水 纯 化 系 统 。乙 腈购 自Merck (Darmstadt ， Germany)， 甲 酸 (FA) 购自 VWR (Darmstad t， German y ) 。甲氧氯 普胺购 自 Si gma-Aldrich (Ta u fkirchen， German y )， 甲 氧 氯普 胺 杂质购自 LGC Sta n dards ( T edd i ngton ， United Kingdom)。 ) 采用常规分析方法在 Waters Alliance2695液相色谱仪上，应用凹线梯度以及填充 5 um 填料的4.6×150 mm 色谱柱对甲氧氯普胺及其杂质进行分析。图1显示了10次连续运行的叠加色谱图，并将相应的保留时间与分离度列于表中。 参数 值 色谱柱 Agilent ZORBAX StableBond C18， 4.6×150mm，5 pm (部件号883975-902) 溶剂 A)0.1%甲酸水溶液 B)0.1%甲酸乙腈溶液 梯度 0 min -8% B 14min-66% B； 曲线814.1 min-8% B； 曲线6 停止时间 18 min 流速 2mL/min 进样 进样量：10pL，进样针清洗3s (60%乙腈水溶液) 样品温度 8°C 柱温 25°C DAD 270/4 nm， 参比波长关闭，5 Hz 编号 化合物 RT (min) RSD RT (%) 分离度 1 杂质F 7.50 0.12 一 2 杂质H 8.05 0.12 2.58 3 甲氧氯普胺 8.57 0.07 2.84 4 杂质9 8.93 0.07 2.16 5 杂质G 9.24 0.05 2.08 6 杂质C 10.57 0.04 9.93 7 杂质D 10.78 0.03 1.75 8 杂质B 12.57 0.01 16.46 图1.甲氧氯普胺及其杂质的分析。在 Waters Alliance 2695液相色谱系统上采集连续10次运行的叠加色谱图。色谱图中的绿色曲线表示溶剂比B 将分离甲氧氯普胺及其杂质的分析方法进一步转移到启用了 ISET 的1260 Infinity lIPrime 液相色谱仪。图2显示了得到的叠加色谱图以及相应的保留时间和分离度。 通过在 1260 Infinity lI Prime 液相色谱仪上启用 ISET， 凹线和凸线梯度曲线均可实现。OpenLab CDS 和 ChemStation中，11个不同的梯度图所用的编号与Waters 的编号相同。在这些实验中，使用了曲线8(凹线)和曲线6(线性)。 采用 ISET 将分析方法转移至1260 InfinityⅡ Prime 液相色谱仪时，能够获得与Alliance 2695 液相色谱仪生成的色谱图高度相似的结果。图3显示了分别在 1260 Infinity II Prime 液相色谱仪和Alliance 2695 液相色谱仪采集的色谱图对比。 100 8 杂质B 12.63 0.01 18.93 图2.甲氧氯普胺及其杂质的分析。在1260 Infinity lI Prime 液相色谱仪上采集连续10次运行的叠加色谱图。色谱图中的绿色曲线表示溶剂比B 图3.在启用了 ISET 的1260 Infinity II Prime 液相色谱仪上分析甲氧氯普胺及其杂质采集的叠加色谱图，以及在 Waters Alliance 2695 液相色谱仪上分析甲氧氯普胺及其杂质采集的色谱图 两种系统上保留时间表现出优异的一致性，最大偏差约为0.9%，远低于<±5%的规定保留时间偏差。此外，还测量了分离度偏差。除杂质H外，使用1260Infinity lI Prime 液相色谱仪运行时多数峰的分离度都更优异。表2显示了保留时间和分离度偏差的详细信息。 ISET 支持将传统方法由常规 HPLC 无缝转移到1260 Infinity lI Prime 液相色谱仪。通过启用 ISET 可以模拟 Waters Alliance液相色谱仪，即使运行凹线和凸线梯度也能实现。 ( 本应用简 报 将甲 氧 氯普胺 及 其杂质分析方 法从 Waters Allian c e 26 9 5 液相 色谱 仪 转 移至12 6 0 In f inity I I P rime 液 相色 谱仪。 保 留 时间和 分 离度都呈 现了优异 的 相 关 性。此 外 ，多 数峰的 分离 度均有 所增 加 。本应用简 报清 晰 表 现 出 IS E T 的 简便易 用性。无 需 改动 仪器 或改变分析方法即可 在 1260 Infini t y II P r im e 液相色谱仪上实现 对甲 氧氯 普胺 及 其杂质的分析。 ) 表 2. Waters Alliance 2695 液相色谱仪与1260 Infinity II Prime液相色谱仪的保留时间与分离度比较 化合物 RT 偏差 (min) RT偏差(%) 分离度偏差 分离度偏差(%) 杂质F -0.02 -0.27 一 - 杂质H -0.07 -0.90 -0.20 -8.28 甲氧氯普胺 0.02 0.23 0.73 20.48 杂质9 0.02 0.22 0.13 5.58 杂质G 0.02 0.23 0.12 5.25 杂质C -0.01 -0.09 0.58 5.51 杂质D 0.05 0.46 0.71 28.76 杂质B 0.06 0.48 2.47 13.06 ( 参考文献 ) ( 1 . . G r atzfeld- H uesgen， A . Agi l ent 1290 ) ( Infin i ty Binary L C System wit h I S ET - ) ( Emulation of t he Waters All i an c e ) 2695 LC system analyzingβ- blockers (启用 ISET 的 Agilent 1290 Infinity 二元液相色谱系统一模拟 Waters Alliance 2695 液相色谱系统 分析β-阻滞剂)，安捷伦科技公司 应用简报，出版号5991-1603EN， 2014 2. Agilent InfinityLab LC with ISET (启 用 ISET 的 Agilent Infinity 液相色谱 仪)，安捷伦科技公司用户手册， 部件号 G7120-90310，2017 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线： 800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 本文中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 使用ISET将分析方法从Waters Alliance 2695液相色谱仪直接转移到1260 Infinity II Prime液相色谱仪的过程。 采用上述两种系统对甲氧氯晋胺及其杂质进行分析。 对不同实验中的保留时间与分离度进行评估与比较。保留时间和分离度都呈现了优异的相关性 此外，多数峰的分离度均有所增加。