盐酸头孢吡肟中有机溶剂残留检测方案(二手分析仪器)

广东 药学 院学 报JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACY第21卷第2期2005年4月Vol.21 No. 2Apr. 2005 第2期 何志强.顶空气相色谱法测定盐酸头孢吡肟中残留溶剂 顶空气相色谱法测定盐酸头孢吡肟中残留溶剂 何志强(广州市药品检验所 广东广州510160) 摘 要 目的建立盐酸头孢吡肟中有机残留溶剂的测定方法。方法顶空气相色谱法。色谱条件：采用 DB 624 (0.35 mm IDx30 mx3.0 p.m)6%基丙苯基、94%甲基聚硅氧烷毛细管色谱柱；柱温：45℃；气化室温度：150℃；检测室温度：280℃；N， 为载气；柱前压力为 75 kPa；H，流速：50 mL/min；空气流速：500 mL/min。结果甲醇在159~636 p.g/mL，丙酮在258-1033 pg/mL，二氯甲烷在30~122 pg/mL，四氢呋喃在148~593 pg/mL 质量浓度范围均呈良好的线性关系。平均回收率(n=6)分别为100.2%，RSD=6.5%；92.5%，RSD=3.7%；102.6%，RSD=6.7%；103.7%， RSD=3.1%。结论本方法操作简便、结果准确，是控制盐酸头孢吡肟中残留溶剂的可靠方法。 关键词 顶空气相色谱法；盐酸头孢吡肟；有机溶剂 中图号 R927 文章编号：1006-8783(2005)02-0150-03 文献标识码：A Headspace gaschromatographic analysisof residualSsolventsiin samplesof cefepimehydrochloride HE Zhi-qiang (Guangzhou Institute for Drug Control， Guangzhou 510160， China) Abstract Objective and Method Headspace gas chromatography was used to analyze the residual solvents in the samples ofcefepime hydrochloride with DB 624 capillary column (30 mx0.35 mmx0.3 pm). The operating conditions were： nitrogen asthe carrier gas， 75 kPa of column inlet pressure， 45℃ of column temperature， 150℃ of flame ionization detector and 280 ℃ ofinjector. Results The calibration curves for methanol， acetone， dichloromethane and tetrahydrofuran were linear over the ranges of159-636 pg/mL (r=0.9960， n=5)， 258~1033 pg/mL (r=0.9990，n=5)， 30~122 pg/mL (r=0.9975， n=5) and 148 ~593 pg/mL (r=0.9992， n=5)， respectively. The average recoveries of methanol， acetone， dichloromethane and tetrahydrofuranwere 100.2%(RSD=6.5%，n=6)，92.5%(RSD=3.7%，n=6)，102.6%(RSD=6.7%， n=6) and 103.7%(RSD=3.1%，n=6)， respectively. Conclusion The procedure provides a simple and sensitive method for monitoring residual solvents inthe samples of cefepime hydrochloride. Key words headspace gas chromatography； cefepime hydrochloride； residue solvent 盐酸头孢叫肟是第四代广谱头孢菌素，日本药局方，美国药典2已收载。国内也有药厂合成。由于在合成过程中使用过甲醇、丙酮、二氯甲烷和四氢呋喃等有机溶剂，关于盐酸头孢吡肟中残留溶剂的检测尚未见文献报道，按照“人用药品注册技术要求协调会(简称ICH)”3]残留溶剂的指导原则，本文建立顶空气相色谱法测定盐酸头孢吡肟中甲醇、丙酮、二氯甲烷和四氢呋喃残留量。方法简便、结果准确。 实验部分 1.1 仪器与试药 日本岛津 GC-14A气相色谱仪，带 HGS-2气体 ( 作者简 介 ：何志强，男，50岁，药师 。 ) ( 研 究 方向：药品检验和质量标准研究。 ) 进样阀，定量管2mL，FID 检测器， ClassGC-10A 工作站。盐酸头孢吡肟为国内某厂提供。甲醇、丙酮、二氯甲烷和四氢呋喃均为AR 级试剂，水为无残留溶剂的去离子水。 1.2 色谱条件 DB 624(0.35 mm I.Dx30 m×3.0 pm) 6%氰丙苯基、94%甲基聚硅氧烷毛细管色谱谱；柱柱：45℃；气化室温度：150℃；检测室温度：280℃；N，为载气；柱前压力为75 kPa；H，流速：50mL/min；空气流速：500 mL/min；量程：10'。 1.3 测定方法 标准贮备液①精密称取甲醇约0.06g、丙酮约0.1g、二氯甲烷约0.012 g、四氢呋喃约0.06 g，置100 mL量瓶中加水溶解至刻度，摇匀，备用。 标准贮备液②精密称取甲醇约0.06g、丙酮约0.1 g、二氯甲烷约0.012 g、四氢夫喃约0.1 g，置 100 mL量瓶中加水溶解至刻度，摇匀，备用。 精密量取标准贮备液②适量，用水定量稀释至每1mL中含甲醇、丙酮、二氯甲烷、四氢呋喃分别约为300、500、60、500 pg 的对照溶液。精密量取1 mL置顶空瓶中，加塞，密封，作为对照品溶液；另精密称取样品约0.1g至顶空瓶中加水1mL使溶解，加塞，密封，作为供试品溶液。分别置80℃烘箱中加热30 min，抽取顶空气体约5 mL，精密注入气相色谱仪2mL，记录色谱图，按外标法以峰面积计算甲醇、丙酮、二氯甲烷和四氢呋喃的残留量。 2实验结果 2.1 分离与鉴别 按上述色谱条件，甲醇、丙酮、二氯甲烷、四氢呋喃的分离情况见图1A，甲醇、丙酮、二氯甲烷、四氢喃的保留时间分别为1.632.262.61 4.36 min，各组分分离完全，理论板数以丙酮峰计算为8556。样品分离在相同的保留时间出现相应的色谱峰，未见杂峰对测定有影响，见图1B。再观察样品加入又照品的分离情况，对应峰重叠，峰形没有改变。 2.2 重复性试验 取“1.3”项下的对照品溶液重复操作6次，以峰面积计算甲醇、丙酮、二氯甲烷和四氢呋喃的相对标准偏差(RSD)，结果分别为9.4%，4.8%，9.9%和3.8%。满足药典规定以外标法测定，所得待测物的相对标准偏差(RSD)不大于10%的要求[4]0 2.3 线性范围与关系 精密量取标准贮备液①适量，用水制成每1 mL中分别约含甲醇150、225、300、450、600 pg，丙酮250、375、500、750、1000 pg，含二氯甲烷30、45、60、90、120pg，含四氢呋喃150、225、300、450、600 pg的混合对照溶液，作为线性溶液①、②、③、④、⑤各精密量1 mL 置顶空瓶中，加盖，密封，分别置80℃烘箱内加热30 min，抽取顶空气体约5mL，精密注入气相色谱仪2 mL，记录色谱图，以峰面积为横坐标(X)，相应的质量浓度为纵坐标(Y)，求一元线性回归方程。分别得： Y丙酮=0.00053637X-5.9718，r=0.9990； Y甲烷=0.00029508X+1.0579，r=0.9975； Y四喃=0.00022560X-4.3260，r=0.9992。 甲醇在195-636 pg/mL，丙酮在258~1033 pg/mL，二氯甲烷在30~122 pg/mL，四氢呋喃在148~593pg/mL浓度范围均呈良好的线性关系。 1甲醇2丙酮3二氯甲烷4四氢呋喃 图1对照品(A)和样品(B)溶液色谱图 Fig.1 Gas chromatogram of the controls and samples 2.4 样品测定 按“1.3”项下测定方法测定，三批样品结果见表1. 2.5 回收试验 精密称取已测定甲醇、丙酮、二氯甲烷、四氢呋喃含量的样品约0.1g，六份，分别置顶空瓶中，精密加入线性溶液②，③，④各1mL 溶解后，加塞，密封，分别置80℃烘箱内加热30 min，抽取顶空气体约5mL精密注入气相色谱仪2 mL，记录色谱图，按加样回收计算回收率，结果见表2。甲醇、丙酮、二氯甲烷、四氢呋喃的平均回收率(n=6)分别为100.2%，RSD=6.5%；92.5%，RSD=3.7%；102.6%，RSD=6.7%；103.7%，RSD=3.1%。 ￥甲醇=0.0081845X-0.7487，r=0.9960； 表1样品测定结果(残留溶剂/%) Tab.1Assay results of the sample(n=5) 批号 甲醇 平均 丙酮 平均 二氯甲烷 平均 四氢喃 平均 040201 0.10，0.11 0.01 0.01，0.01 0.01 /，/ / /，/ / 040202 0.14，0.15 0.14 0.01，0.01 0.01 /，/ / /./ / 040203 0.14，0.18 0.16 0.01，0.01 0.01 /，/ / /./ / 表2回收试验结果 Tab.2Results of recovery test 溶剂 p(加入)/(pg/mL) p(测得)/(pg/mL) 回收率/% 平均回收率/% RSD/% 甲醇 243.3 238.4，263.3 98.0，108.2 100.2 6.5 324.4 349.7，317.3 107.8，97.8 486.5 474.8，446.1 97.6，91.7 丙酮 382.0 346.1，374.7 90.6，98.1 92.5 3.7 509.4 469.2，456.9 92.1，89.7 764.2 726.8，683.2 95.1，89.4 二氯甲烷 45.40 44.54，48.35 98.1，106.5 102.6 6.7 60.60 58.84，57.99 97.1，95.7 90.90 103.17，94.99 113.5，104.5 四氢呋喃 244.8 263.4，252.4 107.6，103.1 103.7 3.1 326.4 342.0，337.8 104.8，103.5 489.5 515.4，480.2 105.3，98.1 3讨论 3.1 用经典的顶空分析方法，在操作上需要注意加热温度、时间和操作的均一性。本方法采用烘箱加热，把烘箱置于进样阀旁，样品瓶与注射器同置于80℃烘箱内，同时均匀加热30 min 后，经穿戴隔热手套，用气密注射器迅速抽取约5 mL 的顶空气体，马上连接带2 mL定量管的进样阀，立刻把气体注入气相色谱仪，结果可得到良好的重现性。 3.2 测定3批样品，均未检出二氯甲烷和四氢呋喃，经实验，按信噪比3：1计算，甲醇、丙酮、二氯甲烷、四氢呋喃的最小检出质量浓度分别为0.63、0.06、0.05、0.04 pg/mL。 (上接第142页) 表310批鱼腥草药材相似度计算结果 Tab.3Similarity evaluation of Houttuynia cordatd Thunb 批号 数据文件 相似度(参照) 相似度(对照) S1 yxc11.cdf 1.000 0.991 S2 yxc2. cdf 0.978 0.993 S3 yxc3. cdf 1.000 0.991 S4 yxc4. cdf 1.000 0.991 S5 yxc5. cdf 1.000 0.991 S6 yxc6. cdf 0.955 0.979 S7 yxc7. cdf 0.928 0.957 S8 yxc8. cdf 0.977 0.997 S9 yxc9. cdf 0.990 0.997 S10 yxc10. cdf 0.980 0.998 5.5 本文只对广州产地的10批鱼腥草进行了研究，当判断其他批次或产地的药材是否符合要求时， 3.3 甲醇、丙酮、二氯甲烷、四氢呋喃的标准浓度与样品浓度参照 ICH 对甲醇、丙酮、二氯甲烷和四氢呋喃限度要求设计，即甲醇、丙酮、二氯甲烷和四氢呋喃分别不得过0.3%，0.5%，0.06%和0.5%。 3.4本方法样品可溶于水，采用顶空气相色谱法，操作简便，结果准确、可靠。 ( 参考文献 ) ( [ 1 ] JP XⅣ [ S].362. ) ( [ 2 ] USP27 [ S].2000.357. ) ( [ 3 ]IC H 指导委员 会 .药品注册的国际技术 要 求[ M ].北京： 人民卫 生 出版社，2000.236. ) ( [ 4 ] 中国药典 ( 2000年版第二 部) [S ] .附录 6 4. ) ( (2004-10-20收稿；2005-02-30修回) ) 可将其指纹图谱与此对照用指纹图谱进行相似度的比较，如果大于0.9，则此药材可作为投料使用(其他项也应符合药典规定)。 5.6此软件判断具有客观性，减少人为误差，也减少了按以前指纹图谱统计方法来统计的工作量，值得推广。 ( 参考文献 ) ( [1]刘永隆.鱼腥草挥发油化学成分的研研[ J ].植物学报， 1979，21( 3 )：244. ) ( [2]胡英杰，符林 春 ，朱 宇 同，等.反相 H PLC 法测定鱼腥草及其制剂 中 皮甙的含量[J].中药新药与临床药理 ， 1999，10(4)：232. ) ( (2004-12-10收稿：2005-04-08修回) ) 建立盐酸头孢吡肟中有机残留溶剂的测定方法。方法顶空气相色谱法。色谱条件：采用DB624（0.35mmI.Dx30mx3.0μm）6%氰丙苯基、94%甲基聚硅氧烷毛细管色谱柱；柱温：45'C;气化室温度：150'C;检测室温度：280'C;N2为载气；杜前压力为75kPa;H2流速：50mL/min;空气流速：500mL/min。结果甲醇在159-636μg/rnL,丙酮在258-1033μg/mL,二氯甲院在30-122μg/mL,四氢呋喃在148-593μg/mL质量浓度范围均呈良好的线性关系。平均回收率（n=6）分别为100.2%,RSD=6.5%;92.5%,RSD=3.7%;102.6%,RSD=6.7%;103.7%,RSD=3.1%。结论本方法操作简便、结果准确，是控制盐酸头抱吡肟中残留溶剂的可靠方法。