蜂蜜中氯霉素检测方案(二手分析仪器)

蜂蜜中氯霉素的检测、确认和定量 联用 Agilent 1260 Infinity lI液相色谱系统与Agilent Ultivo LC/TQ 系统 Vikrant Goel 安捷伦科技有限公司 本应用简报介绍了使用Agilent 1260 Infinity lI 液相色谱与 Agilent Ultivo LC/TQ 的联用系统分析蜂蜜样品中皮克级的极低含量氯霉素 (CAP)。此方法采用 Agilent UltivoLC/TQ 开发，尽管该系统体积小巧，但结果毫不逊色。此应用是食品行业中蜂蜜生产、加工和商业化样品常规检测的理想选择，也十分适合用于学术研究目的。使用基于液液萃取 (LLE) 的简单样品前处理方法，能够成功实现基质中 50 ppt 的定量限(LOQ)。 前言 CAP 是一种能够抑制蛋白质合成的广谱抗生素，长期接触会导致罕见且严重的血液疾病(再生障碍性贫血)以及骨髓损伤。由于 CAP 对人体具有明显的毒性作用，因此食品中的含量不得高于 0.3 ppb的最低性能要求限值(MRPL)12。 图 1. CAP和气代 CAP 三重四极杆 LC/MS 系统是美国、欧盟、FSSAI 和其他国家/地区用于确认蜂蜜中CAP 的金标准。本应用采用最新款三重四极杆 LC/MS 系统 Ultivo LC/TQ。使用Ultivo LC/TQ 获得的灵敏度优于欧盟食品法规规定的 MRPL。 此工作流程仅使用 LLE， 而传统方法需要结合 LLE 和固相萃取(SPE)。由于省去了SPE 步骤，我们实现了一种简单、省时的高性价比解决方案(图2)3.4.5。 通过采用结构相似的 CAP-ds 作为内标以减少变异，这一基于 Ultivo LC/TQ 的解决方案展现出了优异的特异性、线性和稳定性，能够提供可靠的结果。 图2.基于 LLE的样品前处理 由于规定的 MRPL 为 300 ppt，大多数分析实验室普遍将 100 ppt 设置为常规LOQ。所提出的方法的检测限(LOD)为25ppt。但是，考虑到蜂蜜产品的多样性，建议的 LOQ为 50 ppt。图3的MRM色谱图展示了稀释剂空白、LOD 和 LOQ。此外，通过进样各种浓度的 CAP 稀释液，获得了可重现的洗脱曲线，如图4所示。表2显示了六次重复测定获得的CAP浓度计算值的变异系数 (CV%)数据。 表2. Agilent Ultivo LC/TQ 条件 采集时间(min) 参数 设置 图 3. Agilent Ultivo LC/TQ 分析 CAP 的灵敏度 采集时间 (min) 图4.各种浓度 CAP的叠加色谱图 校准和线性 2.6- CAP 在50-600 ppt浓度范围内生成了相对响应 (CAP与 CAP-ds 的峰面积比)的校准线性图(图5)。为实现数据的严谨性，在每个浓度水平下进行三次重复测定，在LOQ水平下进行六次重复测定。图6所示为校准表截图，其中包含一个定量离子、两个定性离子以及 MRM比，符合法规要求。 蜂蜜样品的定量分析 相对浓度 将该方法扩展到市售蜂蜜样品。蜂蜜购自印度德里的当地商店(品牌1、品牌2和品牌G)和路边摊贩(当地样品和当地样品2)。所有样品进行三次重复测定。图7表明，结果报告的 CAP 浓度低于EU-MRPL 浓度 300 ppt。 图5.50-600 ppt范围内的线性曲线 (R?=0.9953) Sample CAP Met. CAP Results Qualifier. Qualifier_ CAP-IS (ISTD) R. Type / Level Acq. Date-Time (Inst.) Exp. Conc. RT Calo. Conc. Aocuracy ISTD Resp. Ratio Ratio Ratio RT Blank 8/24/2018 4：18 AM 2.59 0.00 0.0061 208.3 2.72 Cal 1 8/24/2018 1：54 AM 50.00 2.73 43.47 86.9 0.2061 87.3 47.7 2.73 Cal 1 8/24/2018 2：06 AM 50.00 2.73 42.73 85.5 0.2031 110.6 44.4 2.73 Cal 1 8/24/2018 2：12 AM 50.00 2.73 48.06 96.1 0.2244 92.0 38.5 2.73 Cal 1 8/24/20182：18 AM 50.00 2.73 48.88 97.8 0.2277 84.6 40.7 2.72 Cal 1 8/24/2018 2：24 AM 50.00 2.73 49.16 98.3 0.2288 104.3 47.7 2.73 Cal 1 8/24/2018 2：30 AM 50.00 2.73 42.17 84.3 0.2008 80.7 39.1 2.73 Cal 2 8/24/2018 2：42 AM 75.00 2.73 86.21 114.9 0.3768 88.0 41.5 2.72 Cal 2 8/24/2018 2：48 AM 75.00 2.73 82.51 110.0 0.3621 105.0 43.3 2.73 Cal 2 8/24/2018 2：54 AM 75.00 2.73 81.06 108.1 0.3563 87.4 47.4 2.72 Cal 3 8/24/2018 3：06AM 100.00 2.73 89.71 89.7 0.3908 96.7 48.9 2.72 Cal 3 8/24/2018 3：12 AM 100.00 2.73 89.93 89.9 0.3917 100.9 39.7 2.72 Cal 3 8/24/2018 3：18 AM 100.00 2.73 91.81 91.8 0.3992 90.0 38.6 2.72 Cal 4 8/24/2018 3：24 AM 200.00 2.73 219.27 109.6 0.9086 103.6 47.5 2.72 Cal 4 8/24/2018 3：36 AM 200.00 2.73 217.76 108.9 104.5 46.3 272 Cal 4 8/24/2018 3：42 AM 200.00 2.73 205.06 102.5 0.8518 109.8 46.2 2.72 Cal 5 8/24/2018 3：48 AM 400.00 2.72 399.33 99.8 1.6281 90.5 43.9 2.71 Cal Cal Cal 5 5 8/24/2018 3：54 AM8/24/2018 4：00 AM 400.00400.00600.00 2.722.71 380.87412.19 95.2103.0 1.5543 95.3 46.6 43.7 42.2 2.71 Cal 6 6 8/24/2018 11：48 AM8/24/2018 11：54 AM 600.00 94.3 94.6 98.3 43.3 2.71 2.72 2.71 Cal 6 8/24/201812：00 PM 600.00 2.71 626.66 104.4 2.5366 95.1 41.4 2.71 图 6.50-600 ppt范围内 CAP 的校准表 蜂蜜样品中的回收率 不包含2.73±0.1分钟处的色谱峰且离子比符合 EU指南规定的样品被视为阴性样品6。品牌G样品的 CAP 浓度高于 LOD值，，：当地样样2的 CAP 浓度高于 LOQ值。此外，通过向蜂蜜样品中添加 50 pptCAP 进行加标实验，如图7所示。在表 3所示的加标研究中，所有五个样品均表现出了良好的回收率(80%-120%)，证实了所提出的方法适用于对蜂蜜进行常规CAP 分析。 本方法的 LOQ 是 EU-MRPL的1/6。本研究中的 LC 方法使用 Agilent InfinityLabPoroshell 120， 2.7 pm 色谱柱在低压下实现了 UHPLC 分离。基于 LLE的样品前处理方法采用简单且省时的步骤。根据欧盟标准，成功分析了真实蜂蜜样品中的 CAP。 图7.市售样品和以 LOQ浓度加标的市售样品 表3.各种蜂蜜中的氯霉素 市售样品 加标前浓度(a) 加标后浓度(b) %回收率=100(b-a)/50 品牌1 ND 41.35 ppt 82.69% 品牌2 ND 41.98 ppt 83.96% 品牌G 28.37 ppt 78.47 ppt 100.20% 当地样品 ND 47.18 ppt 94.35% 当地样品2 145.75 ppt 199.25 ppt 107.0% ( 1. Scientific Opinion on Chloramphenicolin F ood and Feed. EFSA Journal 2014，12(11)，3907 ) 2. Commission Decision 2003/181/EC 3. Fang， Y. et al. Detection， Confirmation， and Quantification of Chloramphenicol in Honey and Shrimp at Regulatory Levels Using Quadrupole and Ion Trap LC/MS Application(使用四极杆和离子阱 LC/MS 在监管浓度下对蜂蜜和虾中 的氯霉素进行检测、确认和定量)， 安捷伦科技公司应用简报，出版号 5988-9920EN，2007 4. Zhao， L. 等， 使用 Agilent SampliQ OPT 固相萃取柱和液相色谱-串联质 谱测定蜂蜜中的氯霉素、氟甲砜霉素 和甲砜霉素，安捷伦科技公司应用简 报，出版号5990-3615CHCN， 2009 5. Jin-Lan，S. 等， 采用 LC-MS/MS 结合 改进的 QuEChERS 方法对动物源食 品中的36种兽药进行筛查，安捷伦 科技公司应用简报，出版号5991- 0013CHCN，2012 6. SANTE/11813/2017 www.agilent.com/chem 本文中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 ◎安捷伦科技(中国)有限公司，2019 查找当地的安捷伦客户中心：www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线：800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn 使用 Agilent 1260 Infinity II 液相色谱与 Agilent Ultivo LC/TQ 的联用系统分析蜂蜜样品中皮克级的极低含量氯霉素 (CAP)。此方法采用 Agilent Ultivo LC/TQ 开发，尽管该系统体积小巧，但结果毫不逊色。此应用是食品行业中蜂蜜生产、加工和商业化样品常规检测的理想选择，也十分适合用于学术研究目的。使用基于液液萃取 (LLE) 的简单样品前处理方法，能够成功实现基质中 50 ppt 的定量限(LOQ)。